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USO DE EXTRACTOS ACUOSOS Y ETANÓLICOS DE PLANTAS PARA EL CONTROL DE

MELOIDOGYNE ENTEROLOBII (NEMATODA: TYLENCHIDA)

Article · June 2015

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 USO DE EXTRACTOS ACUOSOS Y ETANÓLICOS DE PLANTAS PARA EL CONTROL DE
MELOIDOGYNE ENTEROLOBII (NEMATODA: TYLENCHIDA)
Osmar Quevedo, Renato Crozzoli y Guillermo Perichi
Universidad Central de Venezuela, Facultad de Agronomía, Instituto de Zoología Agrícola, Laboratorio de Nematología
Agrícola, Apdo. 4579, Maracay 2101, Venezuela.
RESUMEN
Quevedo, O., Crozzoli, R. y Perichi, G. 2010. Uso de extractos acuosos
y etanólicos de plantas para el control de Meloidogyne enterolobii.
(Nematoda: Tylenchida). Fitopatol. Venez. 23:45-53.
Se evaluaron 6 extractos acuosos (EA) y 6 etanólicos (EE) de hojas de
Anacardium occidentale, Calotropis procera, Chenopodium
ambrosioides, Coffea arábica, Eryngium foetidum y Ruta graveolens
para el control de juveniles de segundo estadio (J2) de Meloidogyne
enterolobii. Los EA se prepararon macerando 50 g de hojas de las
plantas en 200 ml de agua destilada durante 24 h. Luego, la mezcla
fue triturada en licuadora y filtrada a través de papel de filtro Nº 1.
Para la obtención de los EE se secaron las hojas de las plantas a la
sombra, se pulverizaron en licuadora y se maceraron 100 g en 400 ml
de etanol (96%) por 2 semanas. La solución fue filtrada a través de 4
capas de gasa y colocada en un evaporador rotatorio. El alcohol fue
separado por destilación y el extracto puro obtenido fue envasado en
frascos ámbar y almacenado en un refrigerador (4 °C) para su posterior
uso. Las soluciones obtenidas, designadas como estándar (100%)
fueron diluidas con agua destilada hasta lograr concentraciones de
12,5; 25; 50 y 100% para EA y 0,05; 0,10 y 1% para EE. Tanto para EA
como EE adicionalmente se incluyó un testigo con agua destilada
solamente. Por cada concentración, repetida 4 veces, se utilizaron 20
J2 para un total de 80 J2/concentración. Las observaciones de
mortalidad se realizaron a las 24, 48 y 72 h. El EE de C. ambrosioides
indujo 100% de mortalidad en todas las concentraciones (0,05; 0,10 y
0,1%) y desde el menor tiempo de exposición (24 h). Los EA de C.
arabica y C. ambrosioides en 100% de concentración, indujeron 100%
de mortalidad de los J2 de M. enterolobii. A. occidentale y R. graveolens
a una concentración de 100% (48 y 72 h) y C. ambrosioides a una
concentración de 100% (24 h), lograron porcentajes de mortalidad
que oscilaron entre 51,25 y 87,5%. La actividad nematicida demostrada
por C. ambrosioides, C. arábica y A. occidentale, hace necesario
continuar con otros estudios para evaluar su efectividad en el suelo.
Palabras clave adicionales: extractos de plantas, in vitro, nematodo
agallador.
INTRODUCCIÓN
El nematodo agallador, Meloidogyne enterolobii Yang &
Eisenback, es considerado, en la actualidad, una de las
especies más importantes del género; ataca a una gran
cantidad de cultivos siendo particularmente patogénico en
guayabo y cafeto, y puede reproducirse en plantas que
presentan resistencia a otras especies del género. Este
nematodo es capaz de vencer numerosos genes de resistencia
y debe ser considerado como una plaga muy importante en
los cultivos de América Tropical y Subtropical (7,8).
Generalmente, para el control de nematodos agalladores,
el método empleado con mayor frecuencia, debido a su
efectividad, ha sido el uso de nematicidas químicos ya que
la utilización de variedades resistentes está muy limitada
debido, para muchas especies, a la falta de materiales y, la
rotación de cultivos, se hace difícil debido al amplio rango
ABSTRACT
Quevedo, O., Crozzoli, R. and Perichi, G. 2010. Use of aqueous and
ethanolic extracts of plants to the control of Melodoigyne enterolobii.
