Journal of Medical Microbiology ( 2009), 58, 469-475 DOI 10.1099 / jmm.0.

007559-0

Los análisis moleculares y clínicos del gen que codifica la

adhesina de unión a colágeno de
Streptococcus mutans
Ryota Nomura, 1 Kazuhiko Nakano, 1 Naho Taniguchi, 1
Jinthana Lapirattanakul, 1 Hirotoshi Nemoto, 1 nroos lisa, GRO 2
Satu Alaluusua 2, 3 y Takashi Ooshima 1

correspondencia 1 Departamento de Odontología Pediátrica, Universidad de Osaka Escuela de Odontología, Suita, Osaka, Japón

Kazuhiko Nakano

nakano@dent.osaka-u.ac.jp 2 Del Departamento de Enfermedades oral y maxilofacial, Hospital Central Universitario de Helsinki, Helsinki, Finlandia

3 Departamento de Pediatría y Odontología Preventiva, Instituto de Odontología de la Universidad de Helsinki, Helsinki, Finlandia

Streptococcus mutans es un patógeno conocido de la caries dental y sus principales antígenos de superficie celular han sido

ampliamente investigada. Recientemente, se identificó una proteína de aproximadamente 120 kDa Cnm con propiedades de unión a

colágeno tipo I, y su gen de codificación ( CNM) clonado y secuenciado. En el presente estudio, hemos secuenciado CNM de 47

diferentes clínica S. mutans cepas y se encontró que la alineación de nucleótidos del dominio de unión a colágeno fue bien

conservada. Hemos ideado un método de PCR para identificar la CNM gen, examinó la prevalencia de cnm- positivo S. mutans

las cepas en diversos grupos de madre e hijo, y se evaluó la significación de tales cepas para la transmisión y la caries dental. La
tasa de detección de cnm- cepas positivas fue significativamente menor en cepas aisladas de niños japoneses en la década de
2000 (8,0%) en comparación con los aislados en la década de 1980 (15,8%) ( P, 0,05). Además, la presencia de S. mutans poseyendo
CNM en salival muestras recogidas de 55 S. mutans- positivas parejas madre-hijo tenía 40 años y 32,7% en las madres y los
niños, respectivamente. La frecuencia de cnm- niños positivos cuyas madres también fueron positivas fue del 72%, que era
significativamente mayor que la de cnm- hijos de madres positivas con negativas ( P, 0,0001, odds ratio 17,5). Además, los
parámetros clínicos que indican la caries dental se incrementaron significativamente en los niños con cnm- positivo S. mutans en
saliva ( n 5 13), en comparación con aquellos con cnm- negativo S. mutans (n 5 15) y S. mutans- los niños negativos ( n 5 20) ( P, 0,01).
Estos resultados indican que cnm- positivo S. mutans cepas están estrechamente correlacionadas con la caries dental, mientras
que la transmisión vertical en cnm- positivas parejas madre-hijo también se demostró.

Recibido el 25 de octubre de 2008 Aceptado

el 3 de diciembre de 2008

INTRODUCCIÓN Los principales antígenos de proteína de superficie celular de S. mutans, que

incluyen tres tipos de glucosiltransferasas (Aoki et al.,
Streptococcus mutans, conocido por ser un patógeno importante de la caries
1986; Pucci et al., 1987; Hanada y Kuramitsu, 1989), un antígeno de proteína
dental, se clasifica en cuatro serotipos (c, e, f y k) en base a la composición
190 kDa (PA) (Okahashi et al., 1989) y cuatro tipos de proteínas de unión de
química de los polímeros de glucosa ramnosa específicos de serotipo (Hamada
glucano-(Gbps) (Banas et al.,
y Slade, 1980; Nakano
1997; Mattos-Graner et al., 2001; Sato et al., 1997 ;. Shah y Russell, 2004), han
et al., 2004a). La frecuencia de distribución de esos serotipos entre los
sido ampliamente investigado en estudios relacionados con su virulencia para
aislados clínicos orales se ha investigado, que mostró que la mayoría,
la caries dental Recientemente, la proteína de 120 kDa Cnm que codifica la
aproximadamente el 70-80%, se clasificaron como de serotipo C, seguido de
adhesina de unión a colágeno de S. mutans se caracterizó, y su gen de
e (aprox. 20%), con menos de 5% de las cepas clasificadas como serotipo f o
codificación fue clonado y secuenciado (Sato et al., 2004). La frecuencia de
k (Hirasawa y Takada, 2003; Shibata et al., 2003; Nakano et al., 2004b).
distribución de la CNM gen en 102 S. mutans

