Quimica Clinica

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS
SECCIÓN: HEMOQUÍMICA
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TRIGLICÉRIDOS
INTRODUCCIÓN: Los triglicéridos son ésteres de ácidos grasos cuya hidrólisis produce glicerol y
ácidos grasos libres. Si su determinación se realiza en conjunción con otros ensayos para lípidos;
entonces resulta útil en el diagnóstico de hiperlipoproteinemia.
Algunos de los métodos estándar que se emplean para cuantificar los niveles de triglicéridos
involucran la hidrólisis enzimática ó alcalina en la liberación del glicerol. El procedimiento que
aquí se refiere, esta basado en la hidrólisis enzimática gracias a su especificidad y a que no es
interferida por fosfolípidos.
Método: Enzimático Colorimétrico (GPO -PAP)
Fundamento: Los triglicéridos (TG) son hidrolizados enzimáticamente por una lipasa a glicerol el
cual mediante la glucokinasa (GK) y la glicerol fosfato oxidasa (GPO) libera peróxido de hidrógeno
(H2O2) que se valora a través de la reacción de Trinder finalizando con la formación
quinoneimina. (1)
Lipasa
TG + H2O -----------à glicerol + ácidos grasos
GK
Glicerol + ATP ------à glicerol-3-P + ADP
GPO
G-3-P + O2 ----------àdihidroxiacetona-P + H2O2
POD
H2O2 + 4-AAP + p-clorofenol ----------à quinona + H2O
Composición del reactivo: (concentración inicial)
R1 Tampón GOOD pH 50 mmol/l
Tampón 7.5
P-clorofenol 2 mmol/l
R2 Lipoprotein lipasa 150 000 U/l
Vial enzimas Glicerol kinasa 500 U/l
Glicerol-p-oxidasa 2 500 U/l
peroxidasa 440 U/l
4-aminofenazona 0.1 mmol/l
ATP 0.1 mmol/l
Patrón 2.26 mmol/l
Preparación: Disolver el contenido de R2 en R1.
Estabilidad: Estable 6 semanas a 2-8 °C o 1 semana a 15-25 °C
Muestra: Suero (no ictérico ni hemolítico) o plasma heparinizado o con EDTA de paciente en
ayuna de 12 horas. Los TG son estables en suero 3 días a 2-8 °C. (2)
Técnica:
Blanco Patrón Muestra
Patrón 0.01 ml
Muestra 0.01 ml
Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar e incubar 5 minutos A 37 °C ó 10 minutos a T ambiente. Medir la Absorbancia a 505 nm
(490 - 550) frente al blanco de reactivo. El color es estable por 30 minutos
Cálculo: Absorbancia Muestra
----------------------------- x CP = CM
Absorbancia Patrón
Factor de conversión: mg/dl x 0.0113 = mmol/l
Linealidad: 11.3 mmol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de muestra con
0.2 ml (200 l) de cloruro de sodio al 0.9 % y repetir la determinación, multiplicar el resultado por
3.
Valores de referencia: 0.35 -1.71 mmol/l. (4)
Sospechoso: a partir de 1.71 mmol/l.
Elevado: a partir de 2.28 mmol/l.
Notas: La bilirrubina o los sueros ictéricos elevan falsamente los niveles de TG. (3) La hemólisis
interfiere en el ensayo.
Los reactivos contienen preservativos y otras sustancias que pueden ser dañinos. No ingerirlos y
evitar contactos con piel y mucosas.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de triglicéridos determinados por este
método pueden ser empleados.
Materiales requeridos: Pipetas de alta precisión; gradillas para tubos; tubos de 12x75 mm (de
cristal o de plástico); cronómetros; baño de María con control a 37 0C; espectrofotómetro con
capacidad para medir absorbancias especificadas en la técnica.
Semiología: (4)
Aumento: Hiperlipoproteinemias tipos: I, IIB, III, IV, V; Enfermedad Hepática, Síndrome Nefrótico,
Hipotiroidismo, Diabetes incontrolada, Pancreatitis, Enfermedad por almacenamiento de
glucógeno, Endocrinopatías, IMA, Disfunción pancreática, Toxemia, Hipotiroidismo.
Disminución: Enfermedad pulmonar obstructiva crónica, Infarto cerebral, Hipertiroidismo,
Malnutrición, Síndrome de malabsorción.
Referencias:
1. Searcy, R.I: Diagnostic biochemistry, Mcgraw Hill. Ne× (1969)
2. Wybenga: D.R. and Inkpen. J.A. Clinical Chemistry. Principles and techniques. Haper and ow.
Hagetown. 146: (1974).
3. Young. D.S, Pestaner. l.C. and Gibberman. v. Clin. Chem. 21011 (1975).
4. Fischbach, F. Laboratory and diagnostic test. 4a.ed. Philadelphia: J.B.Lipicott company, 1992.
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COLESTEROL
INTRODUCCIÓN: El colesterol es un compuesto liposo que se encuentra en sangre y en tejido
biliar y cerebral; actuando como precursor de los ácidos biliares, los esteroides y la vitamina D. La
determinación de colesterol en suero es la principal prueba para diagnosticar y clasificar lipemias.
Los niveles de colesterol están relacionados con enfermedades de tiroides e hígado.
Los métodos enzimáticos han reemplazado metodologías antiguas que involucran a la colesterol
esterasa y oxidasa, así como indicadores de Trinders.
Método: Enzimático (CHOD - PAP)
Fundamento: La colesterol esterasa hidroliza los esteres de colesterol presentes en la
muestra dando colesterol libre que por acción de la colesterol oxidasa (CHOD) se transforma en
H2O2 o colesten-3-ona. En la reacción catalizada por la peroxidasa (PAP) se obtiene un
compuesto coloreado llamado quinoneimina.
Col. esterasa
Esteres de col. + H2O ------à colesterol + Ac. grasos
CHOD
Colesterol + O2 ---------à 4-colesterona + H2O2
POD
2H2O2 + 4-AAP + fenol -------à quinoneimina + 2H2O
Composición de reactivos: (concentración inicial)

R1 Pipes pH 6.9 90 mmol/l
Tampón Fenol 26 mmol/l
R2 Peroxidasa 1250 µ/l
Liofilizad Col. esterasa 300 mmol/l
o CHOD 300 mmol/l
4-AAP 0.4 mmol/l
Patrón 5.16 mmol/l
Preparación: Disolver con agitación suave 2, con un poco de 1. Luego completar.
Estabilidad: 4 meses de 2-8 0C o 40 días a temperatura ambiente protegidos de la luz.
Muestra: Suero (no ictérico ni hemolítico) o plasma heparinizado o con EDTA de paciente en
ayuna de 12 horas. Estable por 7 días a 2-8 0C ó 3 meses congelada a -20 0C
Técnica:
Patrón 10 µl
Muestra 10 µl
0
Mezclar e incubar 5 minutos a 37 C ó 10 minutos a temperatura ambiente. Ajustar a cero con
blanco reactivo. Leer a 505 nm (490-550). La coloración es estable 60 minutos.
Cálculo:
Absorbancia Muestra
------------------------------ x CP = CM
Absorbancia Patrón
Linealidad: hasta 15.4 mmol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
muestra con 0.2 ml (200 l) de cloruro de sodio al 0.9 % y repetir la determinación, multiplicar el
resultado por 3.
Valores de referencia: 3.8 - 6.5 mmol/l. Estos valores varían con la dieta, la edad o de país a
país.
Notas: El Ac. Ascórbico por encima de 300 µmol/l interfiere negativamente. (2)
La hemólisis superior a 3 g/l de Hb interfiere positivamente. Se elimina restando la absorbancia
de un blanco de muestra.
La bilirrubina > 10 mg/dl interfiere.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de colesterol determinados por este
Semiología: (3)
Aumento: Enfermedad cardiovascular, Aterosclerosis, Hipercolesterolemia familiar, Íctero
obstructivo (con aumento de bilirrubina), Hipotiroidismo, Nefrosis, Xantomatosis, Diabetes
incontrolada, Síndrome nefrótico, Obesidad.
Disminución:
*Cuando no se absorbe por el tracto gastrointestinal: Malabsorción, Anemia, Estrés, Enfermedad
hepática, Hipertiroidismo, Sepsis, Drogas (antibióticos)
*Otras causas: Anemia perniciosa, Cáncer, Íctero hemolítico, Hipolipoproteinemias
Referencias:
1. Aliain. C.C. et. al.: Clin. Chem. 200,47: (1974).
2. Young. D.S, Pestaner. l.C. and Gibberman. V. Clin. Chem. 21011 (1975).
3. Fischbach, F. Laboratory and diagnostic test. 4a.ed. Philadelphia: J.B.Lipicott company,
1992.
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COLESTEROL LIPOPROTEINAS DE ALTA DENSIDAD (HDL-C)
Método: Precipitante fosfotúngstico
Fundamento: Al reaccionar el suero con un reactivo precipitante de Proteínas, precipitan las
LDL (lipoproteínas de baja densidad) o VLDL (lipoproteínas de muy baja densidad) quedándose
en el sobrenadante las HDL (lipoproteínas de alta densidad) donde se determina el colesterol
ligado a las mismas por el método enzimático CHOD - POD. (1)
Composición de reactivos: (precipitante) (concentración inicial)
Ac. Fosfotúngstico 14 mmol/l
MgCl2 H2O 2 mmol/l
Patrón de colesterol 1.29 mmol/l
Preparación: Utilizar el reactivo precipitante sin diluir.
Estabilidad: 2-8 0C hasta su fecha de caducidad.
Muestra: Suero (no ictérico ni hemolítico) o plasma de paciente en ayuna de 12 horas. El
HDL-c es estable 7 días a 15-25 0C y 14 días a 2-6 0C.
Técnica: (dosificar en tubos de centrifuga)
Muestra 0.5 ml
Reactivo precipitante 0.05 ml
Mezclar, dejar reposar 10 min a temperatura ambiente.
Centrifugar 20 minutos A 4000 rpm ó 2 minutos a 12000 rpm. Determinar el colesterol, por el
método CHOD - PAP, al sobrenadante.
Nota: Si el sobrenadante quedara turbio realizar lo siguiente:
Solución Salina (0.9 %) 0.25 ml
Muestra 0.25 ml
Reactivo precipitante 0.05 ml
Mezclar, reposar 10 min., centrifugar.
Multiplicar resultado del colesterol por 2.
Cálculos HDL-c:
HDL-c = resultado del colesterol (CHOD - PAP) x
1.1 (dilución)
Cálculos LDL-c: (utilizando la formula de Friedewald).
LDLc = Col. total - HDLc - (Triglicéridos / 2.2)*
* Esta fórmula no ofrece confiabilidad cuando las concentraciones de triglicéridos están por
encima de 4.5 mmol/l o cuando hay presencia de quilomicrones.
Valores de referencia:
LDL-COLESTEROL: 3.9 - 4.9 mmol/l
HDL-COLESTEROL: (H) 0.9 - 1.42 mmol/l
(M) 1.16 - 1.68 mmol/l
Riesgo de IMA relacionado con colesterol y LDLc (mmol/l)
Colesterol LDL- c
Bueno < 5.1 < 3.3
Límite 5.1 - 6.2 3.3 - 4.1
Elevado > 6.2 > 4.1
La HDLc disminuida con triglicéridos elevados constituye también un factor de riesgo
independiente de IMA.
Riesgo de IMA relacionado con HDLc (mmol/l)
Hombres Mujeres
Pronóstico favorable > 1.42 > 1.68
Riesgo normal 0.90-1.42 1.16-1.68
Indicador de riesgo < 0.90 < 1.16
Notas: Los reactivos contienen preservativos y otras sustancias que pueden ser dañinos. No
ingerirlos y evitar contactos con piel y mucosas.
Materiales requeridos: Pipetas de alta precisión; gradillas para tubos; espectrofotómetro con
Semiología: (2)
Aumento de HDL: Enfermedades crónicas de hígado, Algunas formas de intoxicación crónica,
Alcohólicos.
Disminución de HDL: Alfa lipoproteinemia familiar, Hipertiroidismo, Hipertrigliceridemia, Diabetes y
Obesidad, Drogas y hábito de fumar,
Aumento de LDL: Hiperlipidemia familiar tipo II,
*Causas secundarias: Drogas, Síndrome nefrótico, Embarazo, Mieloma múltiple, Porfirio,
Enfermedad Hepática, Diabetes, Hipertiroidismo.
Aumento de VLDL: Alcoholismo, Diabetes obesidad, Enfermedad Renal crónica, Pancreatitis,
Embarazo, Anticonceptivos.
Referencias:
1. Izzo, C., et.al., Clin. Chem. 27:371374 (1981).
1992.
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PRUEBA DEL FRIO: (Prueba de los quilomicrones)

