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PRÁCTICA 1

DETERMINACIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN Y COEFICIENTE DE


EXTINCIÓN MOLAR () PARA EL p-NITROFENOL.

INTRODUCCIÓN

Algunas sustancias disueltas presentan determinados colores que absorben la luz a


longitudes de onda comprendidas entre 400 y 700 nm (región visible) y la dejan pasar a
las demás. Existen otras sustancias incoloras a simple vista que son capaces de absorber
la luz ultravioleta, con longitudes de onda inferior a 400 nm o la luz infrarroja con
longitudes de onda superior a 700 nm. Cada sustancia absorbe energía radiante de una u
otra longitud de onda, siendo ésta una propiedad característica de dicha sustancia, tan
invariable como pueden ser los puntos de ebullición o de fusión y que permiten por lo
tanto su identificación.
Cuando se hace pasar un rayo de luz monocromática (de una determinada longitud
de onda) de intensidad inicial (I0) a través de una disolución de una sustancia colocada en
un recipiente transparente, parte de la luz es absorbida de manera que la intensidad de la
luz transmitida (I) es menor que I0. El grado de absorción de la luz depende de la longitud
de onda y de la concentración de soluto en la disolución , de acuerdo con la ley de Lamber-
Beer:
I0
A = log = c l
I
I0 = intensidad de luz incidente l = paso de luz (1 cm)
I = intensidad de luz transmitida c = concentración del soluto (M)
 = coeficiente de extinción molar A = absorbancia

Para obtener el espectro de absorción de una sustancia se determina la


absorbancia de una disolución de dicha sustancia a distintas longitudes de onda en
un espectrofotómetro. A la longitud de onda a la que se obtenga el valor mayor de
absorbancia se determinará el valor del coeficiente de extinción molar (). La
sustancia utilizada en esta práctica será el p-nitrofenol que posee un color amarillo
característico en disolución alcalina.

REACTIVOS

p-Nitrofenol 1mM (preparado en Tris/ClH 0,2 M pH 9,0


Tampón Tris/ClH 0,2 M pH 9,0

MÉTODO EXPERIMENTAL

1.- Se preparan 2 tubos, en uno de ellos se ponen 6 ml de tampón Tris/ClH 0,2 M


pH 9 y 0,1 ml de una disolución de p-nitrofenol 1 mM, y en el otro se ponen 6,1 ml de
tampón.
Para determinar el espectro de absorción del p-nitrofenol, se leerá la absorbancia
correspondiente a la disolución de p-nitrofenol a 360, 380, 390, 400, 410, 420, 440, 460,
480 y 500 nm, ajustando previamente con tampón Tris/ClH (blanco) cero de
absorbancia a cada longitud de onda.
2.-Para calcular el coeficiente de extinción molar () para el p-nitrofenol, se
prepara la siguiente serie de tubos:

Tampón [p-Nitrofenol]final Absorbancia


Tubo p-Nitrofenol Tris/ClH (mM) (400 nm)
1 0,2 ml 1,0 mM 6,0 ml
2 0,2 ml 0,9 mM 6,0 ml
3 0,2 ml 0,8 mM 6,0 ml
4 0,2 ml 0,7 mM 6,0 ml
5 0,2 ml 0,6 mM 6,0 ml
6 0,2 ml 0,5 mM 6,0 ml
7 0,2 ml 0,4 mM 6,0 ml
8 0,2 ml 0,3 mM 6,0 ml
9 0,2 ml 0,2 mM 6,0 ml
10 0,2 ml 0,1 mM 6,0 ml
Blanco - 6,2 ml

Una vez mezclados por agitación se leerá la absorbancia, a la longitud de onda a la


cual se haya obtenido el mayor valor de absorbancia en el apartado anterior, ajustando el
aparato con el blanco.

RESULTADOS

1.- Representar gráficamente los valores de absorbancia frente a la longitud de onda.

2.-Calcular el valor del coeficiente de extinción molar () para el p-nitrofenol en


M -1 cm-1 , a partir de la pendiente (m =  ) de la representación de absorbancia
frente a la concentración de p-nitrofenol en mM (A =  c l)