cepas en nuestro estudio anterior ha demostrado ser un 21,4%, con

Los números de acceso GenBank / EMBL / DDBJ para el CNM secuencias de los 47 aislados
clínicos reportados en este documento son AB465259- AB465305. cnm- cepas positivas que muestran una distribución predominante entre las
cepas con los serotipos menor f y k, que

007559 G 2009 SGM Impreso en Gran Bretaña 469

R. Nomura y otros

Tabla 1. Los cebadores de PCR utilizados en este estudio

nombre propósito Secuencia (5 § la 3 §) referencia

MKD-F S. mutans detección GGC CAC ACA ACA TTG GGA AGC TCA GTT Hoshino et al. ( 2004)
MKD-R GGA ATG CCG ATC AGT CAG CAA GAT
SC-F determinación serotipo c CGG AGT GCT TTT TAC AAG TGC TGG Shibata et al. ( 2003)
SC-R AAC CAC GGC CAG CAA ACC CTT TAT
SE-F e determinación del serotipo CCT GCT TTT AAC AAC GTA TTC GCC Shibata et al. ( 2003)
SE-R CTG CTT GCC AAG CCC TAC TAG AAA
SF-F determinación f Serotipo AGA CCC ACA ATT GGC TTC AAG AGG Shibata et al. ( 2003)
SF-R TGC GAA ACC ATA ATA GCG AGC AGG
CEFK-F k determinación Serotipo ATT CCC GCC GTT GGA CCA TTC C Nakano et al. ( 2004b)
KR CCA ATG TGA TTC ATC CCA TAC C
CNM-1F CNM amplificación GAC AAA GAA GAT ATG AAA GT este estudio

CNM-BF GAC GAT CAA AAT CCT AAG AC

CNM-1R GC AAG GCA ACT CTT GTC CCT
CNM-IN1 CNM secuenciación CTT GCA GAA TAT CAC CGG CTG G este estudio

CNM-IN2 GTG AGT CTT ATC GCG GTC AAG AAG G

CNM-CF RT-PCR para CNM CTG CTG AGG TTA TCG TTA AA este estudio

CNM-CR CAC CTA TGT AAG CAT CAT TC

También se demostró que tienen características únicas (Nakano . Alineación de nucleótidos de la cepa Z1 en la base de datos GenBank (. GenBank nº de

et al., 2007). acceso AB102689) amplificación por PCR se realizó en un termociclador (iCycler; Bio-Rad)
con los siguientes parámetros de ciclado: desnaturalización inicial a 95 u C durante 4 min, y
El desarrollo de caries dentales en los resultados de la destrucción del esmalte en luego 30 ciclos que consiste en 95 u C durante 30 s, 60 u C durante 30 s y 72 u C durante 2
las superficies dentales, lo que lleva a la dentina exposición (Selwitz et al., 2007). La min, con una extensión final a 72 u C durante 7 min. Los fragmentos amplificados

proteína Cnm se ha demostrado que poseen actividad de unión a colágeno de tipo I

(Sato et al.,
2004), un componente orgánico principal de la dentina, mientras que
aproximadamente el 20% de S. mutans cepas estudiadas se muestra
también que poseen actividad de unión a colágeno, que se considera como
una ventaja para la unión a la dentina expuesta (Switalski et al., 1993). En el
presente estudio, la distribución de las cepas con el CNM gen se analizó
usando muestras de saliva de los niños y sus madres. Además, se investigó
la correlación entre los sujetos con cnm-

cepas positivas y los parámetros clínicos de la caries dental.