Fundamento: Los quilomicrones transportan los triglicéridos de la dieta (exógenos) o son las
lipoproteínas menos densas por lo que su aumento provoca la aparición de una capa cremosa
en el suero. Esta prueba se realiza solamente si el suero del paciente esta turbio o lechoso.
Técnica: Añadir 0.5 ó 1 ml de suero en un tubo de 12 x 75 mm ó de 12 x 100 mm. Dejar en
reposo 12-24 horas a 4 0C (refrigerador)
Resultados: Positivo: Se forma un sobrenadante o una capa cremosa sobre el suero en ayuno
de 12 horas que indica la presencia de quilomicrones pero si, además, el resto del suero
permanece turbio, esto indica un aumento de las VLDL que transportan los triglicéridos
endógenos.
Negativo: Cuando no hay formación de capa cremosa ni de suero turbio.
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INDICE BET A PRE BETA
Método: Colorimétrico.
Reactivos: reactivo beta pre beta
Muestra: suero (no hemolizado)
Cl2Ca (anhidro) ó Cl2Ca 2H2O 2.8 g ó 3.7g 1.4g ó 1.85 g
NaCl 0.222 g 0.111 g
Disolver
Heparina (5000 U/ml) 2 ml 2 ml
H2O destilada csp 1000 ml 500 ml
Técnica:
Control 200 µl
Muestra 200 µl
Mezclar y dejar reposar durante 10 minutos.
Leer contra blanco reactivo a 578 nm.
El resultado obtenido en el equipo, a la longitud de onda especificada, se toma como el valor de
la muestra.
Valores de referencia: hasta 0.50
Materiales requeridos:
Pipetas de alta precisión; gradillas para tubos; tubos de 12x75 mm (de cristal o de plástico);
cronómetros; espectrofotómetro con capacidad para medir absorbancias especificadas en la
técnica.
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FÓSFORO
INTRODUCCIÓN: La mayor parte del fósforo corporal se encuentra distribuido en los huesos
como hidroxiapatita, mientras que el restante se encuentra como fosfato inorgánico y ésteres de
fosfato.
El fósforo esta involucrado en el metabolismo de los carbohidratos y es un componente estructural
de otras sustancias fisiológicamente importantes. Es por ello que un incremento de los niveles de
fósforo en un suero, puede deberse a hipervitaminosis, hipoparatiroidismo y enfermedades
renales.
El método del que se hace referencia a continuación, se basa en la medición del complejo de
fosfomolibdato en el rango UV.
Método: UV fosfomolibdato.
Fundamento: El fósforo inorgánico reacciona con el molibdato de amonio en un medio ácido
para formar el complejo de fosfomolibdato que es capaz de absorber luz a 340 m. (1)
R1 Ac. Sulfúrico 210 mmol/l
Molibdato amónico 0.40 mmol/l
Detergente Tritón X-100 10 ml
Patrón 1.61 mmol/l
Estabilidad: Hasta su fecha de caducidad se puede almacenar a 2-25 0C.
Muestra: Suero, estable por 7 días a 2 - 8 0C.
Orina: Diluir la orina, 0.1 ml (100 l) de muestra con 0.9 ml (900 l) de agua destilada (dilución
1:10), multiplicar el resultado por 10 y multiplicar por el volumen de orina en litros. Ofrecer los
resultados en mmol /24 h.
Técnica:
Patrón 50 µl -
Muestra - 50 µl
Mezclar, incubar 5 minutos a temperatura ambiente.
Leer frente a blanco reactivo a 340 nm (ó 334 nm)
La lipemia y la hemólisis interfieren en la determinación, por lo que es necesario realizar un
blanco muestra (BM), sustituyendo el reactivo por solución salina; reste la absorbancia obtenida
(BM) de la de la muestra para realizar los cálculos. El blanco muestra se lee contra solución
salina.
Linealidad: Hasta 6.46 mmol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
resultado por 3.
Suero: 0.8 - 1.6 mmol/l.
Orina: 9.68– 32.29 mmol/24h
Notas: Los eritrocitos contienen fosfatos inorgánicos que pueden ser hidrolizados por acción
de las fosfatasas y salir a través de la célula, incrementando así la concentración de
fósforo inorgánico, por lo que es necesario separar rápidamente los eritrocitos del suero.
Interferencias: hemólisis, lipemia y detergentes.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de fósforo determinados por este
cristal o de plástico); cronómetros; espectrofotómetro con capacidad para medir absorbancias
especificadas en la técnica.
Semiología:
Aumento (hiperfosfatemia): Insuficiencia renal, Nefritis severas, Hipoparatiroidismo (con Ca bajo o
función renal normal), Hipocalcemia, Ingesta excesiva de álcali (historia de úlcera péptica),
Ingesta excesiva de vitamina D, Fracturas en la fase recuperativa, Tumores óseos, Enfermedad
De Addison, Acromegalia.
Disminución (hipofosfatemia): Hiperparatiroidismo (con Ca alto o función renal normal):
Raquitismo (niños) osteomalacia (adultos), Coma diabético (por aumento del metabolismo de los
carbohidratos, Hiperinsulinismo, Administración continua de glucosa (EV) en no diabéticos.
Referencias:
1. Tausky, H.H., and Shorr, E: Biol. Chem. 202 (1953).
1992.
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CALCIO
INTRODUCCIÓN.
El 99% del calcio presente en el cuerpo, se encuentra distribuido en huesos y dientes, mientras
que el 1% restante esta presente en sangre y tejidos blancos. Este compuesto actúa como un
factor en la coagulación de la sangre, en el metabolismo y en la fisiología neuromuscular.
El calcio contenido en suero esta distribuido en la siguiente proporción aproximadamente: un 45%
enlazado a proteínas, un 5% en forma de complejo en forma no ionizada, y el 50% restante en
forma iónica libre siendo fisiológicamente activa, por lo que tiene gran importancia en las
funciones biológicas.
Método: Test colorimétrico complexona cresolftaleína.
Fundamento: El calcio (Ca2+), con la cresolftaleína, forma un complejo violeta en medio alcalino
cuya intensidad de color es directamente proporcional a la cantidad de calcio existente en la
muestra.
R1 (tampón) Tampón etanolamida 500 mmo/l
R2 (color) Cresoftaleína 0.62 mmo/l
8-hidroxiquinoleína 69 mmo/l
Patrón 2.5 mmol/l
Estabilidad: Hasta su fecha de caducidad se puede almacenar a 2-25 0C.
Muestra: Suero o plasma heparinizado. El Ca es estable en suero 10 días a 2-8 0C u 8 meses a
-20 0C.
Orina: Diluir la orina, 1 ml de muestra con 2 ml de agua destilada (dilución 1:3), multiplicar el
resultado por 10 y multiplicar por el volumen de orina en litros. Ofrecer los resultados en mmol /24
h.
Técnica:
Patrón 20 µl
Muestra 20 µl
R1 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar de 2-5 minutos a la temperatura de medición.
R2 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar o esperar 5 minutos a temperatura ambiente. Leer frente a blanco a 570 nm (550-590)
Coloración estable 40 minutos.
salina.
Cálculo:
Absorbancia Muestra
------------------------------- x CP = CM
Absorbancia Patrón
Linealidad: Hasta 3.75mmol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml de muestra con
0.2 ml de cloruro de sodio al 0.9 % y repetir la determinación, multiplicar el resultado por 3.
Suero: 2.02 - 2.6 mmol/l.
Orina: (H): 2.23 - 4.29 mmol/24h
(M): 2.50 - 4.21 mmol/24h
Notas: Se recomienda utilizar material de plástico desechable o de cristal o plástico pasados por
ácido (ac. Nítrico diluido a la mitad con agua destilada) y luego enjuagados varias veces con
agua destilada para evitar contaminaciones. Separar el coagulo lo antes posible al obtener el
suero, para evitar el trasiego de iones Ca hacia los hematíes.
La lipemia y la hemólisis interfieren en la determinación.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de calcio determinados por este método
pueden ser empleados.
Semiología:
Aumento (hipercalcemia): Hiperparatiroidismo (asociado con fósforo bajo), Cáncer: De hueso o
que lo metastizan (pulmón, mama, tiroides, riñón); Enfermedad de Hodgkin; Mieloma múltiple;
Renal o de pulmón que pueden producir hormona paratiroidea; Sarcoidosis por IgA, IgG altas;
Leucemias, Enfermedad de Addison, Hipertiroidismo, Enfermedad de Paget (con FAL alta),
Inmovilización prolongada, Excesiva ingesta de vitamina D, Uso prolongado de diuréticos, Acidosis
respiratoria.
Disminución (hipocalcemia): Pseudohipocalcemia (hiperproteinemia), Hipoparatiroidismo (2rio a
cirugía, irradiación, etc), Hiperfosfatemia (por fallo renal, laxantes, citostáticos), Malabsorción,
Pancreatitis aguda, Alcalosis, Osteomalacia, Diarreas, Raquitismo.
Referencias:
1. Stern, J. and Lewis W.H.P. Clin. Chim. Acta 2, 576 (1957)
1992.
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BILIRRUBINA
INTRODUCCIÓN: La bilirrubina se origina por degradación del grupo hem de la hemoglobina,
que a su vez aparece en el plasma como consecuencia de la destrucción de los glóbulos rojos en
el sistema retículo endotelial. La hemoglobina, una vez liberada en el interior del eritrocito, se
combina con las haptoglobinas, proteinas plasmáticas especificas para su transporte. En una
primera etapa y tras su liberación de la haptoglobina, se forma, por acción de una oxigenasa, un
grupo formilo con lo que se rompe el anillo tetrapirrólico del hem, formándose el compuesto
denominado biliverdina, que en una etapa posterior y por acción de una reductasa se transforma
en bilirrubina.
Método: Colorimétrico de Jendrassik y Gróf.
Fundamento: La bilirrubina se valora colorimétricamente por la formación de azobilirrubina, de
color rojo cereza, cuando se le hace reaccionar con el Ac. Sulfanílico diazotado (reacción de
Malloo Evelyn). (1)
La bilirubina conjugada, muy polar, reacciona en medio acuoso con el reactivo de diazotación,
por lo que se le llamo directa, pues al poner en contacto el suero o el reactivo aparecía
directamente el color. Pero la bilirrubina libre, poco polar, no da directamente la reacción o es
preciso añadir un tercer reactivo para que se produzca la reacción de diazotación con la
consiguiente aparición de color, por eso se le llama indirecta.
R1 Ac. Sulfanílico 29 mmol/l
HCl 0.17 N
R2 Nitrito sódico 25 mmol/l
R3 Cafeína 0.26 mol/l
Benzoato de Na 0.52 mol/l
Estabilidad: A 15-25 0C, hasta su fecha de caducidad.
Muestra: Suero o plasma. La estabilidad de la muestra, separada ya de los hematíes y
protegida de la luz, es de 3 meses a -18 0C ó 4 días a 4 0C ó 1 día a 15 0C.
Técnica: (para c/ muestra, preparar 4 tubos)
Total (T) Blanco Total (BT) Directa (D) Blanco Directa (BD)
R1 200 l 200 l 200 l 200 l
R2 1 gota 1 gota
Sol. Sal. 2 ml 2 ml
R3 2 ml
Muestra 200 l 200 l 200 l 200 l
Mezclar, y esperar 5 minutos.
Leer contra blanco a 546 nm. (530-550)
Nota: por cada corrida debe montarse un patrón para total (PT) con su blanco (PBT) y un patrón
para directa (PD) con su blanco (PBD)
Cálculo:
Para total:
Abs (T) – Abs (BT)
------------------------------- x CP = CM
Abs (PT) – Abs (PBT)
Para directa:
Abs (D) – Abs (BD)
------------------------------- x CP = CM
Abs (PD) – Abs (PBD)
Técnica para pediatría: (para c/ muestra, preparar 2 tubos)
Blanco Muestra
Muestra
Cafeína 1,5 ml 1,5 ml
Suero ó Plasma 0.05l 0.05l
Ácido 0.1 ml
Sulfanílico
Diazo reactivo 0.1 ml
Mezclar, y esperar 10 minutos. Leer contra blanco a 546 nm (530-550).
Preparación del Diazo Reactivo.
2 ml de Acido Sulfanílico
0.5 ml de Nitrito de Sodio
Preparar en el momento de ejecutar la técnica.
Cálculo:
Se resta la absorbancia de la Muestra a la absorbancia del Blanco y se efectúa el cálculo:
Absorbancia Muestra
------------------------------- x CP = CM
Absorbancia Patrón
Factor de conversión: mg/dl x 17.1 = mol/l
Linealidad: Hasta 342 mol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
resultado por 3.
Total: hasta 17 mol/l.
Directa: hasta 4.3 mol/l.
Notas: La bilirrubina es fotosensible por lo que su exposición a la luz puede provocar disminución
de su concentración. La hemólisis interfiere en el ensayo.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de bilirrubina determinados por este
Semiología:
Aumento
No conjugada (indirecta): Anemias hemolíticas, Traumas (hematomas), Infarto pulmonar
hemorrágico, Síndrome de Crigler Najjar, Enfermedad de Gilbert.
Conjugada (directa): Cáncer de la cabeza del páncreas, Coledocolitiasis, Síndrome de Dubin
Jonson.
Conjugada o no conjugada: Metástasis hepáticas, Hepatitis, Linfoma, Colestasis secundaria a
drogas, Cirrosis.
Referencias:
1. Malloy, H.T. and Evelyn, K.A, J. Biol. Chem. 119, 481 (1937)
1992.
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GLUCOSA
INTRODUCCIÓN: La glucosa es el principal carbohidrato presente en la sangre periférica, por lo
que su oxidación es la principal fuente de energía celular en el cuerpo. Las determinaciones de
glucosa se emplean en el diagnóstico y tratamiento de Diabetes mellitus.
Método: GOD - PAP
Fundamento: La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de la glucosa a ácido Glucónico o
peróxido de hidrógeno el cual se valora mediante la reacción de Trinder dando lugar a una
quinoneimina coloreada. (1)
GOD
Glucosa + O2 + H2O ----------à H2O2 + gluconato
POD
2H2O + fenol + 4-AA---------à quinona + 4H2O
R1 Tris Ph 7.4 92 mmol/l
Tampón Fenol 0.3 mmol/l
R2 GOD 15000 U/l
Peroxidasa (POD) 1000 U/l
4-AA 2.6 mmol/l
Patrón de glucosa 5.5 mmol/l
Preparación: Disolver R2 en R1
Estabilidad: 1 mes a 2-8 0C ó 7 días a TA.
Muestra: Suero, plasma o LCR. La glucosa en suero o plasma es estable 3 días a 2-8 0C.
Técnica:
R1 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
Patrón 0.01 ml
Muestra 0.01 ml
0
*Mezclar e incubar 10 minutos a 37 C.
*Leer la absorbancia a 505 nm (490 550 nm) del patrón o de la muestra frente al blanco
reactivo.
*La coloración es estable 30 minutos a temperatura ambiente.
Cálculo:
Absorbancia Muestra
------------------------------- x CP = CM
Absorbancia Patrón
Factor de conversión:mg/dl x 0.0555 = mmol/l
Valores de referencia: 4.2 - 6.1 mmol/l.
Linealidad: hasta 22.2 mmol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
resultado por 3.
Notas: El suero o plasma debe separarse de los elementos celulares en el plazo máximo de 1
hora, añadiendo un inhibidor de la glucólisis como el fluoruro, puede aplazarse la separación
hasta 24 horas.
No se han observado interferencias por hemoglobina (4 gr/l), bilirrubinas (15 mg/dl), ácido
ascórbico (10 mg/dl) y la lipemia moderada no afecta los resultados. Aunque algunos autores sí
refieren que la hemólisis, la ictericia y la lipemia afectan el ensayo.
La composición del reactivo de trabajo puede variar ligeramente según la casa comercial en que
se adquiera el mismo.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de glucosa determinados por este
Semiología: (2)
Aumento: Diabetes, Enfermedad de Cushing (por aumento de glucocorticoides), Estrés: por IMA,
infecciones severas, Feocromocitoma, Adenoma pituitario: por aumento de GH, Adenoma de
páncreas por aumento de glucagón, Pancreatitis, Daño por trauma cerebral, Enfermedad hepática
crónica, Enfermedades crónicas, Malnutrición crónica.
Disminución: Sobredosis de insulina. Enfermedad de Addison, Sepsis bacteriana, Cáncer de
islotes de páncreas, Necrosis hepática, Hipotiroidismo, Enfermedad por almacenamiento de
glucógeno, Estados psicógenos.
Referencias:
1. Trinder p. Ann. Clin. Biochem. 6824 (1969) / 2. Fischbach, F. Laboratoro and diagnostic
test. 4a. Ed. Philadelphia: J.B. Lipincott company, 1992.
__________________________________
PRUEBA DE TOLERANCIA ALA GLUCOSA ORAL DE 2h (PTG-O 2h)
Fundamento: En pacientes sanos, la respuesta de la insulina para eliminar del flujo sanguíneo
una sobrecarga de glucosa administrada por vía oral es inmediata, con un pico a los 30 - 60
minutos, retornando a la normalidad a las dos horas. (1, 2)
Indicaciones:
Antes de la prueba:
 Los 3 días precedentes se debe aplicar una dieta que contenga por lo menos 150 g/ día de
carbohidratos.
 La falta de apetito o la inactividad (reposo en cama u hospitalización) invalidan la prueba.
 Guardar ayuno de 12 horas o no más de 16 horas, suprimiendo incluso el café. Sólo agua.
 Prohibido fumar o realizar ejercicios, incluso ligeros.
 No debe aplicarse la prueba a personas enfermas en las dos semanas precedentes.
 Se deben tener controladas algunas enfermedades endocrinas que alteran la prueba, Ej.
acromegalia, síndrome de Cushing, hipertiroidismo, feocromocitoma.
 Evitar fármacos como diuréticos, salicilatos, hipoglicemiantes y anticonvulcivantes por lo menos
3 días antes.
 Suprimir los anticonceptivos durante todo un ciclo.
Durante la prueba:
 Se debe permanecer en absoluto reposo, sin ingerir alimentos, ni fumar después de la primera
extracción hasta la próxima.
 Pueden ocurrir mareos o nauseas durante la prueba.
Después de la prueba:
 Puede comer o tomar normalmente.
 Se debe administrar hipoglicemiantes a las personas que lo necesiten tan pronto termine la
prueba.
Procedimiento:
 Entre las 7-8 horas de la mañana, después de un ayuno de 12 h y luego de 30 min de reposo,
se obtiene muestra venosa (1 ml de sangre + 1 gota [20 l] de EDTA o fluoruro) para determinar
glucosa plasmática por el método GOD PAD.
 5 minutos después se ingiere una sobrecarga de 75 gr. de dextrosa (150 ml de solución de
dextrosa al 50 %) para los adultos.
 Para los niños: 1.75 g/Kg de peso hasta 75 g (peso en kilogramos del niño por 3.5 [1.75 por
100/50]; el resultado sería el volumen en ml de dextrosa al 50 % a ingerir por el niño
 100 g para la PTG de 6 horas (200 ml de dextrosa al 50 %).
 La próxima extracción se realizara según las indicaciones del médico (a las 2 h ó cada 1 h).
 En caso de existir nauseas, mareos, sudoración u otra manifestación de hiperactividad del
sistema nervioso vegetativo, debe extraerse una muestra sanguínea inmediatamente o
suspender la prueba.
 Si el paciente vomita la solución de glucosa el tetst queda invalidado y se debe repetir 3 días
después.
 Si la primera determinación es superior a 11 mmol/l el test debe suspenderse o de lo contrario
debe ser monitoreado por las posibles reacciones severas o el coma.
 A los pacientes con glucosa en ayunas por encima de 11.1 mmol/l no debe realizársele esta
prueba.
Indicaciones del test: (2, 3)
Historia familiar de diabetes.
Obesidad.
Episodios inexplicables de hipoglicemia.
Historia de infecciones frecuentes.
Mujeres con historia de macrofetos, muerte neonatal, parto prematuro y abortos.
Glicosurias o hiperglicemias transitorias en embarazadas, cirugías, traumas, estrés e infarto
agudo del miocardio.
Glicemia en ayuno dudosa (< 11.1 mmol/l).
Interpretacion: (1)
Ayuna 2 horas 3horas
A Normal < 6.1
D Diabetes ³7 ³ 11.1
U
L Tolerancia Alterada <7 7.8 - 11.1
N Normal < 7.2
I Diabetes ³7.8
Ñ
O Tolerancia Alterada < 7.8 7.8 - 11.1
Embarazadas ³5.8 ³ 9.2 ³ 8.1
Deberá igualar 2 ó más valores después de una sobrecarga de 100 g de glucosa.
Referencias:
1. Mateo, O. Manual de diagnóstico y tratamiento en endocrinología y metabolismo. Editorial
científico técnica, 1985.
2. Henry, JB. Diagnóstico y tratamiento clínicos por el laboratorio. 9a. ed. España: científico y
técnica SA. 1993.
3. Fischbach, F. Laboratoro and diagnostic test. 4a. ed. Philadelphia: J.B. Lipincott company,
1992.
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GLUCOSA POSPRANDIAL DE 2 HORAS
Indicaciones y procedimientos: Se seguirán las mismas indicaciones y procedimientos que para
la PTG-O 2h horas excepto que en vez de ingerir una sobrecarga de glucosa después de la
primera extracción en este caso se desayunará una dieta rica en carbohidratos que deberá
incluir: jugo de frutas, leche con azúcar o tostadas. (1,2)
Utilidades del test: (3)
 En el seguimiento del diabético.
 En el monitoreo de terapia con insulina.
 Para confirmar diabetes en pacientes con glucosa en ayuno normal.
Notas: En el posprandial de 3 horas la variación es que se le indica al paciente que desayune,
antes de la prueba, como lo hace todos los días, y se le extrae sangre en ayuno y 3 horas
después. Este test da información del control del tratamiento o de la respuesta terapéutica
luego de la ingestión de comidas en pacientes diabéticos.
Referencias:
1. Mateo, O. Manual de diagnostico y tratamiento en endocrinología y metabolismo. Editorial
científico técnica, 1985.
2. Henry J. Diagnóstico y tratamiento clínicos por el laboratorio. 9a. ed. España: científico o
técnica SA. 1993.
1992.
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UREA
INTRODUCCIÓN: La urea es el principal metabolito de las proteínas y constituye alrededor del
50% de los solutos contenidos en la orina. La concentración de urea en sangre oscila entre 1.7 –
6.7 mmol/l y sólo aumenta de modo significativo cuando se ha perdido más del 50% de la función
renal. La concentración de urea en sangre es, sin embargo, una medida bastante imperfecta de la
función renal. Depende entre otros factores, del aporte de proteinas en la dieta, del catabolismo
proteico y del volumen de la diuresis. Puede hallarse cifras algo elevadas aun cuando la función
de los riñones sea por completo normal.
Método: Test enzimático – colorimétrico (Berthelot).
Fundamento: en medio alcalino y en presencia de salicilato e hipoclorito de sodio, los iones de
amonio reaccionan produciendo un compuesto de color verde cuya absorbancia se mide a 580
nm.
ureasa
urea + H2O --------------àCO2 + 2NH3
R 1 Tampón fosfatos pH 50 mmol/l
6.7
EDTA 2 mmol/l
Salicilato sódico 60 mmol/l
Nitropusiato sódico 3.2 mmol/l
Hipoclorito de sodio 140 mmol/l
R2
Hidróxido sódico 150 mmol/l
R 3 Reactivo ureasa 30 000 U/l
Patrón de urea 8.32 mmol/l
Disolver R3 (ureasa) con R1 (tampón)
Estabilidad: 4-semanas a 2-8 0C y 7 días a 15-25 0C.
Muestra: Suero o plasma. La urea en suero es estable por 72 horas a 2-8 0C u 8 horas a
temperatura ambiente.
Orina: Diluir la orina, 0.1 ml (100 l) de muestra con 5 ml de agua destilada (dilución 1:50),
multiplicar el resultado por 10 y multiplicar por el volumen de orina en litros. Ofrecer los
Técnicas:
R1 + R3 1 ml 1 ml 1 ml
Muestra 0.01 ml
Patrón 0.01ml
Mezclar e incubar 5 min. a 37 0C ó 10 min. a TA
R2 1ml 1 ml 1ml
0
Mezclar e incubar 5 min. a 37 C ó 10 min. a TA
Leer contra blanco reactivo a 580 nm (570-623) a 37 0C.Ajuste a cero con agua destilada o aire.
La coloración es estable 30 min. a TA.
Cálculo:
Absorbancia Muestra
------------------------------- x CP = CM
Absorbancia Patrón
Factor de conversión:
mg/dl x 0.1665 = mmol/l
Valores de referencias:
Suero: 1.7-8.3 mmol/l
Orina: 333 – 582 mmol/24h
Linealidad: Hasta 26.64mmol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
resultado por 3.
Notas: Todo el material a usar debe estar libre de amoniaco, metales pesados o detergentes.
Evitar contactos con las manos o contaminación con gotas de sudor.
Interferencias: Los anticoagulantes fluoruro, citrato y EDTA pueden inhibir la ureasa. Los iones
de amonio pueden elevar sus valores.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de urea determinados por este método
Semiología: (3)
Aumento (azoemia):
Prerrenal: Deshidratación, Disminución del volumen sanguíneo, Shock, Fallo cardiaco congestivo,
Hemorragia gastrointestinal masiva, Aumento del catabolismo proteico (fiebre, estrés,
quemaduras).
Renal: Uremia (acidosis, desequilibrio Hidroelectrolítico, coma, vómitos)
Postrenal: Obstrucción o perforación del tracto urinario.
Disminución: Fallo renal, Desnutrición, Ingesta aumentada de líquido con riñón normal,
Embarazo.
Referencias:
1. Modified from Bartels, H, et. al (1972). Clin. Chim. Acta 37:193.
2. Schirmeister, J, et. al. (1964). Dtoch. Med. wschr.
1992.
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CREATININA.
INTRODUCCIÓN: La creatinina es un producto del metabolismo muscular de la creatina. Su
concentración en suero o plasma es notablemente más constante y depende mucho de la ingesta
proteica y del catabolismo de la urea. Por este motivo es más fiable como índice de retención
nitrogenado. Es por ello, que la concentración de creatinina es un índice de funcionalismo renal
que goza de aceptación universal.
Método: Cinético Espectrofotométrico (basado en la reacción de Jaffé)
Fundamento: La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en medio alcalino,
originando un complejo coloreado. Se mide la velocidad de formación de dicho complejo en
periodos iniciales cortos, evitándose así la interferencia de otros compuestos.
R1 ácido pícrico 25 mmol/l
R2 NaOH 0.2 mmol/l
Patrón 177 mmol/l
Preparación de los reactivos listo para usar: Mezclar volúmenes iguales de los reactivos 1 y 2,
homogenizar. Estable 1 semana.
Muestra: Suero o plasma: la creatinina es estable 24 horas a 2-8 0C.
multiplicar el resultado por 10 y multiplicar por el volumen de orina en litros y dividir entre 1000.
Ofrecer los resultados en mmol /24 h.
Técnica:
Manual
Reactivo R1+ R2 1.0 ml
Muestra o patrón 0.1 ml
Mezclar y poner en marcha el cronómetro, leer la absorbancia 505nm (490-510) a los 30 seg.
(DO1) y a los 90 seg.(DO2). Se debe tener temperatura a 37 0C. Ajuste a cero con agua destilada.
Cálculo:
(Absorbancia 2 - Absorbancia 1) muestra
--------------------------------------------------- x CP = CM
(Absorbancia 2 - Absorbancia 1) Patrón
Suero: 44-125 umol/l
Orina: 5-18 mmol/24 h
Linealidad: Hasta 884 mmol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
resultado por 3.
Notas: La hemólisis interfiere en la determinación. La concentración de bilirrubina superior a
130 mmol/l interfiere. No utilizar sueros lipémicos.
La determinación puede ser afectada por concentraciones elevadas de sustancias reductoras.
Procurar que la temperatura de reacción sea constante.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de creatinina determinados por este
capacidad para medir absorbancias especificadas en la técnica y con termostato acoplado.
Semiología:
Aumento: Compromiso de la función renal, Nefritis crónicas, Obstrucción del tracto urinario,
Enfermedades musculares: gigantismo, acromegalia, miastenia gravis, Distrofia muscular,
Poliomielitis, Acidosis diabética, Inanición, Hipertiroidismo.
Referencias:
1992.
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CREATININA
INTRODUCCIÓN: La creatinina es un producto del metabolismo muscular de la creatina. Su
concentración en suero o plasma es notablemente más constante y depende mucho de la ingesta
proteica y del catabolismo de la urea. Por este motivo es más fiable como índice de retención
nitrogenado. Es por ello, que la concentración de creatinina es un índice de funcionalismo renal
que goza de aceptación universal.
Método: De Jaffé, con desproteinización.
Fundamento: La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en medio alcalino,
originando un complejo coloreado que se mide espectrofotométricamente a 500 nm.
1 Ác. Pícrico 0.04 mol/l
2 NaOH 2.5 mol/l
Patrón de creatinina 177 mmol/l
Ac. Sulfúrico 0.33 mol/l
Tungstato de sodio 0.303 mol/l
Picrato alcalino 4ml de 1+ 1ml de 2. Preparar en el momento de usar.
Muestra: Suero o plasma: la creatinina es estable 24 horas a 2-8 0C.
multiplicar el resultado por 10 y multiplicar por el volumen de orina en litros. Ofrecer los
Técnica: Filtrado libre de proteínas:
Patrón (ml) Muestra (ml)
macro micro macro micro
Agua destilada 9 1.8 8 1.6
Patrón 1 0.2
Muestra 1 0.2
Ác. Sulfúrico 0.5 0.1
Tungstato de Na 10% 0.5 0.1
Agitar para mezclar. Reposar 3-5 min. Nota: Con la adición de cada reactivo se debe mezclar.
Centrifugar a 2500 – 3000 rpm por 10 min.
Reacción de color
Blanco React. Patrón Muestra
Agua destilada 4 (1) ml
Filtrado de proteínas. 4 (1) ml
Patrón diluido 4 (1) ml
Picrato alcalino 2(0.5) ml 2 (0.5)ml 2 (0.5) ml
Mezclar bien y dejar en reposo por 15 min.
Leer patrón y muestra contra blanco reactivo a 500 nm.
Nota: Entre paréntesis se refiere a microtécnica.
Cálculo:
Absorbancia Muestra
------------------------------- x CP = CM
Absorbancia Patrón
Valores de referencias: 44-125 mol/l
Linealidad: Hasta 520 mol/l. Para los valores superiores diluir la muestra: 1 ml filtrado + 3 ml
de solución salina fisiológica, multiplicando el resultado por 4.
Notas: La hemólisis interfiere en la determinación. La concentración de bilirrubina superior a
130 mmol/l interfiere. No utilizar sueros lipémicos. La determinación puede ser afectada por
concentraciones elevadas de sustancias reductoras. Los reactivos contienen preservativos y otras
sustancias que pueden ser dañinos. No ingerirlos y evitar contactos con piel y mucosas.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de creatinina determinados por este
Semiología:
Aumento: Compromiso de la función renal, Nefritis crónicas, Obstrucción del tracto urinario,
Enfermedades musculares: gigantismo, acromegalia, Miastenia gravis. Distrofia muscular,
Poliomielitis, Acidosis diabética, Inanición, Hipertiroidismo.
Referencias:
1992.
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ÁCIDO ÚRICO
INTRODUCCIÓN: El ácido úrico es el producto final del metabolismo de las purinas. En el
hombre, cerca de la mitad del ácido úrico total, se elimina por excreción urinaria y por degradación
microbiana en el tracto intestinal. La cuantificación de ácido úrico es útil en el diagnóstico de gota,
disminución de la función renal, desórdenes mieloproliferativos, etc. Los niveles de ácido úrico
están asociados al nitrógeno retenido, la urea, la creatinina y otros constituyentes no proteicos.
Método: Test enzimático Colorimétrico (uricasa-PAP)
Fundamento: El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y peróxido de hidrógeno (H 2O2)
que en presencia de POD y 4-AAP y DCPS forma un compuesto rosáceo.
uricasa
Ac. úrico + 2H2O + O2 ------------à alantoína + CO2 +
H2O2
POD
H2O2 + 4AAP + DCPS -------------à2H2O + quinona
Composición de reactivos: (concentración final)

