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ORAL
• van Leeuwenhoek (1632–1723) escreveu no seu caderno de laboratório:
– “I didn’t clean my teeth for three days and then took the material that had lodged in small
amounts on the gums above my front teeth. . . . I found a few living animalcules.”
• Os microrganismos desenhados no seu caderno são alguns dos microrganismos
que existem na cavidade oral incluindo cocus, bactérias fusiformes e
espiroquetas, o que já punha em evidência a complexidade do ecossistema oral.
• Treponema spp.
• Candida spp.
• Protozoários:
– Trichomonas tenax
– Entamoeba gingivalis
• Difteroides
Anatomia de um dente e dos seus tecidos de
suporte.
Esmalte
Dentina
Sulco gengival
Polpa
Gengiva
Osso alveolar
Ligamento periodontal
Formas de estudar a microflora oral na saúde e na doença
Nº de genomas Nº de taxas
conhecidas
Nº de espécies com
Pelo menos um genoma sequenciado
• Sequenciação e análise filogenética dos genes que codificam para o 16S rRNA
sequenciação
Novas formas de quantificar a microflora oral:
PCR em tempo real
Pirosequenciação para estudar
o microbioma oral
Análise quantitativa da microflora oral:
PCR em tempo real
PCR em tempo real com sondas TaqMan
Holland PM, Abramson RD, Watson R & Gelfland DH (1991). Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5'-->3'
exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase. Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 88: 7276-7280.
Roche Diagnostics
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Highly sensitive and highly specific, with a broad dynamic range.
Hibridação in-situ com sondas nucleotídicas
fluorescentes (FISH)
Identificação de bactérias orais por cultura
Ecossistemas primários ou nichos ecológicos da
cavidade oral
Nature, 2012
Microflora da mucosa oral (105-106 bactérias/ml)
O sulco Esmalte
gengival
Dentina
possui:
Sulco gengival
• Um
Polpa
ambiente
Gengiva
anaeróbio
• Possui
nutrientes Osso alveolar
essenciais Ligamento
para periodontal
bactérias
anaeróbias
Composição microbiana do sulco gengival em
estado de saúde periodontal
– Lábios
– Bochecha
– Palato
– Gengiva
– Amígdalas
• Anterior ao nascimento
• Nos primeiros dias de vida
• Anterior à erupção dos dentes
– Flora inclui Streptococcus vestibularis
Aquisição da microflora oral
• Anterior ao nascimento
• Nos primeiros dias de vida
• Anterior à erupção dos dentes
• Após erupção da dentição primária
– A erupção dos dentes modifica a cavidade oral
significativamente uma vez que aparecem
superfícies dentárias de fácil colonização
bacteriana;
– Desenvolve-se o sulco gengival
Aquisição da microflora oral
• Anterior ao Nascimento
• Nos primeiros dias de vida
• Anterior à erupção dos dentes
• Após erupção da dentição primária
• Infância e adolescência
– A microflora oral é gradualmente adquirida
durante a infância e adolescência.
– Um pouco antes da idade adulta todos os
membros da flora residente estão presentes.
Aquisição da microflora oral
• Anterior ao nascimento
• Nos primeiros dias de vida
• Anterior à erupção dos dentes
• Após erupção da dentição primária
• Infância e adolescência
• Adultos e terceira idade
– Prevotella melaninogenica, P. intermedia e P. loescheii são
comuns no periodonto saudável.
– Os anaeróbios Gram negativos com pigmento negro estão
presentes nos indivíduos idosos com ou sem prótese.
– Não se isola Porphyromonas gingivalis ou Aggregatibacter
actinomycetemcomitans
Adultos e terceira idade
fases distintas:
– Formação da película
adquirida
– Colonização primária
– Colonização secundária
– Biofilme estável
Formação da película adquirida e colonização
primária
• A película adquirida é constituída por constituintes da saliva que
se adsorvem especificamente às superfícies de apatite do dente.
Incluem-se aqui como vimos anteriormente:
• lisozima
• albumina
• amilase
• imunoglobulina A
• proteínas ricas em prolina (PRPs)
• mucinas
• As bactérias ligam-se à película e são retidas mecanicamente
entre o material da película.
• Forma-se uma monocamada constituída por bactérias individuais
ou pequenos grupos de bactérias_ colonização primária.
Superfície oral preferida para colonização primária
por diferentes espécies de Streptococcus
• Tecidos duros
– S. mutans
– S. sanguinis
– S. gordonii
– S. oralis
– S. mitis
• Tecidos moles
– S. salivarius
Colonização primária
• Os Streptococcus spp. multiplicam-se e bacilos Gram +
ligam-se aos cocos.
• Os dextranos facilitam a agregação do S. mutans em
estruturas designadas por maçaroca de milho.
• Os Actinomyces spp. colonizam a margem gengival.
• Nas placas de fissura podem existir alguns lactobacilos.