MÉTODOS
cepas bacterianas. De 2002 a 2006, se aislaron 213 cepas orales de
S. mutans a partir de las muestras obtenidas de 213 niños japoneses que vinieron a nuestra
clínica y 60 cepas de 60 de sus madres que participaron en conferencias de higiene oral
celebrada en nuestra clínica. Además, 95 cepas aisladas de los niños japoneses que
visitaron nuestra clínica entre 1982 y 1990, y 110 cepas aisladas en Finlandia a principios
de 1990 se investigaron. Todas las cepas se confirmó que eran S. mutans basado en las
propiedades bioquímicas, tales como perfiles de fermentación de azúcar positivos para
manitol, sorbitol, rafinosa y melibiosa (1% cada uno) en fenol caldo de rojo (Difco), y una
morfología de la colonia en bruto en agar Mitis Salivarius (Difco) placas que contiene
bacitracina (0,2 U ml 2 1;
Fig. 1. Estructura propuesta de MCC en el S. mutans aislados clínicos. (a) La
Sigma Chemical) y 15% (w v) de sacarosa /. Además, la confirmación de S. mutans y la estructura putativa de Cnm en cepas representativas (MT4289 y MT4363) en
determinación de serotipo se llevaron a cabo mediante PCR utilizando S. mutans- conjuntos
comparación a la de la cepa se ilustra Z1. Las líneas horizontales indican la longitud
específicos y específicos de serotipo de cebadores, que se enumeran en la Tabla 1.
entera de la CNM
gen. Las flechas indican las posiciones de cebadores, diseñados en base a la alineación
de nucleótidos de la CNM de genes de la cepa Z1. Lleno rectángulos muestran los ORFs.
determinación de CNM secuencia. La longitud entera de la CNM
gen en todas las cepas se amplificó por PCR usando Takara Ex Taq CDB, colágeno dominio de unión. (b) Número de repeticiones en el B repite región para 47

la polimerasa (Takara Bio) con los cebadores apropiados (CNM-1F y CNM-1R ;. aislados clínicos. La barra vertical en negrita indica el valor medio.
Tabla 1, Fig 1), que se construye a partir de la CNM