R1 Tampón Fosfatos pH 7.4 50 mmol/l
2-4 DCSP 4 mmol/l
R2 Liofilizado enzimas Uricasa 60 U/l
Peroxidasa 660 U/l
Ascorbato Oxidasa 200 U/l
4-AA 1 mmol/l
Patrón 356.91mmol/l
Preparación: Disolver R2 en R1.
Estabilidad: 1 mes a 2 8 0C. ó 10 días a temperatura ambiente, protegida de la luz.
Muestra: Suero o plasma. El ácido úrico es estable de 3 a 5 días en suero a 2-8 0C.
Orina: Diluir la orina, 0.1 ml (100 l) de muestra con 0.9 ml (900 l) de agua destilada (dilución
1:10), multiplicar el resultado por 10 y multiplicar por el volumen de orina en litros y dividir entre
1000. Ofrecer los resultados en mmol /24 h.
Técnica:
Muestra o patrón 20 µl 20 µl
Reactivo 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
Mezclar e incubar 5 minutos a 37 0C ó 10 minutos a temperatura ambiente. Ajustar a cero con
blanco reactivo. Efectuar las lecturas a 505 nm (490-550) de las absorbancias del estándar y de la
muestra frente a blanco reactivo.
Coloración estable como mínimo 30minutos.
Cálculo:
Absorbancia Muestra
------------------------------- x CP = CM
Absorbancia Patrón
Factor de conversión: mg/dl x 59.485 = umol/l
Suero: M: 142 - 339 umol/l
H: 202 - 416 umol/l
Orina: 1.2 – 6 mmol/24 h.
Linealidad: Hasta 1487 umol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
resultado por 3.
Notas: Si la muestra de orina es turbia, calentarla a 60 0C para disolver el Ac. Úrico.
Interferencias: los anticoagulantes no interfieren. La lipemia aumenta los niveles de Ac. Úrico. La
bilirrubina y el ascorbato pueden provocar niveles bajos de Ac. Úrico.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de ácido úrico determinados por este
Semiología: (1)
Aumento: Fallo de la función renal, Gota, Otras: leucemia, quimioterapia para cáncer,
mononucleosis, ejercicios violentos, linfomas, mieloma múltiple, cáncer matastásico, acidosis
metabólica eclampsia severa, cetosis diabética, inanición, policitemia, shock, hemoglobinopatías,
alcoholismo.
Disminución: Tratamiento con drogas uricoséricas: (alopurinol, probenecid, sulfinpirazone),
Síndrome de fanconi, Enfermedad Neoplásica, Enfermedad de Wilson.
Referencias:
1-Bartham and Analyst 97, 142 (1972)
2- Fossatti and Principe. Clin Chem 28, 227 (1980)
3- Young, D: S., Thomas, D.W., Friedman, R.B., and Pestaner, L.C.; Clin.Chem., 21, 1D(1975).
__________________________
DETERMINACIÓN DE ACIDO URICO.
Metodo: Henry Sibel King.
Fundamento: el filtrado de proteinas se hace reaccionar con fosfotunstato alcalino, el cúal es
reducido por los uratos, formando un complejo de color azul que se mide fotometricamente a 620
nm.
Reactivos:
1. Acido sulfúrico 2/3n (0.33)
2. Tungstato de sodio 10%
3. Acido fosfotungstico
4. Carbonato de sodio 1.32 mol/l.
Flp Muestra
Agua destilada 3.2 ml
Suero 0.4 ml
Ac. Sulfurico 2/3 n 0.2 ml
Tungstato de sodio 10% 0.2 ml
Mezclar fuerte por agitación y centrifugar 5 minutos a 300 r.p.m.
Técnica:
BR P M
Agua destilada 1ml 0.8ml
Patrón 0.1ml
FLP 1 ml
Ac. Fosfotungstico 0.3ml 0.3ml 0.3ml
Carbonato de sodio 0.3ml 0.3ml 0.3ml
Mezclar y reposar 15 minutos. Leer por t. Y usar filtro 590 nm
El patrón es el que viene en la caja de AC. Úrico.
Buscar la concentración en el disco.
Valores de referencia: mujer.142-339 mol/l hombre. 202-416 mol/l
___________________________________
ALBÚMINA
INTRODUCCIÓN: La albúmina es la más homogénea, soluble, estable, de todas las fracciones de
proteinas plasmáticas. La albúmina está relacionada fisiológicamente con los problemas
concernientes al equilibrio hídrico, porque es la que presenta mayor presión oncótica, y con la
función transporte, ya que posee una gran capacidad para fijar numerosas sustancias de tipo
fisiológico (bilirrubina, ácido úrico, ácidos grasos) o no (rojo congo, sulfamidas, penicilina, etc).
Método: Espectrofotométrico: verde de bromocresol.
Fundamento: La albúmina presente en la muestra reacciona con el verde de bromocresol en
medio ácido, originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría. (1)
1 Succinato pH 4.2 75 mmol/l
Verde de bromocresol 15 mmol/l
Brij-35(20%) preservativo 10 ml
2 Patrón 45 g/l
Los reactivos están listos para usar.
Estable a temperatura ambiente 15-25 0C hasta su fecha de caducidad. Proteger de la luz.
Muestra: Suero o plasma. La albúmina es estable 6 días a 2-8 0C.
Técnica:
Patrón 0.02 ml -
Muestra 0.02 ml
Mezclar y dejar 5 minutos a temperatura ambiente. Ajuste a cero con blanco reactivo.
Leer la absorbancia del patrón o de la muestra frente al blanco reactivo a 600 nm (578-650). El
color es estable durante al menos 30 minutos.
Cálculos:
Absorbancia Muestra
-------------------------------- x CP = CM
Absorbancia Patrón
Factor de conversión: gr/dl x 10 = gr/l
Valores de referencia: 38-52 gr/l
Linealidad: Es lineal hasta 60 gr/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
resultado por 3 (dilución 1:3)
Notas: La bilirrubina (25 mg/dl) o la hemoglobina (1 gr/dl) interfieren.
La reacción de la albúmina con el verde de bromocresol es Inmediata. Otras proteínas
reaccionan lentamente, por lo que es conveniente no demorar la lectura.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de albúmina determinados por este
Semiología: (2)
Aumento: Nunca aumenta.
Disminución:
1. Por disminución de la síntesis: Enfermedad hepática, Inanición, Analbuminemia congénita.
2. Por aumento de las perdidas: Síndrome nefrótico, Gastroenteropatía perdedora de proteínas,
Eczemas, Quemaduras, Artritis reumatoidea, Lupus eritematoso, Infecciones crónicas
3. Por aumento del catabolismo: Embarazo, Tirotoxicosis, Síndrome de Niscott .
Referencias:
1. Doumas, B. T, Watson, W.A, Biggs, H.G, Clin. Chim. Acta, 1971; 310, 7
1992.
____________________________________
PROTEÍNAS TOTALES
INTRODUCCIÓN: Las proteínas, como constituyentes fundamentales que son de todos los
protoplasmas, se han llamado “la esencia del proceso vital”. Intervienen como parte básica de la
célula viviente y también son responsables de una parte principal de su función. Por ejemplo, las
proteínas sirven como componentes estructurales de células, enzimas, algunas hormonas y
algunos receptores para hormonas, moléculas de transporte, anticuerpos y factores de
coagulación, etc. Las proteínas difieren entre sí por los tipos de aminoácidos prese3ntes, su
disposición, cantidad, peso molecular, cambios superficiales, etc.
Método: Test colorimétrico "Biuret"
Fundamento: Los grupos -CO-NH unidos entre sí (enlaces peptídicos) dan una reacción con
formación de color violeta con las sales cúpricas en medio alcalino (reacción de Biuret)