(Nematoda: Tylenchida). Fitopatol. Venez. 23:45-53.
Screening of 6 plant aqueous (AE) and ethanolic extracts (EE)
against second stage juveniles (J2) of Meloidogyne enterolobii was
conducted. These extracts were obtained from leaves
ofAnacardium occidentale, Calotropis procera, Chenopodium
ambrosioides, Coffea arábica, Eryngium foetidum and Ruta
graveolens. The AE were prepared by soaking 50 g of leaves in
200 ml distilled water for 24 h. Leaves were comminuted in a
blender and the suspension filtered through a filter paper Nº 1.
The EE were prepared by dried the leaves to the shade,
comminuted in a blender and soak 100 g in 400 mL Ethanol
(96%) for 2 weeks. The suspension was filtered through a four
layers gauze and placed in a rotatory evaporator. The alcohol
was distilled and the extracts obtained were placed in a little
vessel amber and stored in a refrigerator (4 ºC) for their posterior
use. These filtrates were designed as standard (100%) and were
diluted with distilled water to provide 12,5%; 25%; 50% and 100%
for AE and 0,05%; 0,10% and 1% for EE. For each concentration,
repeated 4 times, 20 were used for a total of 80 J2/concentration.
The nematode mortality was evaluated at 24, 48 and 72 h. Results
showed that EE of C. ambrosioides leaves induced mortality of
100% in all concentrations (0,05; 0,1 y 1%) after 24 h. AE of C.
arabica and C. ambrosioides at 100% concentration induced
mortality of 100% (48 y 72 h). R. graveolens 100% concentration
(48 y 72 h) and C. ambrosioides 100% concentration (24 h), induced
mortality between 51,25% and 87,5%. Further studies to
determine the efficacy in the soil of extracts of C. ambrosioides,
C. arabica and A. occidentale, is necessary.
Additional keywords: in vitro, plant extracts, root-knot nematodes.
de hospedantes que las mismas poseen. Debido a la
contaminación que causa el uso de químicos, los elevados
costos de producción, así como el deseo de propiciar prácticas
conservacionistas y ecológicas se han llevado a cabo
investigaciones con plantas que poseen metabolitos
secundarios con efecto nematicida o nematostático. Se han
hecho importantes estudios con algunas plantas, usándose
sus hojas, semillas y raíces en forma de extractos acuosos,
extractos obtenidos con solventes orgánicos o simplemente
como abono verde, obteniéndose resultados prometedores
(1,19,20).
Han sido comprobadas las propiedades nematicidas del
nim (Azadirachta indica Juss.), la cineraria (Cineraria
marítima DC.), el espárrago (Asaparagus officinalis L.), el
clavel de muerto (Tagetes spp.), el algodón de seda
(Calotropis procera Ait.), la menta (Mentha longifolia L.), el
romero (Rosmarinus officinalis L.), la mejorana dulce
Fitopatol. Venez. 45
(Origanum majorana L.), el tomillo (Thymus vulgaris L.) y
la yuca (Manihot esculenta Krantz.). El uso de estas plantas
como extracto o abono verde, ha proporcionado resultados
satisfactorios en el control de nematodos fitoparásitos,
demostrando que existe la posibilidad de reducir los costos
de producción y las consecuencias negativas en el ambiente,
en los alimentos y en el ser humano (10,15,16).