470 Revista de Microbiología Médica 58


de 47 cepas se clonaron en un vector pGEM-T Easy (Promega) y sus alineaciones de
nucleótidos se determinaron utilizando una reacción DyeTerminator con un sistema de
secuenciación de ADN (ABI Prism 310 Genetic Analyzer; Applied Biosystems). y un kit de
secuenciación de ciclo terminador BigDye Para para obtener la secuencia completa,
cebadores internos .. (CNM-IN1 y CNM-IN2 ;. Tabla 1, Fig 1) análisis de los datos se
utilizaron se realizó con software Gene Works (IntelliGenetics) las secuencias de cada
cepa se compararon utilizando el análisis de alineación múltiple con CLUSTAL W del Banco
de Datos de ADN de Japón (DDBJ; Mishima, Japón) (Thompson et al., 1994).
la expresión del ARNm del gen Cnm codifica. Para confirmar la expresión del ARNm del
dominio de unión a colágeno de la CNM gen, se utilizó un método de RT-PCR con
CNM-CF y CNM-CR cebadores (Tabla 1), como se describe previamente (Nomura et
al., . 2005) Con el fin de confirmar que cDNA se extrajo con éxito, se realizó la
amplificación de 16S rRNA utilizando los siguientes conjuntos de cebadores: 5 9- GTG
GGA CGC AAG GAA ACA CAC TGT GC-3 9 y 5 9- CGT CGC CTT GGT AAG CTC
TTA CCT TAC C-3 9 ( Matsumoto-Nakano y Kuramitsu, 2006).
propiedades de las cepas clínicas de unión a colágeno. propiedades de unión a colágeno se
evaluaron según el método descrito por Waterhouse y Russell (2006), con algunas
modificaciones colágeno de tipo I [de colágeno (tipo I) en ácido 0,25 M acético; Sigma]. se
revistió sobre placas de cultivo de tejido de 96 pocillos ( Beckton Dickinson) y se incubaron
durante la noche a 4 u C, a continuación, las placas se lavaron tres veces con PBS y se
bloquearon durante 1,5 h con 5% de BSA en PBS a 37 u C. A continuación, los pocillos se
lavaron de nuevo con PBS que contenía 0,01% de Tween 20. Las células de cultivos de una
noche de S. mutans crecido en caldo de infusión de corazón cerebro (Difco) se recogieron por
centrifugación y se añadió a los pocillos, después de que los números de bacterias se
ajustaron con PBS. Después de 3 h de incubación a 37 u C, las células adherentes se lavaron
tres veces con PBS, después se fijaron con 200 m l 25% de formaldehído a temperatura
ambiente durante 30 min. Después de otros tres lavados con PBS, las células adherentes se
tiñeron con 200 m l 0,05 violeta% de cristal (Wako) en agua durante 1 min y se lavó tres veces
con PBS, a continuación, el colorante se disolvió por adición de ácido acético al 7% (200 m l)
antes de determinar el la 595. En primer lugar, las correlaciones de la cantidad de colágeno
(0,002 a 2 mg) y el número de bacterias (1 6 10 8 -1 6 10 10 ufc) con las actividades de unión a
colágeno de la TW871 ( cnm- positivo) y MT8148 ( cnm- Se evaluaron) de las cepas negativas. A
continuación, las actividades de unión de colágeno de 99 cepas clínicas (47 cnm- positiva y 52 cnm-
cepas negativas) se analizaron bajo la condición fija de 2 colágeno mg y 1 6 10 10
células bacterianas. Los resultados para cada cepa se expresaron como un porcentaje en
comparación con la propiedad de unión de TW871, que se definió como 100%.
Los métodos de PCR para la identificación de cepas con la CNM gen.
Sobre la base de la alineación de nucleótidos determinada para los 47 cepas, conjuntos de
cebadores diseñados para detectar específicamente cnm- cepas positivas fueron construidos.
(CNM-BF y CNM-1R ;. Tabla 1, Fig 1) amplificación por PCR se realizó utilizando Takara Ex Taq la
polimerasa (Takara Bio) con los siguientes parámetros de ciclado: desnaturalización inicial a 95 u C
durante 4 min, y luego 30 ciclos que consiste en 95 u C durante 30 s, 60 u C durante 30 s y 72 u C
durante 1 min, con una extensión final a 72 u C durante 7 min. En primer lugar, la especificidad de
nuestro método se confirmó utilizando 102 cepas en las que la presencia de la CNM gen había sido
confirmada por hibridación de transferencia de Southern en nuestro estudio anterior (Nakano et al., 2007).
Además, el análisis de PCR se llevó a cabo para todas las cepas bacterianas utilizadas en este
estudio cuya secuencia completa se había determinado, con esos resultados también se utiliza para
confirmar la especificidad. Por último, se determinó la sensibilidad del método utilizando cultivos
tituladas de S. mutans NN2115 (serotipo f). Cuando se analizaron usando ensayos de PCR
simultáneas con los números conocidos de células bacterianas diluidas en agua destilada estéril, el
límite de detección de nuestro método se reveló en un rango de 10 a 100 células.
http://jmm.sgmjournals.org
S. mutans CNM gene
La detección de S. mutans con el CNM gen en la saliva especímenes de los niños y sus madres. .
Todos los procedimientos descritos en el presente estudio fue aprobado por el Comité