R1 Tartrato K-Na 15 mmol/l
NaOH 100 mmol/l
Ioduro K 15 mmol/l
Sulfato de cobre 5 mmol/l
Patrón 70 g/dl
Estabilidad: A temperatura ambiente es hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.
Muestra: Suero o plasma. Las proteínas son estables 6 días a 4 0C.
Técnica:
Patrón 50µl -
Muestra 50µl
Reactivo 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml
Mezclar e incubar 15 minutos a 30-37 0C. Dejar enfriar 5 minutos a temperatura ambiente.
Leer, frente a blanco reactivo, a 546 nm (530-560). La coloración es estable 30 minutos.
Cálculos:
Absorbancia Muestra
------------------------------ x CP = CM
Absorbancia Patrón
Factor de conversión: gr/dl x 10 = gr/l
Suero: 66 - 87 gr/l
Orina: 0.02 – 0.15 g/l/24h
Linealidad: Es lineal hasta 150 gr/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
resultado por 3 (dilución 1:3)
Notas: Con sueros ictéricos (> de 85 mol/l de bilirrubina), hemolíticos o lipémicos se prepara un
blanco muestra.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de proteínas totales determinados por
este método pueden ser empleados.
Semiología:
Ver Electroforesis de Proteínas
Referencias:
1. Henry, R.J. Anal. Chem. 92. 1491 (1957).
2. Peters, T.J. Clin. Chem. 13. 114· (1968).
3. Fischbach, F. Laboratory and diagnostic test. 4a.ed. Philadelphia: J.B.Lipicott company, 1992.
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INA AMINOTRANSFERA (ALAT) (EC: 2.6.1.2)
INTRODUCCIÓN: La alanina aminotransferasa en suero (ALT), también conocida como
transaminasa glutámica piruvica (TGP), es una enzima de los tejidos, que cataliza el intercambio
de grupos amino y cetónicos entre  - aminoácidos y  - cetoácidos. La ALT se encuentra
ampliamente distribuida en los tejidos, principalmente en el hepático (la TGP está contenida
principalmente en el citoplasma de las de las células del parénquima hepático) y es por ello que
por ejemplo en la hepatitis viral aguda los valores de TGP, son casi siempre superiores a los de la
TGO, debido a que la extensión de la lesión celular es amplia, pero la lesión de la célula individual
es ligera.
Método: Cinético-UV.
Fundamento: La secuencia de la reacción enzimática que se lleva a cabo, es la siguiente:
ALAT
L-Alanina + ------------------à Piruvato +
-Cetoglutarato ----------------- L-glutamato
LDH
Piruvato + ---------------à Lactato
NADH + H+ -------------- + NAD+ + H2O
El piruvato formado en la primera reacción se reduce a lactato en presencia del lactato
deshidrogenasa (LDH) y NADH. Por lo que para determinar la actividad de la ALT se mide la
oxidación del NADH a 340 nm (ó 334).
R1 Tampón Tampón TRIS pH 7.3 100 mmol/l
L-alanina 500 mmol/l
R2 Comprimido NADH+ 0.18 mmol/l
LDH 1200 U/l
R3 Sol. Starter -Cetoglutarato 15 mmol/l
Preparación y estabilidad: Disolver 4 comprimidos de R2 en un frasco de 100 ml de R1. El
reactivo liofilizado se debe almacenar a 2 a 8 0C antes de reconstituirse. Después de la
reconstitución permanece estable durante 3 semanas a 2 a 8 0C y 4 días a temperatura ambiente.
R3 listo para usar, una vez abierto es estable 6 meses a 2 a 8 0C ó 3 semanas a 15 - 25 0C.
Muestra: Suero. Estable de 4 a 8 0C durante 7 días. (4)
Técnica: Llevar, previamente, los reactivos a la temperatura de medición.
Manual
Reactivo R1+R2 1.0 ml
Muestra 100 l
Mezclar y esperar un minuto a 37 0C.
R3 100 l
Mezclar y esperar 1 minuto. Anotar la lectura a 340 nm y poner en marcha el cronómetro. Repetir
la lectura a 1, 2 y 3 minutos. Calcular el valor medio de la disminución de extinción por minuto
(DE340 nm /min).
Cálculo: DE/min x 1905 = U/l para 340 nm.
DE/min x 1942 = U/l para 334 nm.
(Se debe comprobar el factor, con los controles, cada vez que se realice por primera vez el
procedimiento)
Linealidad: Si la actividad es > 285.75 (DE/min para 340 y 334 nm > 0.150), mezclar 0.1 ml (100
l) de muestra con 0.9 ml (900 l) de cloruro de sodio al 0.9 % y repetir la determinación,
multiplicar el resultado por 10.
1U/l = 16.67 x 10-9 Kat/l
= 16.67 x 10-3 Kat/l
1kat/l = 60 U/l
Valores de referencia: (H) hasta 40 U/l (M) hasta 31 U/l
Notas: Las muestras hemolizadas no deben usarse, ya que los eritrocitos presentan 7 veces más
la actividad de ALAT en suero. El fosfato de piridoxal puede elevar los niveles de la ALAT por
activación de la apoenzima a partir de la transaminasa. (5) Dicho reactivo puede encontrarse en
agua contaminada por crecimiento microbiano. Así mismo, los niveles elevados de piruvato en
suero, pueden interferir con el desempeño de la prueba. Young y colaboradores, han publicado
una lista de drogas que interfieren en la determinación de la actividad de la ALT. (6)
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de ALAT determinados por este método
Semiología:
Aumento: Enfermedades hepatocelular (de moderado a elevado incremento), Cirrosis activa
(incremento medio), Neoplasia hepática, Íctero obstructivo, Pancreatitis, Delirum Tremens,
quemadura severa, trauma, shock, Hepatitis tóxica e infecciosa, Mononucleosis infecciosa, Infarto
agudo del miocardio (puede no aumentar)
Disminución: Aspirina o salicilatos.
Referencias:
1. Henry, JB.Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. W.B. Saunders and Co.,
Philadelphia, PA. P 332-335, 1974.
2. Wroblewski, F. And LaDue, J.S.: Proc. Soc. Exper, Biol. And Med. 91: 569, 1956.
3. International Federation of Clinical Chemestry, J. Clin Chem Clin Bio. 18:5231,1980.
______________________________________
DETERMINACIÓN DE TGO. (Aspartato – Amino –Transferasa).
METODO: Reitman y Frankel.
Fundamento:
alfa – cetoglutarato + l – aspartato L- glutamato + oxalacetato.
El oxalacetato formado reacciona en solucion alcalina con la 2,4 dinitrofenilhidracina. El producto
de la reacción se mide fotometricamente entre 500 – 560 nm.
Reactivos:
1. Buffer- sustrato para T.G.O.
2. Reactivo de color ( 2 ,4 dinitrofenilhidracina )
3. Hidroxido de sodio 0,4 mol/ l.
4. Standard de 15 u/l
Técnica:
En tres tubos : BR P M
Buffer- sustrato 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Standard ( 15 ul ) 0.1 ml
Agua destilada 0.1 ml
Incubar 5 minutos a 37 °C.
Muestra 0.1 ml
0
Mezclar . Dejar exactamente 30 minutos a 37 c
Reactivo de color 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Mezclar dejar exactamente 20 minutos a temperatura ambiente
Naoh 0.4 mol/l 5 ml 5 ml 5 ml
Mezclar. Reposar 5 minutos. Leer contra “BR”, los tubos “P” y “M” con filtro 546 nm.
Cifras normales: hasta 12 u/l.
Nota: las muestras por encima de 85 u/l diluir 0.1 ml de suero + 0.9 ml de sol. Salina 0.9%
Repetir la técnica y el resultado por 10.
Leer en tramitancia y buscar en la curva de calibración.
______________________________________
ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (ASAT) (EC: 2.6.1.1)
INTRODUCCIÓN: La Aspartato aminotransferasa en suero (AST), también conocida como
transaminasa glutamica oxalacética en suero (TGO), es una enzima que cataliza el intercambio de
grupos amino y ceto entre  - aminoácidos y  - cetoácidos. Se encuentra ampliamente distribuida
en los tejidos, principalmente en el cardíaco, hepático, muscular y renal; razón por la cual, los
daños ocurridos en dichos tejidos ocasionarían la liberación de la enzima AST, hacia la circulación
general, alcanzando sus máximos niveles después de un infarto al miocardio, dentro de las
primeras 16 a 48 horas transcurridas. Así mismo, las enfermedades hepatobiliares tales como
cirrosis, carcinoma metastásico y hepatitis biliar, también aumentan los niveles de AST.
Método: Cinético-UV.
Fundamento: La AST cataliza la transferencia de un grupo amino entre el L-Aspartato y el 2-
oxoglutarato que a su vez reacciona con el NADH en presencia de la malato deshidrogenasa
(MDH) para formar NAD+. La actividad de AST se determina al medir la oxidación de NADH a 340
nm (ó 334). El reactivo empleado para la determinación, también contiene lactato deshidrogenasa
que se encarga de convertir el piruvato endógeno de la muestra en lactato durante la fase inicial
previa a la determinación.
ASAT
L-Aspartato + ---------------à Oxalacetato +
2-Oxoglutarato -------------- L-Glutamato.
MDH
Oxalacetato + ---------------à L-Malato +
NADH + H+ ------------- NAD+ + H2O
R1Tampón Tampón TRIS pH 7.8 100 mmol/l
L-aspartato 200 mmol/l
R2 NADH 0.18 mmol/l
LDH 800 U/l
MDH 600 U/l
R3 -Cetoglutarato 15 mmol/l
Preparación y estabilidad: Disolver 4 comprimidos de R2 en un frasco de 100 ml de R1. El
reactivo liofilizado se debe almacenar a 2 a 8 0C antes de reconstituirse. (Se puede preparar
menos volumen, disolviendo 1 comprimido con 25 ml de tampón). Después de la reconstitución
permanece estable durante 3 semanas a 2 a 8 0C y 4 días a temperatura ambiente.
R3 listo para usar, una vez abierto es estable 6 meses a 2 a 8 0C ó 3 semanas a 15- 25 0C.
Muestra: Suero. Estable de 4 a 8 0C durante 7 días. (4)
Macro-test
Reactivo 1.0 ml
R1+R2
Muestra 100 l
Mezclar y esperar un minuto a 37 0C.
R3 100 l
Mezclar y esperar 1 minuto. Anotar la lectura a 340 nm y poner en marcha el cronómetro. Repetir
la lectura a 1, 2 y 3 minutos. Calcular el valor medio de la disminución de extinción por minuto
(DE340nm /min).
procedimiento)
Linealidad: Si la actividad es > 285 (DE/min para 340 y 334 nm > 0.150), mezclar 0.1 ml (100 l)
de muestra con 0.9 ml (900 l) de cloruro de sodio al 0.9 % y repetir la determinación, multiplicar
el resultado por 10.
1U/l = 16.67 x 10-9 kat/l
= 16.67 x 10-3 kat/l
1kat/l = 60 U/l
Valores de referencia: (H) hasta 37 U/l (M) hasta 31 U/l
Notas: Las muestras hemolizadas no deben usarse, ya que los eritrocitos presentan 7 veces más
la actividad de ALAT en suero.
El fosfato de piridoxal puede elevar los niveles de la ALAT por activación de la apoenzima a partir
de la transaminasa. (5) Dicho reactivo puede encontrarse en agua contaminada por crecimiento
microbiano.
Así mismo, los niveles elevados de piruvato en suero, pueden interferir con el desempeño de la
prueba. Young y colaboradores, han publicado una lista de drogas que interfieren en la
determinación de la actividad de la ALT. (6)
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de ASAT determinados por este método
Semiología:
Aumento: Infarto del miocardio (4 a 10 veces el valor normal paralelo al aumento de la CPK),
arritmia severa y angina severa, Enfermedades hepáticas (10 a 100 veces de lo normal): Hepatitis
aguda; Cirrosis activa; Necrosis Hepática; Carcinoma primario o metastásico; MNI más HVA. Otras
enfermedades: Pancreatitis aguda; Anemia hemolítica aguda; Quemadura severa; Embolia
pulmonar; Enfermedades renal aguda; Distrofia muscular progresiva; Gangrena; Hipertermia
maligna; Trauma e irradiación de músculo esquelético
Disminución: Embarazo, Beriberi y Diabetes Mellitus con acidosis
Referencias:
1. Henry, JB, Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methos, W. BSAunders and Co.
Philadelphia. PA p. 361(1974.
2. Karmen, A. Et al : J. Clin Invest, 34:126,1995.
3. Henry, RJ, et al: Amer. J. Clin. Path, 34:381, 1960.
4. The Comitee of enzimes of Scandinavian Society for Clinical Chemestry and Clinical
Phisiology. Scand. J.Lab. Invest.32:291,1974.
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AMILASA (EC: 3.2.1.1)
INTRODUCCIÓN: En el páncreas se forman las enzimas amilasa y lipasa, y también, como
precursores inactivos, las proteasas tripsinógeno y quimotripsinógeno, que se activan después del
duodeno. Las enzimas digestivas de la secreción del páncreas desintegran sustancias nutritivas.
La amilasa desdobla polisacáridos. La amilasa que se mide en suero procede en 1/3
aproximadamente del páncreas, la mayor parte procede de las glándulas parótidas. Como
consecuencia de su bajo peso molecular, la amilasa se filtra glomerularmente y puede
demostrarse en la orina.
La determinación de amilasa en suero y orina es la prueba que se desarrolla más comúnmente
para diagnosticar pancreatitis aguda, enfermedad en la cual los niveles de dicha enzima se elevan
durante largos períodos de tiempo en orina y suero.
Método: Cinético - colorimétrico.
Principio: La amilasa se encarga de hidrolizar al PNFG7 a PNFG3 y maltotetraosa. A su vez la
glucoamilasa hidroliza a la PNFG3 a p-nitrofenol y este último produce un color amarillo. El
incremento ocurrido en la absorbancia se mide a 405 nm y es proporcional a la actividad de la
amilasa en la muestra.
-amilasa
PNPG7 bloqueado---------------àG2-5 + PNP-G2-5
glucoamilasa
PNP-G2-5 ------------------à PNP-Gluc + Glucosa
- glucosidasa
PNP-Glucósido -----------------à PNP + Glucosa
Reactivo (Listo para usar). MES Tampón pH 6.0 100 mmol/l
CNPG3 2.25 mmol/l
NaCl 350 mmol/l
Acetato de Ca 6 mmol/l
Tiocianato Potásico 900 mmol/l
Azida Sódica 0.095 %
Preparación y estabilidad: El reactivo esta listo para el uso, almacenar entre 2° y 8°C hasta la
fecha de caducidad.
Muestra: Suero, plasma heparinizado, orina.
Reactivo R1+R2 1 ml
Suero o plasma 20 l
Orina 10 l
Mezclar y esperar 30 segundos a 37 0C. Anotar la lectura a 405 nm (400-410)y poner en marcha el
cronómetro. Repetir la lectura a 1, 2 y 3 minutos. Calcular el valor medio de la disminución de
extinción por minuto (DE/min).
Cálculo: DE/min x 5188 = U/l.
Para las muestras de orina se multiplicará el resultado por 2.
procedimiento)
Linealidad: Si la actividad es > 1127 (DE/min > 0.220), mezclar 0.1 ml (100 l) de muestra con
10.
Valores de referencia: hasta 90 U/l
1U/l = 16.67 x 10-9 kat/l
= 16.67 x 10-3 kat/l
1kat/l = 60 U/l
Notas: Debido al contenido de -amilasa en la saliva y el sudor, no pipetear el reactivo con la
boca y evitar el contacto de la muestra y el reactivo con la piel.
Interferencias: Lipemia, hemólisis, insulina, bacterias.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de amilasa determinados por este
Semiología:
Aumento: Pancreatitis (3 a 6 horas después del dolor), Parotiditis, Úlcera péptica perforada,
Apendicitis, Rotura de un ectópico, Aneurisma diseminado de la aorta, Insuficiencia renal,
Macroamilasemias (aumenta aparentemente), Colecistitis aguda, Exacerbación aguda de la
pancreatitis crónica, Obstrucción del conducto pancreático, Alcoholismo (intoxicación),
Obstrucción intestinal, Aumento en suero y disminución en orina en coagulación intravascular
diseminada y macroamilasemias
Disminución: Hepatitis, Cirrosis hepática, Toxemia del embarazo, Quemadura severa.
Referencias:
1. Wohlegemuth.,J.Bio. Chem, 29:1,1908
2. Somogy M, J Bio Chem, 125:339,1938.
3. Tietz, NW, Textbook of clinical chemistry , Philadelphia, W.B.Saunders Company, pp.725-
734.1986.
__________________________
CREATIN-KINASA (CPK) (EC: 2.7.3.2)
INTRODUCCIÓN: La creatin cinasa es una enzima que juega un papel importante en el
mecanismo para el almacenamiento de energía en tejidos, esto mediante la catalización de la
reacción reversible entre creatina y ATP, para formar fosfato de cretina y ADP. Dicha enzima, se
encuentra distribuida en varios órganos, registrándose su actividad más alta (en orden
decreciente) en el músculo esquelético, corazón y cerebro. Es por ello que su determinación
ayuda en el diagnóstico de distrofias musculares y otras enfermedades del músculo esquelético,
infarto al miocardio, enfermedades renales y/o disfuncionales.
Método: Ensayo cinético UV-NAC activado.
Fundamento: Determinación cinética de la actividad de la creatin-kinasa después de la activación
mediante N-acetilcisteina de acuerdo a la siguiente reacción.
CK
Creatin-fosfato + ADP---------à creatina + ATP
---------
HK
ATP + glucosa ---------à glucosa-6-P + ADP
---------
G6PDH
Glucosa-6-P + NADP+ ---à gluconato-6-P + NADPH + H+
--
R1 Imidazol pH 6.7 100 mmol/l
Tampón Glucosa 20 mmol/l
Acetato Magnesio 10 mmol/l
EDTA 2 mmol/l
R2 ADP 2 mmol/l
Comprimido AMP 5 mmol/l
Diadenosin-5-P 10 mmol/l
NADP 2 mmol/l
Hexoquinasa(HK 2500U/l
G-6-PDH 1500 U/l
N-Acetilcisteína 20 mmol/l
Creatín-Fosfato 30 mmol/l
Preparación y estabilidad: Disolver 1 comprimido en 15 ml de Tampón R1. La estabilidad del
monoreactivo es de 5 días de 2 a 8 0C o 24 horas a temperatura ambiente.
Muestra: Suero, plasma heparinizado ó con EDTA. La actividad de la CK/NAC en suero disminuye
un 10% al cabo de un día de 2 a 8 0C ó una hora de 15 a 25 0C
Reactivo 1 ml
(Listo para usar.)
Muestra 20 l
Mezclar e incubar 2 minutos a 37 0C. Anotar la lectura a 340 nm (334) y poner en marcha el
extinción por minuto (DE/min). Ajuste a cero con blanco agua o aire.
procedimiento)
Linealidad:
A 340 nm es lineal hasta 2023 U/l (DE/min > 0.220). Para concentraciones mayores mezclar 0.1 ml
(100 l) de muestra con 0.9 ml (900 l) de cloruro de sodio al 0.9 % y repetir la determinación,
multiplicar el resultado por 10.
1U/l = 16.67 x 10-9 kat/l
= 16.67 x 10-3 kat/l
1kat/l = 60 U/l
Hombres: 24-195 U/l.
Mujeres: 24-170 U/l.
NOTA: La hemólisis interfiere en el ensayo a concentraciones superiores a 0.2 mg/dl de
hemoglobina.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de CPK determinados por este método
Semiología:
Aumento: Infarto del Miocardio (4 a 6 horas), Otras enfermedades que producen incremento de la
CPK: Enfermedades cerebro-vasculares agudas, Distrofia muscular progresiva (de 300-400 veces
lo normal), Dermatomiositis, Delirum tremens, Alcoholismo crónico, Shock eléctrico, Mixedema,
Cirugía cardiaca, Desfibrilación cardíaca, Convulsiones, infarto cerebral, isquemias, o
hemorragias subaracnoidea, Hipotiroidismo, Psicosis aguda, Trauma del sistema nervioso central,
Infarto o edema pulmonar.
Referencias:
1. Rec. OSCC (DOKC). J´Clin.Chem.Biochem 15.255 (1977)
2. Szasz G. Gruber. W. Clin. Chem. 22.650 (1976)
_________________________________
CREATIN-KINASA, ISOENZIMA MB CK-MB
Método: Ensayo cinético UV. NAC activado.
Fundamento: La CK-MB está formada por las subunidades CK-B y CK-M. La fracción CK-M está
inhibida por un anticuerpo específico que no influye en la fracción CK-B. La restante actividad de
esta fracción que corresponde a la actividad de la CK-MB es determinada mediante técnica
cinética UV al igual que CK-NAC.
R1 Imidazol pH 6.7 100 mmol/l
Tampón Glucosa 20 mmol/l
Acetato de Mg 10 mmol/l
EDTA 2 mmol/l
R2 Ac. Anti-CK-M 2000 U/l
Comprimido ADP 2 mmol/l
AMP 5 mmol/l
Diadenosín-5-P 10 mmol/l
NADP+ 2 mmol/l
Hexoquinasa (HK) 2500 U/l
G-6-PDH 1500 U/l
N-acetilcisteína 20 mmol/l
Creatin -fosfato 30 mmol/l
Control Vial liofilizado
Preparación y estabilidad: Disolver un frasco de R2 en 2.5 ml de tampón. La estabilidad del
monoreactivo es de 7 días de 2-8 0C ó 12 horas a 15-25 0C.
Control: Disolver con 3 ml de H2O destilada suavemente y evitando la formación de espuma.
Muestra: Suero, plasma heparinizado o con EDTA. La actividad de CK-MB en suero disminuye: a
4 0C un 10 % al cabo de 24 horas, o bien a 25 0C un 10 % al cabo de 1 hora.
Reactivo 2.5 ml
Muestra 100 l
Mezclar y dejar reposar 10 minutos a 37 0C. Leer extinción E1 y después de exactamente 5
minutos, leer la extinción E2 a 340 nm.
Nota: antes de la determinación de la CK-MB, se determina la actividad de la CPK total, para
asegurar correctamente la interpretación diagnóstica del resultado. Diluir las muestras, 1:10, si
son superiores a 1000 U/l.
Calcular DE = E2 - E1
Cálculo:
De la CK-MB en la muestra: DE x 1651 = U/l
De la CK-B DE x 825 = U/l
procedimiento)
Linealidad: Antes de efectuar la determinación de CK-MB, se determinará la actividad de CK total
por el método CK-NAC activado. Si la actividad de CK es superior a 1000 U/l, Para
concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de muestra con 0.2 ml (200 l) de cloruro de
sodio al 0.9 % y repetir la determinación, multiplicar el resultado por 3 (dilución 1:3)
1U/l = 16.67 x 10-9 kat/l
= 16.67 x 10-3 kat/l
1kat/l = 60 U/l
CPK – MB: Está aumentada si se encuentra entre el 6 y el 25 % de la actividad total de la CPK. La
probabilidad de IMA es alta si se reflejan las siguientes condiciones:
CPK (H): > 190 U/l
(M): >167 U/l
CPK - MB > 24 U/l
Notas: La hemólisis interfiere en los sueros control con valores de CK-MB determinados por este
Semiología:
Aumento: Infarto del miocardio (aumento de 4-6 horas después del IMA), Isquemia miocárdica,
Distrofia muscular de Duchenne, Polimiositis, Mioglubinuria, Síndrome de Reye.
Referencias:
Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Biochem. 15, 255 (1977).
Szasz, G. Gruber, W. Clin. Chem.22, 650 (1976)
______________________________
LACTATO DESHIDROGENASA (LDH) (EC: 1.1.127)
INTRODUCCIÓN: La lactato deshidrogenasa es la enzima que completa la oxidación anaeróbica
de la glucosa por vía glucolítica y se halla presente en todos los tejidos, particularmente en el
músculo cardíaco y el esquelético, hígado y riñón. La enzima en circulación es una mezcla de 5
isoenzimas, las cuales difieren en su movilidad electroforética y sus pH óptimos.
La elevación de la enzima LDH puede deberse a infartación al miocardio, enfermedades del
hígado y/o renales, algunos tipos de anemia, enfermedades malignas y distrofias muscular.
Método: Ensayo cinético UV
Fundamento: Ensayo cinético optimizado de acuerdo con la siguiente reacción:
Piruvato – NADH + H+ ------à Lactato + NAD+