– Os lactobacilos não são capazes de se ligar ao dente ou formar
placa. Contudo, podem ficar retidos mecanicamente nas fossas e
fissuras do dente.
• Na ausência de doença periodontal o processo termina.
Co-agregação dos Streptococcus mutans
em estruturas maçaroca de milho
• Estrutura de co-agregação constituída por
cocos dispostos em torno de um bacilo
central ou filamento.
• Sobreposição de bactérias.
• Consolidação de estruturas
∗ Bactérias filamentares
∗ Pares de coagregação
(Gram +/-) Placa Madura (+ anaeróbios)
Formação da Placa Supragengival
Película adquirida (3
horas)
Formação da Placa Supragengival (cont.)
Paul E. Kolenbrander et al. 2010. Oral multispecies biofilm development and the key role of cell-cell distance. Nature Reviews
Microbiology 8, 471-480.
Factores que influenciam a composição e maturação da
placa dentária
1-FACTORES BACTERIANOS
A) Produtos extracelulares:
• Glucanos (esqueleto da placa)- polímeros de glucose
• Frutanos (fonte de energia)- polímeros de frutose
B) Interacções bacterianas: Reacções de co-agregação.
C) Ecologia da placa:
– Mudanças da dieta.
• Por exemplo, a ingestão de açucares favorece a presença de bactérias acidúricas (que
toleram bem o pH ácido);
– Ausência de oxigénio no meio
• Favorece crescimento de bactérias anaeróbias;
– Interacções nutricionais facilitam a sucessão bacteriana
– Produção de bacteriocinas que condicionam o crescimento de
determinadas espécies bacterianas.
Exemplos de interações entre Streptococcus mutans e outros
estreptococus orais (S. gordonii, S. oligofermentans e S. sanguinis)
Factores que influenciam a composição e maturação da
placa dentária
1-FACTORES BACTERIANOS
A) Produtos extracelulares:
B) Interacções bacterianas
C) Ecologia da placa
D) Presença de pilis comuns nas bactérias Gram
negativas que funcionam como adesinas
– Facilitam colonização bacteriana porque permitem a ligação
da bactéria a receptores glicoproteicos na superfície celular.
Adesinas e adesão bacteriana
• A adesão envolve interações
químicas complementares entre
a célula do hospedeiro ou a
superfície de um tecido e a
superficie bacteriana.
• Esta interação é feita por
adesinas bacteriana que se
ligam covalentemente a um
receptor presente à superfície
do hospedeiro.
• As adesinas bacterianas são
componentes químicos das
cápsulas, paredes celulares, pilis www.bact.wisc.edu/.../Normalflora.html
ou fimbrias.
• Os receptores celulares são
normalmente glicoproteínas
localizadas na membrana
celular ou na superfície dos
tecidos.
Exemplos de adesinas e de regiões de adesão em tecidos
humanos
www.bact.wisc.edu/.../Normalflora.html
• Conservação à temperatura
ambiente
• Resultados em 20 minutos
Os resultados leêm- se ao fim de 20 – 40 minutos
Positivo Negativo
Controlo
de reacção
Positivo
HIV-1/2
Placa subgengival
• A placa subgengival está presente no sulco gengival em
situações em que há alterações no periodonto
(periodontite)
Gram +/- -
• Fluido gengival
• Dieta
• Saliva
• Produtos do hospedeiro
• Produtos bacterianos
Fluido gengival
• O fluido proveniente do sulco gengival contém:
– Proteínas séricas incluindo imunoglobulinas IgG
– aminoácidos
– vitaminas
– Glucose
• Normalmente o fluido gengival é protector:
– promove a limpeza das bactérias não aderentes e
respectivos produtos bacterianos.
– promove a entrada na área oral de células fagocíticas
e anticorpos.
Dieta:
Consistência física da dieta
Principais beneficiários:
• A saliva contém:
– Glicoproteínas
– aminoácidos
– glucose
– outras substâncias químicas digeríveis
• Estes materiais mantém o pH da boca a 6,5-
7,2 (se não houver muita placa!!!)
Produtos do hospedeiro
• Elevada taxa de descamação das células
epiteliais que podem fornecer nutrientes para
as bactérias da boca depois de lisadas.
• Dieta
• Saliva
• Fluido gengival
• Produtos do hospedeiro
• Produtos bacterianos
Interacções nutricionais inter-bacterianas com
influência na maturação da placa dentária
(retirado de Slots, J. and M. Taubman (1991). Contemporary Oral Microbiology and Immunology.
Mosby Year Book, St. Louis.)
Algumas dúvidas que persistem
• Que fenómenos podem explicar a diversidade
microbiana que existe nos diferentes locais
anatómicos da cavidade oral?
• Porque é que a placa supragengival contém
menos microrganismos Gram negativos que a
placa subgengival?
• Quais os factores bacterianos relacionados com o
estabelecimento da placa subgengival?
• Qual a contribuição da genética do hospedeiro
para formação da placa?
Factores genéticos do hospedeiro que podem determinar alterações
na composição da microflora oral