Ético de la Facultad de Odontología de la Universidad de Osaka expectorado muestras
de saliva total se recogieron de 101 parejas madre-hijo (madres, 24-47 años de edad,
los niños, 47 varones y 54 niñas, 2-15 años de edad) que participaron en conferencias
de higiene bucal en nuestra clínica entre 2005 y 2007. las muestras se procesaron para
el ensayo de PCR utilizando un método descrito previamente (Hoshino et al., 2004). Los
análisis de PCR se realizaron para determinar la presencia de S. mutans ADN y la CNM
génica utilizando el método descrito en la sección anterior.
Correlación de la presencia de S. mutans especies con el CNM
gen y la caries dental. Con el fin de comparar la incidencia de la caries dental en los dientes
de leche, 48 niños que llegaron a nuestra clínica 2005-2007 fueron seleccionados (22
niños y 26 niñas, 3-8 años de edad) en base a los siguientes criterios: historias clínicas
eran precisas disponible con respecto a la caries dental cuando se tomaron las muestras
de saliva, y el sujeto poseían más de 14 dientes primarios y menos de 8 dientes
permanentes, que correspondían a niños menores de 8. los exámenes clínicos se llevaron
a cabo con un espejo y explorador bajo una dental operación de la luz por un único
examinador experto de acuerdo con criterios establecidos por la OMS (1987) los sujetos
fueron divididos en tres grupos :. aquellos con cnm- positivo S. mutans ( grupo A), los que
tienen cnm- negativo S. mutans ( grupo B) y los que no tienen S. mutans
detectado (grupo C). La condición de los dientes primarios se expresó como números de
dientes que fueron cariados (d), se extrajo debido a la caries dental (E) y había llenado
superficies (f) (defs). Los resultados se expresan como la 'tasa defs', que se calculó
dividiendo (d + e + f) por el número total de superficies (s).
Los análisis estadísticos. Los análisis estadísticos se realizaron con los paquetes de
software de cálculo StatView 5.0 (SAS Institute) y Prisma 4 (GraphPad Software).
actividades de enlace de colágeno de la cnm-
positiva y cnm- cepas negativas se compararon mediante Estudiante de t-
de prueba. Se utilizó la prueba de la diferencia menos significativa protegida de Fisher para
comparar las tasas de detección de S. mutans con el CNM gen en los niños cuyas madres
poseen cnm- positivo S. mutans en comparación con los niños cuyas madres no lo hizo. La
relación entre la intensidad de la expresión del ARNm de la CNM genes y collagenbinding
propiedades se analizaron mediante análisis de regresión. Los valores para el odds ratio y
el intervalo de confianza del 95% se calcularon para determinar la significación de la
asociación entre los niños con S. mutans con el CNM gen y sus madres poseen las mismas.
Las comparaciones entre las puntuaciones de la caries dental en los sujetos que poseen
cnm- positivo S. mutans, aquellos que poseen cnm- negativo S. mutans, y los que no S.
mutans se realizaron utilizando ANOVA de una vía (Bonferroni prueba de comparación
múltiple). P valores de menos de 0,05 se consideraron significativos.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La prevalencia de cnm- positivo S. mutans aislados clínicos
Un total de 47 de las 478 cepas ensayadas se demostró que poseer la CNM gen, por
lo tanto la prevalencia de S. mutans con CNM
entre los aislados oral fue de 9,8%. La Tabla 2 enumera la prevalencia de
cnm- cepas positivas en base a la clasificación serotipo. La tasa de detección para
la CNM gen en cepas de serotipo F fue el más alto, seguido por el serotipo k,
mientras que 25 de 359 cepas de serotipo c resultaron ser positivo. Una
comparación de las frecuencias en los niños japoneses en diferentes décadas
mostró que las cepas aisladas en 2002-2006 tenían una significativamente menor
471
R. Nomura y otros
Tabla 2. La prevalencia de CNM gen en S. mutans aislamientos orales de distintas poblaciones
serotipo Proporción de cepas aisladas en la década de 1980 y principios de 1990
Los niños japoneses niños finlandeses hembras adultas finlandeses
c 10/72 (13,9%) 0/18 (0%) 1/63 (1,6%)
e 3/20 (15,0%) 0/3 (0%) 2/17 (11,8%)
F Dos tercios (66,7%) 0/2 (0%) 3/3 (100%)
k No hay cepas 1/1 (100%) 0/3 (0%)
total 15/95 (15,8%) * 1/24 (4,2%) 6/86 (7,0%)
* P, 0,05 entre los dos grupos de prueba de probabilidad exacta de Fisher.
tasa de detección (8,0%) que los aislados en 1982 a 1990 (15,8%, P, 0,05).
Por otra parte, la tasa de detección en las muestras obtenidas de hembras
adultas japonesas en 2002- 2006 se demostró que era 13,3%, lo que fue
mayor que en los de los niños en 2002-2006, aunque la diferencia no fue
estadísticamente significativa. Este hallazgo puede indicar que el CNM gen
se adquiere con la edad, mientras que otra posibilidad es que la salud