------
R1 Tampón Tampón TRIS 50 mmol/l
pH 7.5
Piruvato 0.6 mmol/l
R2 Comprimido NADH 0.18 mmol/l
Preparación y estabilidad: Disolver 1 comprimido en 15 ml de tampón R1. La estabilidad es de 5
días a 2 a 8 0C ó 24 horas a temperatura ambiente.
Muestra: Suero. Estable durante 48 horas a 2-8 0C.
Macro-test
Muestra 20 l
Mezclar y esperar 1 minuto a 37 0C. Anotar la lectura a 340 nm y poner en marcha el cronómetro.
Repetir la lectura a 1, 2 y 3 minutos. Calcular el valor medio de la disminución de extinción por
minuto (DE/min).
Cálculo: DE/min x 9690 = U/l. para 340 nm.
DE/min x 9880 = U/l para 334 nm
procedimiento)
Linealidad: Si la actividad es > 1453 (DE/min para 340 y 334 nm > 0.150), mezclar 0.1 ml (100 l)
1U/l = 16.67 x 10-9 kat/l
= 16.67 x 10-3 kat/l
1kat/l = 60 U/l
Valores de referencia: 230 - 460 U/l
Notas: La hemólisis interfiere en el ensayo.
Interfieren también: oxalato y EDTA.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de LDH determinados por este método
Semiología:
Aumento: Infarto del miocardio: La elevación de la LDH en el infarto del miocardio es
caracterizada por: altos niveles (2 a 10 veces por encima de lo normal) en las 12 a 24 horas del
infarto. La elevación continúa en los 6 a 10 días (más que la TGO y la CPK), por tal razón es
utilizada para el diagnóstico tardío del infarto; retornando a la normalidad entre los 8 y 14 días,
Infarto pulmonar: Usualmente hay un incremento de la LDH a las 24 horas de iniciado el dolor.
Condiciones generales del incremento en los niveles:
 Niveles elevados: Infarto miocardio; Leucemia; Anemias hemolíticas; Enfermedades
hepáticas; Necrosis de músculo esquelético; Esprue; Infarto pulmonar agudo; Neoplasias; Infarto
renal agudo y enfermedad renal crónica; Mixedema; Shock con necrosis de órganos menores.
 Incremento importante (2 a 40 veces): Anemias megaloblásticas; Shock y anoxia; Cáncer
 Incremento moderado (2 a 4 veces): Infarto miocardio; Infarto pulmonar; Leucemia
granulocítica; Anemia Hemolítica; Mononucleosis infecciosa; Distrofia muscular progresiva.
 Incremento ligero: Delirum Tremens; Hepatitis; Cirrosis; íctero obstructivo; Mononucleosis;
Hemólisis; Shock y Anoxia, La angina y la pericarditis no producen elevación de la LDH.
 Elevación urinaria: Cáncer de riñón o de próstata, Glomerulonefritis, Hipertensión maligna,
Lupus nefrítico, Necrosis tubular aguda, Transplante renal, Pielonefritis ( a veces).
 Disminución: Buena respuesta a la terapia contra el cáncer.
Referencias:
Bergmeyer HU. J. Clin. Chem. Biochem. 13, 507 (1975).
Howell BF. and cols. Clin. Chem. 25, 269 (1979)
___________________________
FOSFATASA ALCALINA (ALP) (EC: 3.1.3.1)
INTRODUCCIÓN: La fosfatasa alcalina de origen humano hidroliza todos los monoésteres
ortofosfóricos. Esta enzima está presente en casi todos los tejidos y fluidos humanos; son fuentes
particularmente ricas el intestino delgado, hueso, hígado y riñón. Los niveles normales de
fosfatasa alcalina dependen de la edad, incrementándose sus concentraciones durante el período
de crecimiento de huesos. Por ello, una elevación moderada de ALP no atribuida a hígado o
huesos, puede deberse a la enfermedad de Hodgkins, e infecciones bacterianas abdominales.
Método: Ensayo cinético optimizado. Metódica DGKC.
Fundamento del método: La fosfatasa alcalina hidroliza los ésteres del ácido fosfórico en medio
alcalino, produciendo fosfato inorgánico y el correspondiente resto orgánico con el que se había
esterificado.
ALP
p-nitrofenilfosfato ----------à p-nitrofenol + fosfato