Estudios realizados en Venezuela con extractos acuosos
y abonos verdes de C. procera señalan el efectivo control
sobre M. incognita (82,3% de mortalidad) (2). En otro estudio,
Reina et al. (12), evaluaron el efecto nematicida de extractos
acuosos de la misma planta sobre diferentes especies de
nematodos y señalaron la alta mortalidad causada a los
juveniles de segundo estadio de M. incognita, Meloidogyne
exigua Göeldi y Tylenchulus semipenetrans Cobb. Asimismo,
Sánchez et al. (14), comprobaron que las hojas de C. procera
aplicadas como abono verde a razón de 10 ton/ha controlan
efectivamente a M. incognita; sin embargo, en algunos casos
afectaban significativamente el crecimiento de plantas de
pepino (Cucumis sativum L.) por lo que se presume posea
un efecto alelopático para esta especie. Steling et al. (19),
comprobaron el efecto nematicida que posee la ruda (Ruta
graveolens L.) sobre M. incognita. Vinueza et al. (20),
evaluaron, in vitro, el efecto nematicida de diferentes plantas
para el control del mismo nematodo nematodo logrando, con
el fruto verde de tártago (Ricinus comunis L.) y las
inflorescencias de cebadilla [Schoenocaulon officinale
(Schlecht & Champ) Gray] una mortalidad de 100%.
Con relación a M. enterolobii, no existen referencias de
control utilizando extractos de plantas o abonos verdes. En
este sentido, para dar continuidad a los estudios de control
de nematodos con medidas alternativas que se desarrollan
en el Laboratorio de Nematología Agrícola y a la vez ensayar
con solventes orgánicos como métodos de extracción de los
metabolitos, se realizó este trabajo cuyo objetivo fue el de
evaluar, in vitro, el efecto de diferentes concentraciones de
extractos acuosos y etanólicos de seis especies de plantas
para el control de los J2 de M. enterolobii.
MATERIALES Y MÉTODOS
Para evaluar la capacidad nematicida de los extractos
acuosos y etanólicos de hojas de algodón de seda (Calotropis
procera), café (Coffea arabica L.), cilantro de monte
(Eryngium foetidum L.), merey (Anacardium occidentale L.)
y pasote (Chenopodium ambrosioides L.) y ruda (Ruta
graveolens L.), creciendo en el Campus de la Facultad de
Agronomía de la Universidad Central de Venezuela en
Maracay, estado Aragua, sobre los juveniles de segundo
estadio (J2) del nematodo agallador Meloidogyne enterolobii,
se realizaron estudios in vitro en el Laboratorio de
Nematología Agrícola de la Facultad de Agronomía de la
Universidad Central de Venezuela, núcleo Maracay.
Para preparar los extractos acuosos, se tomaron 50 g de
hojas verdes de las diferentes plantas adultas, se cortaron
en trozos de ca 0,5 cm y se depositaron en un vaso de
precipitado, luego se mezclaron con 200 ml de agua destilada
y se dejaron remojar por 24 h. Al transcurrir el lapso, se
trituraron en una licuadora durante 30 seg y la solución se
filtró dos veces a través de papel de filtro Nº 1. La solución
obtenida fue considerada como estándar (100%); partiendo
46 Vol. 23, Nº 2, 2010
de esta solución y agregando agua destilada en cantidades
adecuadas, se prepararon las siguientes concentraciones:
12,5%; 25%; 50% y 100 %. Adicionalmente se incluyó un
testigo con agua destilada solamente (0%).
Para la obtención de los extractos etanólicos se secaron
las hojas de las plantas a la sombra, luego se pulverizaron
en licuadora y se maceraron 100 g de las mismas en 400 ml
de etanol (96%) por 2 semanas. La solución se filtró en 4
capas de gasa y se colocó en un evaporador rotatorio. El
alcohol fue separado por destilación y el extracto puro
obtenido fue envasado en un frasco ámbar y colocado en un
refrigerador (4 ºC) para su posterior uso (9). La solución
obtenida fue considerada como estándar y se prepararon
concentraciones de 0,05%; 0,10% y 1% agregando agua
destilada en cantidades adecuadas; adicionalmente se
incluyó un testigo con agua destilada solamente (0%).
Para las pruebas se colocaron 5 ml de cada concentración
en cápsulas de plástico de 5 cm de diám. En cada capsula se
agregaron 20 J2 del nematodo procedentes de plantas de
tomate cultivadas en umbráculo para tal fin. Cada
concentración fue replicada 4 veces para un total de 80 J2
por cada concentración evaluada. Las placas fueron colocadas
de forma completamente aleatoria en el Laboratorio de
Nematología Agrícola (T= 21-25 ºC).