dental de las madres en su infancia no fue tan buena como la de sus hijos.
En cuanto a los sujetos finlandeses, sólo había siete cepas aisladas en la
década de 1990 resultó ser positivo para la CNM gen y la tasa de detección
fue menor que la de las cepas de los niños japoneses aislados en el
período de 1982-1990 que indica que la prevalencia de cnm- cepas
positivas podrían ser geográficamente dependiente, aunque la diferencia
no fue estadísticamente significativa.
Caracterización molecular de CNM en S. mutans
aislados clínicos
La Fig. 1 (a) muestra una ilustración de la estructura de la proteína Cnm
presunta en los aislados clínicos analizados en el presente estudio. La
secuencia de aminoácidos putativa de la
CNM Se informó de gen de la cepa Z1 (GenBank nº de acceso AB102689.)
para contener 538 aminoácidos, que incluye el dominio de unión a colágeno
(CDB; residuos 152-316), putativo B repite de dominio (residuos 328-455) y
un motivo LPXTG ( los residuos 507-511) (Sato et al., 2004). Este es el
primer estudio para llevar a cabo análisis moleculares de la CNM
génica utilizando un gran número de S. mutans aislados clínicos. Nuestro
análisis de la alineación de nucleótidos de CNM en 47 aislados clínicos
mostró que el número de aminoácidos varió de 448 (MT4363 cepa) a 564
(MT4289 cepa). La secuencia de aminoácidos de la CDB en todas las
cepas fue casi el mismo y el motivo LPXTG se confirmó ser conservadas
entre todos. en cuanto al número de repeticiones B, se informó cepa Z1
para contener 21 repeticiones (Sato et al.,
2004), mientras que los números en las especies analizadas en el presente
estudio varió de 6 (MT4363 cepa) a 25 (MT4289 cepa), con el número medio
para los 47 cepas clínicas que han demostrado ser 19,7, y la mayoría de las
cepas contenida 15-25 repeticiones (Fig. 1b). el número de repeticiones y la
longitud de las unidades de repetición, se mostró a ser dependiente de la
variación de especies (Sato et al., 2004), por lo que se especuló que la
472
Proporción de cepas aisladas en la década de 2000 total
Los niños japoneses hembras adultas japonesas
13/162 (8,0%) 1/44 (2,3%) 25/359 (7,0%)
0/43 (0%) 2/9 (22,2%) 7/92 (7,6%)
4/4 (100%) 4/5 (80,0%) 13/17 (76,4%)
0/4 (0%) 1/2 (50,0%) 2/10 (20,0%)
17/213 (8,0%) * 8/60 (13,3%) 47/478 (9,8%)
CNM gen en S. mutans es exógeno y derivado de múltiples especies. Además,
el análisis RT-PCR reveló que la expresión de ARNm de la CNM gen era
extremadamente débil en 11 de las 47 cepas, la mitad de las cuales fueron
aisladas de los niños japoneses en la década de 1980 a principios de 1990.
propiedades de las cepas clínicas de unión a colágeno
Un número de estudios han señalado la adhesión celular de S. mutans al
colágeno, y las cepas con y sin collagenbinding han sido reportados
propiedades (amor et al., 1997; Petersen et al., 2002). Recientemente, la
proteína Cnm fue demostrado que poseen actividad de unión a colágeno
(Sato et al.,
2004) y su distribución de frecuencias se informó a ser aproximadamente
el 20% (Nakano et al., 2007), que es bastante similar a la mostrada para S.
mutans cepas con propiedades collagenbinding (Switalski et al., 1993). Así,
las propiedades de unión a colágeno de S. mutans se investigó en el
presente estudio, centrándose en la proteína Cnm.
Las propiedades de unión a colágeno de TW871, se mostró a aumentar con
aumentos correspondientes en las cantidades de colágeno y bacterias (Fig.
2a, b), mientras que la cepa MT8148 no mostró propiedades de unión a
colágeno. Además, el ensayo con 99 cepas clínicas usando 2 mg colágeno y
10 10
células bacterianas mostraron que las propiedades de unión a colágeno de
cepas con la CNM gen fueron significativamente más altos que los de las
cepas sin el gen ( P, 0,01) (Fig. 2c). Con las propiedades de TW871 definen
como 100%, la intensidad de la unión de las cepas con el CNM gen varió de
0,0 a
217,9%. Aproximadamente la mitad de las cepas tenía propiedades de alta unión, el
20% cepas aunque las propiedades de unión eran extremadamente débil.
Resultados de RT-PCR para las cepas con mostraron extremadamente débil de
unión que la expresión de mRNA de la CNM de genes en los que también era
extremadamente débil. Además, CNM la expresión de ARNm se correlacionó
positivamente con la intensidad de unión a colágeno (análisis de regresión
P 5 0,0109, r 5 0,37). En base a estos resultados, es razonable especular que la
proteína Cnm es uno de los principales factores asociados con las propiedades
de unión a colágeno de S. mutans.
Sin embargo, cabe señalar que 11 cepas (1 serotipo E, 3 serotipo F y 7
serotipo k) sin la CNM gen tenía propiedades de unión a colágeno, lo que
indica la implicación de otros factores cruciales desconocidos en estas
cepas.
Revista de Microbiología Médica 58
 S. mutans CNM gene