Tampón (pH 9.8) dietanolamina 1 mol/L
R1 Tampón
Cloruro magnésico 0.5 mmol/l
R2 Comprimido p-nitrofenilfosfato 10 mmol/l
Preparación y estabilidad:
Disolver el contenido del frasco R2 con 15 ml de Tampón R1.
El monoreactivo es estable 5 días a 18 –20 °C ó 21 días a 2-8 °C.
Muestra: Suero, plasma heparinizado. La actividad de la enzima debe ser determinada
rápidamente o bien separar el suero de los hematíes. La pérdida de la actividad enzimática es
menor de un 10% entre 2 a 3 días a 15-25 0C o durante 1 mes a -20 0C.
Reactivo R1 + R2 3.0 ml
Muestra 50 l
Mezclar y esperar 1 minuto a 37°C. Ajustar el cero con blanco agua o frente a aire, en una cubeta
de 1 cm de paso de luz y una longitud de onda de 405 nm.(400-410)
Cálculo: DE/min x 3300 = U/l.
procedimiento)
Linealidad: Si la actividad es > 825 (DE/min > 0.250), mezclar 0.1 ml (100 l) de muestra con 0.9
ml (900 l) de cloruro de sodio al 0.9 % y repetir la determinación, multiplicar el resultado por 10.
1U/l = 16.67 x 10-9 kat/l
= 16.67 x 10-3 kat/l
1kat/l = 60 U/l
Niños: < 645 U/l
Adultos: 98 – 279 U/l
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de ALP determinados por este método
Semiología:
Aumento:
o Enfermedades hepáticas (asociada a aumento de la ASAT, ALAL y Bil.)
1. Incremento marcado: Íctero obstructivo (aumento del doble o más de lo normal), Lesión
ocupadora de espacio (Absceso o neo), Cirrosis hepatobiliar, Cirrosis biliar
2. Incremento moderado: Hepatitis, Cirrosis alcohólica, Pancreatitis.
o Enfermedades óseas
1. Incremento marcado: Enfermedad Paget, Metástasis ósea, Osteítis deformante, Osteosarcoma
2. Incremento moderado: Osteomalasia
o Otras enfermedades: Mononucleosis infecciosa, Leucemia, Crecimiento anormal, Embarazo
(último trimestre, retorna a la normalidad 1 mes después del parto).
Referencias:
1. Haussament T: U. Y cols. Clin. Chim. Acta, 35, 271 – 273 (1977 )
2. Annon. Z. Clin. Chem. A. Clin Biochem 8: 658 (1970 )
______________________________________
FOSFATASA ÁCIDA (ACP) (EC: 3.1.3.2)
INTRODUCCIÓN: La fosfatasa ácida de origen humano hidroliza todos los monoésteres
ortofosfóricos. Esta enzima a pesar de su amplia distribución, su mayor importancia clínica estriba
en la atención al estudio de la enzima secretada por la glándula prostática humana, esto en
cuanto a su caracterización y determinación estructural. Dicho conocimiento es importante para
obtener un diagnóstico que no sea afectado por interferencia de la fosfatasa ácida producida por
otros tejidos.
Método: Ensayo cinético colorimétrico. Método de Hillmann modificado.
Fundamento: La fosfatasa ácida a pH 5.0 hidroliza el  naftilfosfato o fosfato inorgánico a 
naftol. El  naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotado formando un compuesto
coloreado con pico de absorción a los 405 nm.
 naftilfosfato + H2O ---------à  naftol + fosfato
 naftol + Fast Red TR ---------------à Azo Dye
R1 Tampón Citrato pH 5.0 50 mmol/l
R2 Comprimido  naftilfosfato 10 mmol/l
Fast Red TR 6 mmol/l
R3 Tartrato sódico 2 mmol/l
R4 Tampón acetato 5 mmol/l
Preparación y estabilidad: Disolver 1 comprimido en un frasco de R1. Una vez disuelto tiene una
estabilidad de dos días a 2-8 0C ó 6 horas a temperatura ambiente.
Muestra: Suero.
Total No inhibida por tartrato
Reactivo R1+ R2 1 ml 1 ml
Tartrato 10 l
Muestra 100 l 100 l
Mezclar y esperar 5 minutos a 37 0C. Anotar la lectura a 405 nm y poner en marcha el cronómetro.
Repetir la lectura a 1, 2 y 3 minutos. Calcular el valor medio del aumento de extinción por minuto
(DE/min).
Cálculo:
Fosfatasa Ácida Total (U/l)= DE/min x 750
Fosfatasa Ácida Prostática (U/l)= (DE/min fosfatasa ácida total - DE/min fosfatasa ácida. No
inhibida por tartrato) x 750
procedimiento)
Linealidad: Hasta 150 U/l (DE/min > 0.220) Para concentraciones mayores mezclar 0.1 ml (100 l)
1U/l = 16.67 x 10-9 kat/l
= 16.67 x 10-3 kat/l
1kat/l = 60 U/l
(H) hasta 5.4 U/l (M) hasta 4.2 U/l
Notas: Utilizar solamente suero. No plasma.
Si la determinación no se realiza el mismo día, es aconsejable añadir 20 l de tampón acetato
acético 5 MOLAR, pH 5.0 por cada 1 ml de suero.
La hemólisis interfiere en el ensayo. La bilirrubina provoca disminución de su actividad.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de ACP determinados por este método
Semiología:
Aumento: Incremento elevado en el cáncer metastásico de próstata, Moderada elevación,
Hiperparatiroidismo, Hepatitis, Excesiva destrucción de plaquetas.
Referencias:
Hillmann, GZ Clin. Chem. Biochem 9, 273 (1971).
___________________________________
GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA (g - GT) (EC: 2.3.2.1)
INTRODUCCIÓN: La GGT es una enzima del grupo de las peptidasas, las cuales catalizan el
rompimiento hidrolítico de los péptidos para formar aminoácidos o péptidos más pequeños.
Específicamente, la GGT cataliza la transferencia de grupos g-glutamil de péptidos de distinto
tamaño, hacia moléculas aceptoras de péptidos de distinto tamaño, hacia moléculas aceptoras de
péptidos. Aún cuando los niveles más elevados de GGT están localizados en los tejidos renales, la
fuente de las enzimas presentes en suero es de origen hepático. Los niveles elevados de esta
enzima están asociados con desórdenes hepatobiliares y pancreáticos; también se presentan en
alcohólico.
Método: Ensayo cinético.
Fundamento: Determinación cinética de la actividad de la gamma glutamil transferasa,de acuerdo
a la siguiente reacción:
g - GT
L-g-glutamil-3carboxi-p-nitroanilina------àL-g-glutamilglicina
+ glicil glicina + 5-amino-2-nitrobenzoato
R1 Tampón Tampón TRIS pH 8.25 100 mmol/l
R2 Comprimido Glicilglicina 100 mmol/l
L-g-glutamil-3carboxi-p-nitroanilina 3 mmol/l
Preparación y estabilidad: Disolver un comprimido en 50 ml de tampón R1. La estabilidad es de
21 días a 2 a 8 0C ó 5 días a temperatura ambiente.
Muestra: Suero, no utilizar plasma. La g - GT es estable en el suero durante 8 horas a 15 0C ó 3
días a 2-8 0C, o un mes a –20 0C.
Manual
Muestra 100 l
0
Mezclar y esperar 1 minuto a 37 C. Anotar la lectura a 405 nm (400-410) y poner en marcha el
extinción por minuto (DE/min).
Cálculo:
DE/min x 1190 = U/l.
procedimiento)
Linealidad: Hasta 250 U/l. Para concentraciones mayores mezclar 0.1 ml (100 l) de muestra con
10.Factor de conversión:
1U/l = 16.67 x 10-9 kat/l
= 16.67 x 10-3 kat/l
1kat/l = 60 U/l
(H) 11 - 50 U/l (M) 7 - 32 U/l
Notas: La hemólisis interfiere en el ensayo; al igual que los anticonvulsivantes (barbitúricos,
alantoína y fenitoína)
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de GGT determinados por este método
Semiología:
Aumento: Colecistitis, Colelitiasis, Cáncer metastásico del hígado, Cirrosis hepática, Pancreatitis,
Cáncer de los conductos biliares, Alcoholismo, Uso de barbitúricos, Obstrucción del tracto biliar.
Referencias:
SAS, G. Persijn, J.P. y cols. Z. Clin. Chem. Clin. Biochem 12,228 (1974).
__________________________________
COLINESTERASA (CHE) (EC: 3.1.1.8)
Método: Test cinético-colorimétrico. Birreactivo
Fundamento: La colinesterasa cataliza la hidrólisis de los ésteres de colina. Utilizando la
butirilcolina se determina la colinesterasa cinéticamente de acuerdo a las siguientes reacciones:
CHE
Butirilcolina + H2O -----------à Tiocolina + Butirato
Tiocolina + Ditiobisnitrobenzoato -----à