Se utilizaron diseños de tratamientos en arreglos
factoriales de 6 x 5 x 3, con 6 plantas, 5 concentraciones (0;
12,5; 25; 50 y 100%) y tres momentos de avaluación (24, 48
y 72 h) para los extractos acuosos y 6 x 4 x 3, con 6 plantas,
5 concentraciones (0,05; 0,1 y 1%) y 3 momentos de evaluación
(24, 48 y 72 h) para los extractos etanólicos. Los experimentos
se condujeron en un diseño completamente al azar.
Para determinar la mortalidad de los nematodos,
aquellos que presentaban inmovilidad fueron estimulados
con una seta de cerdo en la región cefálica y los que luego
del estimulo no se movieron, fueron considerados muertos.
RESULTADOS
El análisis factorial de los efectos principales P (Planta),
C (Concentración) y T (Tiempo), para la variable mortalidad
de los J2 de M. enterolobii, indicó diferencias altamente
significativas (P=0,01) para la interacción PxCxT tanto para
extractos acuosos como etanólicos.
Con los extractos acuosos, las concentraciones de 100 %
causaron las mayores mortalidades. Para C. ambrosioides y
C. arabica la mortalidad alcanzada fue de 100 % a las 48 h,
mientras que con los extractos de las otras plantas, osciló
entre 80 % (R. graveolens) y 7,5 % (C. procera), alcanzadas a
las 72 h. Con los extractos etanólicos, se puede observar la
efectividad de C. ambrosioides; con la menor concentración
(0,01 %) logró, a las 24 h, una mortalidad de J2 de M. enterolobii
de 100%. Las mortalidades máximas logradas con los otros
tratamientos oscilaron entre 46,25% (C. arabica) y 13,75 %
(R. graveolens) todas alcanzadas a las 72 h (Cuadro 1).
Extractos acuosos
A medida que aumentó la concentración y el tiempo de
exposición, aumentó, en mayor o menor grado, la mortalidad
de los J2 de M. enterolobii con todos los extractos evaluados.
Los extractos acuosos de C. ambrosioides, en concentración
a la concentración de 1 % a las 72 h. Igualmente, la mortalidad
aumentó al incrementar la concentración y el tiempo de
exposición. Este comportamiento, es similar a los reportados
en anteriores trabajos (12,20). Al igual que en R. graveolens,
aparentemente, los metabolitos tóxicos a los nematodos
extraídos con agua son más efectivos o se encuentran en
mayores cantidades que los extraídos con etanol.
El extracto acuoso de C. ambrosioides, posee un notable
efecto nematicida sobre los J2 de M. enterolobii que
aumenta con el aumentar de las concentraciones hasta
alcanzar 100% de mortalidad con la concentración de 100%.
Inzunza et al. (5) ya habían comprobado la efectividad del
extracto acuosos de C. ambrosioides para el control de
Xiphinema americanum en Chile. El extracto etanólico de
C. ambrosioides logró controlar la totalidad de los J2 en
todas las concentraciones a partir de las 24 h. Esta planta
contiene sustancias antivirales, antibacteriales, fungicidas,
nematicidas y alelopáticas y ha sido cultivada en los Estados
Unidos para el control de nematodos; sin embargo, una
posible limitación de su uso es la presencia de un aceite
esencial como es la limonina, tóxica para las lombrices de
tierra (6,11). A diferencia de las demás plantas, el extracto
etanólico de C. ambrosioides ejerce una excelente acción
nematicida.
El extracto acuoso de R. graveolens controló las
poblaciones de J2 de M. enterolobii. Los resultados
obtenidos, corroboran los reportados por Sasanelli y
D’Addabbo (17), los cuales indicaron que el efecto
nematicida de R. graveolens sobre M. incognita, es tal que
puede compararse con el nematicida fenamiphos
(Nemacur). Según Grainge y Ahmed (3) y Reese y Holyoke
(13), los componentes químicos responsables de esta acción
no han sido identificados; se asume que sean los mismos
que poseenefecto insecticida como lo son la rutina
(flavonoide), la xantotoxina (cumarina) y dos alcaloides no
especificados. Igualmente, Inzunza et al. (5), comprobaron
el efectivo control de X. americanum con extractos acuosos
de esta planta, así como Steling et al. (19), comprobaron
su efectividad al aplicar la planta como abono verde para
el control de M. incognita. Sin embargo, es necesario evaluar
si las cantidades a aplicar, para lograr un adecuado control
no sean exageradas ya que el mayor control se logró con la
concentración de 100 %. No existe en la literatura revisada
ninguna cita que señale las propiedades nematicidas del
extracto etanólico de esta planta. De todas formas el control
logrado aún con la mayor concentración no fue satisfactorio
ya que apenas se alcanzó 13,75 % de mortalidad.