(A) (B) (C)

**

1.5 1.5 200

150

tasa de adherencia (%)

1.0 1.0
la 595

la 595
100

0.5 0.5
50

0,002 0,02 0,2 ​2 10 8 10 9 10 10 CNM + CNM _

colágeno (mg) Las bacterias (CFU) ( n = 47) ( n = 52)

Fig. 2. propiedades de unión a colágeno de S. mutans las células. (a) S. mutans células MT8148 y TW871 (1 10 10 ufc) se añadieron por separado a pocillos recubiertos
con diversas cantidades de colágeno. (b) Diversas cantidades de S. mutans células MT8148 y TW871 (1 10 8 -1 10 10 ufc) se añadieron por separado a pocillos recubiertos
con colágeno 2 mg. (c) S. mutans cepas (1 10 10 ufc) con o sin el CNM gen se añadieron a placas revestidas con colágeno 2 mg. Se encontraron diferencias
estadísticamente significativas entre los dos grupos (Student de t- ** prueba P, 0,01). Barras horizontales indican los valores medios. h, MT8148: Y, TW871; #, cnm-

negativas de tensión; $, cnm- cepa positiva. La unión de TW871 colágeno se definió como 100%.

La transmisión vertical del S. mutans con CNM
analizaron usando muestras de saliva
la transmisión intrafamiliar de S. mutans ha sido ampliamente investigado
utilizando la clasificación serotipo (Berkowitz et al.,
1975), los perfiles de actividad de la bacteriocina (Davey y Rogers, 1984), la
huella dactilar de ADN cromosómico (Emanuelsson y Thörnqvist, 2000),
ribotipificación (Kohler et al., 2003), un método de PCR arbitrariamente cebada
(Li & Caufield, 1998) y escribiendo secuencia de multilocus (Nakano et al., 2007),
con los resultados de la mayoría de los que indican la transmisión de madre a
hijo. Sin embargo, pocas investigaciones de madre a hijo
la transmisión se han centrado en los genes virulentos específicos. Li
et al. ( 2005) analizaron las cepas transmitidos y no transmitidos que se
centran en los genes que codifican mutacina, que mostró que las cepas
con Mutai se encuentra con frecuencia en el grupo de no transmitida. En el
presente estudio, nos centramos en la CNM gen con el fin de determinar si
S. mutans cepas con o sin el gen eran altamente transmisible.
especímenes de saliva de 55 pares de madres y sus hijos fueron positivos
para S. mutans, que fueron divididos en 4 grupos en función de la ausencia
o presencia de la bacteria y la CNM gen (Fig. 3a). La CNM se detectó gen
en 32,7% de la S. mutans- los niños positivos

Fig. 3. La detección de S. mutans con el CNM gen en la saliva especímenes de parejas madre-hijo. (a) La aparición de cepas con la CNM gen se analizó en los niños, y los
sujetos se clasificaron en aquellos con madres que recibieron o no poseen cnm- cepas positivas. Un total de 55 parejas madre-hijo demostrado que el puerto S. mutans en
muestras de saliva fueron clasificados en cuatro categorías basadas en la identificación de la CNM de genes en las bacterias que se encuentran en los niños y sus madres.
(b) Las tasas de detección de la CNM gen en los niños clasificados como los que tienen las madres que recibieron o no poseen cepas con el CNM Se encontraron genes.
diferencias estadísticamente significativas entre los dos grupos (prueba de la diferencia menos significativa protegida de Fisher