2-nitro-5-mercaptobenzoato
R1 Tampón Tampón fosfato 50 mmol/l
5.5 DTNB 0.25 mmol/l
R2 Butirilcolina 7 mmol/l
Preparación y estabilidad: Disolver el contenido del frasco R1 con 250 ml de agua destilada. La
estabilidad de esta solución es de 8 semanas a 2 a 8 0C y al abrigo de la luz.
Disolver el contenido del frasco R2 con 100 ml de agua destilada. La estabilidad de esta solución
es de 8 semanas a 2 a 8 0C.
Muestra: Suero, plasma heparinizado o con EDTA. Estable durante 7 días a 15-20 0C.
R1 3 ml
Muestra
Muestra diluida 1:2 con sol. Salina. 0.02 ml
R2 0.10 ml
Mezclar y verter la solución en la cubeta, y poner en marcha el cronómetro. Repetir la lectura a 30,
60 y 90 seg. a 405 nm, a 370C, frente a aire o agua destilada. Calcular el valor medio de la
disminución de extinción por 30 seg. (DE/30 seg.).
Cálculo: DE/30 seg. x 39000 = U/l.
procedimiento)
Linealidad: Si la actividad es > 93 000 (DE/min > 0.200), mezclar 0.1 ml (100 l) de muestra con
10.
1U/l = 16.67 x 10-9 kat/l
= 16.67 x 10-3 kat/l
1kat/l = 60 U/l
4659 - 14443 U/l
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de CHE determinados por este método
Semiología:
Aumento: Síndrome nefrótico.
Disminución: Enfermedades hepáticas parenquimatosas: Hepatitis vírica, Cirrosis, Carcinoma
metastásico, Congestión hepática de la insuficiencia cardiaca, Absceso amebiano, Sus cifras más
bajas son características del acmé de la hepatitis aguda. Ya que, en la recuperación, esta enzima
vuelve a la normalidad, se puede decir que sus niveles sirven de evaluación y de pronóstico. Es
casi siempre baja en la cirrosis con ictericia, ascitis u otras evidencias de insuficiencia
parenquimatosa. Su depresión persistente en los cirróticos es de muy mal pronóstico, Desnutridos
con infecciones agudas, Anemias, IMA, Dermatomiositis, Intoxicación por insecticidas órgano
fosforados ya que son inhibidores potentes de esta enzima.
Notas: En todas estas enfermedades las cifras de CHE están disminuidas en los pacientes que
muestran también disminución de la albúmina sérica; por lo que se ha sugerido que sus niveles
bajos indican una síntesis proteica disminuida por parte del hígado.
Su determinación no se usa mucho como una medida del estado de la función hepática. Tampoco
existe comprobación suficiente de que sea útil en diagnóstico diferencial de las ictericias.
Referencias:
Kedel, M. et al. Klin. Wschr. 45, 325 (1967).
____________________________________
MAGNESIO
Método: Test colorimétrico Calmagita
Fundamento: El magnesio (Mg2+), forma un complejo de color púrpura al reaccionar con la
Calmagita en medio alcalino. La intensidad del color es proporcional a la concentración de
magnesio.
R1 Aminometilpropanol 1 mmo/l
EGTA 0.21mmol/l
R2 Calmagita 0.30 mmo/l
Estándar Sol de Mg 0.824 mmol/l
Estabilidad: Mezclar a partes iguales los reactivos R1 y R2. Esta solución es estable 24 horas
15-25 °C ó 4 días de 2-8 °C.
Muestra: Suero o plasma heparinizado.
Orina: Diluir la orina (dilución 1:3), 1 ml de muestra con 2 ml de agua destilada acidificada hasta
3,4 con HCl , multiplicar el resultado por 10 y multiplicar por el volumen de orina en litros. Ofrecer
los resultados en mmol /24 h.
Técnica:
Patrón 10 µl
Muestra 10 µl
Mezcla reactiva 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar e incubar 5 minutos a temperatura ambiente. Leer frente al blanco a 520 nm (500-550)
Coloración estable 30 minutos.
salina.
Cálculo:
Absorbancia Muestra
------------------------------- x CP = CM
Absorbancia Patrón
Factor de conversión: mmol/l x 0.25 = mg/dl
Linealidad: Hasta 2.06 mmol/l. Para concentraciones superiores mezclar 0.1 ml (100 l) de
resultado por 3 (dilución 1:3) Valores de referencia:
Suero: 0.66 – 1.03 mmol/l.
Orina: (H): 2.23 - 4.29 mmol/24h
(M): 2.50 - 4.21 mmol/24h
Notas: Se recomienda utilizar material de plástico desechable o de cristal o plástico pasados por
ácido (ac. Nítrico diluido a la mitad con agua destilada) y luego enjuagados varias veces con
agua destilada para evitar contaminaciones. Los detergentes pueden quelar la reacción e
invalidarán la determinación. No emplear plasmas obtenidos con anticoagulantes que se
complejan con el Ca, como EDTA, citrato u oxalato. Separar el coagulo lo antes posible al obtener
el suero, para evitar el trasiego de iones Ca hacia los hematíes. La lipemia y la hemólisis
interfieren en la determinación. Los reactivos contienen preservativos y otras sustancias que
pueden ser dañinos. No ingerirlos y evitar contactos con piel y mucosas. Usar preferentemente
material de un solo uso.
Control de calidad: Todos los sueros control con valores de calcio determinados por este método
Referencias:
1. Gindler E. Clin. Chem.. 17, 662, (1971)
1992.
_________________________________
FORMULA PARA LA DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.