Los extractos acuosos de C. procera, R. graveolens y E.
foetidum y etanólicos de A. occidentale, C. procera y E.
foetidum, inactivaron parte importante de los J2 sin causar
mortalidad. Los insecticidas de origen vegetal, luego de ser
aplicados se descomponen rápidamente por acción de la
luz y la temperatura, debido a que algunos de sus
constituyentes, principalmente metabolitos secundarios, no
presentan homogeneidad desde el punto de vista químico,
bioquímico, o fisiológico y su efecto puede perderse
rápidamente (18). Por los resultados obtenidos,
probablemente, esto pudo haber ocurrido con los extractos
antes mencionados, al lograr un efecto nematostático que al
poco tiempo se perdió, reactivándose.
En conclusión, el extracto etanólico de C. ambrosioides,
demostró poseer un mayor efecto nematicida con respecto a
52 Vol. 23, Nº 2, 2010
los demás extractos probados, obteniéndose 100 % de
mortalidad en todas las concentraciones y desde el menor
tiempo de exposición evaluado. Los extractos acuosos de C.
arabica y C. ambrosioides en 100 % de concentración, lograron
matar al 100 % de los J2 de M. mayaguensis. Los extractos
acuosos (en concentraciones de 100 %), de A. occidentale
(48 y 72 h), ruda (48 y 72 h) y C. ambrosioides (24 h), lograron
porcentajes de mortalidad que oscilaron entre 51,5 % y
87,5 %. Para A. occidentale y C. arabica, es complicado usar
las hojas ya que ambas son plantas cultivadas y al quitarlas
se reduce el rendimiento. Se pudiera especular sobre el uso,
quizás, de las hojas que se cortan al realizar podas.
En vista de los resultados obtenidos con los extractos
acuosos de C. ambrosioides, A. occidentale, C. arabica y
R. graveolens, y con el extracto etanólico de C.
ambrosioides, recomiendan estudios posteriores que
incluyan evaluaciones en umbráculo y en microparcelas
o campo con la finalidad de comprobar su efectividad
también en el suelo y, según los resultados que se
obtengan, recomendar su uso en un futuro. En ocasiones
varios metabolitos que son nematicidas in vitro no son
los que la planta o restos de planta libera en el suelo, o
los libera en cantidades insuficientes, o no son bastante
persistentes para afectar a los nematodos. En estudios de
campo, pueden interferir otras variables sobre los
compuestos como son las propiedades del suelo, los
microorganismos presentes y las condiciones ambientales
entre otros (4). Igualmente es recomendable realizar
estudios sobre el efecto que estos extractos puedan tener
sobre los microorganismos del suelo, así como sobre las
plantas cultivadas o no ya que pueden existir efectos
alelopáticos o tóxicos.
Es recomendable realizar pruebas de control en campo
incorporando no solo los extractos acuosos y etanólicos sino
partes de estas plantas como abonos verdes. Evaluar
elcontrol de los extractos acuosos y etanólicos de las plantas
estudiadas con otras especies de nematodos y evaluar las
posibles propiedades nematicidas de otras plantas
presentes en nuestra geografía. Por otra parte, se necesitan
ulteriores estudios para identificar con exactitud los
metabolitos secundarios presentes en las plantas para así,
probar nuevos métodos de extracción.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al Consejo de Desarrollo Científico
y Humanístico de la Universidad Central de Venezuela,
Proyecto PI 01-7346-2008/1, por el aporte financiero que hizo
posible esta investigación.
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