*** P, 0,0001).

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R. Nomura y otros
Fig. 4. Correlación de la condición de la caries dental y la identificación de S. mutans con o sin la CNM sujetos gen. (a) Niños clasifican por la presencia de S.
mutans y la CNM gen. Cuarenta y ocho niños fueron divididos en S. mutans- positiva y
- grupos negativos, con el S. mutans- grupo positivo clasifica como cnm- positiva o -negativa. (b) Las puntuaciones de los sujetos de caries dentales en base a la clasificación en
(a). Se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos (prueba de comparación múltiple de Bonferroni ** P, 0,01).
y 40% de la S. mutans- madres positivas. Por otra parte, la tasa de niños
con cnm- positivo S. mutans cuyas madres también poseía cnm- positivo S.
mutans era 72%, que fue significativamente mayor que el de aquellos
cuyas madres no (9,1%) ( P, 0,0001, odds ratio 17,5, 95% intervalo de
confianza 1,2 a 250,4) (Fig. 3b). La tasa de niños con cnm- positivo S.
mutans cuyas madres también poseía cnm- positivo S. mutans fue alta, lo
que indica que la transmisión vertical se produjo en el cnm- positivas
parejas madre-hijo.
La caries dental de los niños con experiencia cnm-
muestras de saliva positivos
Una vez que la caries dental progresa, la desmineralización de la superficie del
diente se produce y la dentina queda expuesta (Selwitz
et al., 2007). Es razonable especular que las cepas con propiedades de
unión a colágeno tienen una ventaja con respecto a la fijación a la dentina,
en el que el principal orgánica
componente es colágeno de tipo I. En este estudio, nos centramos en la
detección de cepas con la CNM gen que codifica la adhesina collagenbinding a
fin de considerar la asociación clínica entre la presencia de cepas con el CNM gen
y la caries dental. Se ha informado de que varios genotipos de S. mutans están
presentes en la cavidad oral (Grönroos y Alaluusua, 2000; Kozai et al., 1999;
Saarela et al., 1996). Por lo tanto, muestras de saliva, que llevan microbios
representativa de toda la cavidad oral, se consideraron apropiados para la
identificación de cnm- positivo S. mutans en la cavidad oral en comparación con
los análisis de cepas aisladas. Además, el análisis saliva espécimen requiere
mucho menos tiempo que el aislamiento de las cepas y la extracción de su ADN
genómico.
Cuarenta y ocho niños fueron seleccionados en base a la disponibilidad de los
registros clínicos precisos con respecto a sus caries dentales y número de dientes
surgido en la cavidad oral (más de 14
474
dientes primarios y menos de 8 dientes permanentes). Un total de 28 fueron
positivas para S. mutans, de los cuales 13 poseían cnm-
positivo S. mutans ( grupo A) y 15 no lo hicieron (grupo B) (Fig. 4a). Como
para los niños con S. mutans ya sea positivo o negativo para CNM, los del
grupo A tenían una tasa defs significativamente más altos que los del grupo
B ( P, 0,01) (Fig. 4b). Además, los niños sin S. mutans detectado (grupo C)
tenía una tasa de defs significativamente menor en comparación con el
grupo A ( P, 0,01), mientras que no hubo diferencia significativa entre los
grupos B y C. Este hallazgo implica que la presencia de la proteína Cnm de S.
mutans está estrechamente correlacionado con experimentar la caries
dental. Por otra parte, hubo varios sujetos positivos para S. mutans
con CNM que tenían puntuaciones bajas de caries, lo que indica que otros factores
también juegan un papel importante en el desarrollo de la caries dental. En
conjunto, nuestros resultados sugieren que los individuos con cnm- positivo S.
mutans corren el posible riesgo para el desarrollo de la caries dental.
AGRADECIMIENTOS
Este estudio fue apoyado por el Centro de Excelencia del Siglo 21 (COE) del programa
titulado 'Originación de Frontier BioDentistry' en la Universidad de Osaka Graduate School
of Dentistry el apoyo del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología
de Japón, de Grants-in- Ayudas a la Investigación Científica (a) 19209063 y (B) 16390605,
de Grants-en-Ayudas a la Investigación exploratoria 17659647 y 19659538 de la Sociedad
Japonesa para la Promoción de la Ciencia y subsidios de ayuda para jóvenes científicos (a)
18689050 y (B) 19791572 del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y
Tecnología de Japón.
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