Δ absorbancia 1 V 3
U/l    10
t  d v
 = coeficiente de extinción molar ó cm2 x mol-1
d = trayecto óptico de la cubeta en cm.
V = volumen total.
v = volumen de la muestra.
Dt = tiempo de medida en minutos.
Abreviaturas:
CP = concentración del patrón.
CM = concentración de la muestra.
PNP = paranitrofenol
Una Unidad Internacional (UI) se define como la cantidad de enzima que cataliza la
transformación de un micromol de sustrato por minuto en condiciones específicas.
1 kat = 60 Unidades (U)
1 U = 16.67 x 10-3 kat
Selección del procedimiento y equipo de análisis.
Antes de seleccionar un procedimiento de análisis se deben definir las metas de calidad. Sólo
entonces se podrá revisar la literatura técnica y tomar la decisión acerca de qué técnicas
cumplen mejor la meta.
El mismo principio vale para la selección del equipo.
Antes de comprar reactivos, equipos (kits) producidos comercialmente o sistemas de medición,
se debe reunir y revisar toda la información. Las características claves para el proceso de
evaluación están bien definidas en la tarjeta metódica que comprende los siguientes aspectos:
1. Principio del método.
2. Referencias bibliográficas.
3. Material que se va a investigar (suero, plasma, etc.)
4. Recolección y preservación del material problema (condiciones, tiempo).
5. Descripción de la técnica.
6. Blanco: tipos de blancos utilizados.
7. Patrón: preparación de estándares.
8. Evaluación final (longitud de onda, slit, etc.)
9. Preparación de los reactivos, su estabilidad.
10. Cristalería necesaria.
11. Calibración lineal entre ----- y ------ ó curva de calibración.
12. Especificidad, interferencias.
13. Sensibilidad ( = ± S ).
14. Reproducibilidad: x ± S (N); % CV o repetibilidad.
15. Exactitud.
16. Valores de referencia.
17. Factores biológicos que causan variación.
18. Tipo de distribución de los valores normales ( Gausiana, log-normal).
19. Consumo de reactivos por muestra, para 100 muestras.
20. Costo por muestra.
21. Tiempo necesario por muestra y en serie.
Tabla de conversión de unidades.

De unidades convencionales a unidades internacionales (SI) y viceversa.
Unidad Factor de Unidades
convencional conversión SI
0.0167
U/l kat/l
CPK, LDH, TGO, TGP, FAL,  60
AMIL, FAC, GGT, CHE 16.67
nkat/l
 0.06
U/l
59.5 
AU mg/dl  0.0168 mol/l
0.0114 
TG mg/dl  87.5 mmol/l
0.026 
Col mg/dl  38.66 mmol/l
0.167 
BUN mg/dl  6.006 mmol/l
0.0555 
Glic mg/dl  18.02 mmol/l
88.4 
Creat mg/dl  0.0113 mol/l
17.1 
Bil. mg/dl  0.0585 mol/l
10 
PT g/dl  0.10 g/l
10 
Alb g/dl  0.10 g/l
0.250 
Ca mg/dl  4.01 mmol/l
0.323
P mg/dl  3.097 mmol/l
0.111
Lact. mg/dl  9.008 mmol/l
0.411
Mg mg/dl  2.431 mmol/l
0.621 
Hb g/dl  1.61 mmol/l
0.179 
Hierro g/dl  5.59 mol/l

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS

Composición de reactivos: (concentración inicial)

PRUEBA DEL FRIO: (Prueba de los quilomicrones)

Composición de reactivos: (concentración final)

Composición de reactivos: (concentración inicial)

Piruvato – NADH + H+ ------à Lactato + NAD+

Composición de reactivos: (concentración final)

Tiocolina + Ditiobisnitrobenzoato -----à

FORMULA PARA LA DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.

Tabla de conversión de unidades.

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