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INTEGRANTES:
INSTITUCIONES NORMATIVAS:
INSTITUTO NACIONAL DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL TRABAJO (INSHT).
Según: EL GOBIERNO DE CHILE: Servicio Agrícola y Ganadero; INSTRUCTIVO
TECNICO PARA EL ANALISIS DE ALCOHOLES EN EXPORTACION
LEY N° 18.755, orgánica de servicio agrícola y ganadero
OBJETIVO Y ALCANCE
Se establecen las técnicas y el método de análisis de acidez total para los alcoholes
etílicos
ACTIVIDADES
PRINCIPIO
La acidez total en alcoholes expresada como ácido acético, se realiza en la muestra sin
destilar y diluida a la mitad, si se trata de alcoholes de más de 80ºC GL e incoloros, o
sobre el destilado, en el caso de muestras de alcohol con menos de 80ºC GL que
presenten coloración. En ambos casos la acidez se titula con NaOH 0,001N con
indicador de fenolftaleína y evitando la contaminación con CO2.
Los alcoholes etílicos neutros tienen generalmente con pureza que va de 96 a 100%, y
presentan contenidos de acidez total expresados como ácido acético muy bajos, menor
a 20 mg/l de alcohol de 100ºC GL. Para alcoholes más complejos, como bases para
licores de Ron, Whisky, etc., los valores son mayores,
MATERIALES Y EQUIPO
REACTIVOS
Solución de NaOH de 0,01 N se puede preparar a partir de 0,1 N se diluye 10 en
100 ml con agua libre de CO2, ej. Agua grado HPLC o agua recién hervida. No
se puede guardar, se debe preparar diariamente.
Solución indicadora de Fenolftaleína al 1% en etanol.
PROCEDIMIENTO
OBSERVACIONES
BIBLIOGRAFÍA
INSTITUCIONES NORMATIVAS:
GOBIERNO DE CHILE: SERVICIO AGRÍCOLA Y GANADERO;
INSTRUCTIVO TECNICO PARA EL ANALISIS DE ALCOHOLES EN
EXPORTACION
Según: EL GOBIERNO DE CHILE: Servicio Agrícola y Ganadero; INSTRUCTIVO
TECNICO PARA EL ANALISIS DE ALCOHOLES EN EXPORTACION
LEY N° 3.557, Sobreprotección Agrícola
OBJETIVO Y ALCANCE:
PRINCIPIO
Los alcoholes etílicos contienen cantidades variables de ésteres, los cuales al ser
tratados con NaOH 0,1N sufren hidrolisis alcalina o saponificación con el
correspondiente consumo de NaOH 0,1N. la soda no consumida es calculada retro
titulándola después de adicionar H2SO4 0,1N.
MATERIAL Y EQUIPO
REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
Muestra: En alcoholes con una gradación menor a 80% v/v e incoloros, tomar 100ml de
muestra en un matraz de fondo plano de 250ml, una punta espátula de piedra pómez y
tres gotas de fenoltaleina al 1%, titular con NaOH 0,1N hasta color rosado. Luego
adicionar 5 ml de NaOH 0,1N y reflujar por 40 minutos, al final de los cuales enfriar la
solución y adicionar 5 ml de H2SO4 de 0,1N, luego titular con NaOH 0,1N. El gasto de
NaOH 0,1N corresponde a “n”. De tratarse de un alcohol coloreado reemplazar por el
destilado.
En alcoholes con un grado igual o mayor a 80% v/v, tomar 50ml de muestra, adicionar
BIBLIOGRAFÍA
ACTIVIDADES
PRINCIPIO
MATERIAL Y EQUIPO
REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
Se lleva a 50º GL con agua destilada, los volúmenes de agua se calculan utilizando la
tabla II, la cual considera la contracción de la mezcla. Posteriormente, se toman 10 ml
de la muestra ajustada a 50º GL en otro tubo de ensayo de 20 ml, se adiciona 1 ml de
ácido acético concentrado y 0,5 ml de anilina destilada incolora, se agita y se deja en
reposo en un baño de agua a 20º C. Trascurrido 10 minutos se lee en el
espectrofotómetro a una absorbancia de 520 nm. La lectura obtenida corresponde a “L”
unidades de concentración.
ml de solución madre
ml de alcohol 50° GL
10,0 0,0 mg/l
9,5 5,0 mg/l
9,0 10,0 mg/l
8,0 20,0 mg/l
Con estas concentraciones se construye la curva de calibración, absorbancia versus
concentración. La pendiente (absorbitividad) se ingresa en el espectrofotómetro y las
muestras preparadas en el punto 2.4.1 se leen directamente obteniéndose la lectura “L”
en unidades de concentración (mg/l).
F: Factor de Dilución.
Gºreal: Grado alcohólico real del alcohol etílico.
OBSERVACIONES:
ASAMBLEA GENERAL
TIPO III (MÉTODOS ALTERNATIVOS APROBADOS): Los métodos del tipo III son los
que satisfacen todos los criterios definidos por la Subcomisión de Métodos de Análisis
para los métodos que pueden emplearse para fines de control, inspección o
reglamentación (Glucosa y fructosa por vía enzimática).
TIPO IV (MÉTODOS PROVISIONALES): Los métodos del tipo IV son los que se han
empleado tradicionalmente o han comenzado a emplearse recientemente, pero para
cuya aceptación no se han determinado todavía por la Subcomisión de Métodos de
Análisis los criterios que deben satisfacer (Investigación de colorantes sintéticos,
medida del potencial de óxido-reducción).
BIBLIOGRAFÍA
Chapman, M (1980). "Validation of gas and vapour sampling methods under field
insult conditions" Am. Ind. Hyg. Assoc.
National Institute for Occupational Safety and Health (1999), Manual of Analytical
Methods. 3ª ed. Methods 1.401 y 1.402
5. MÉTODO OIV-MA-AS312-04 MÉTODO DE TIPO IV (MÉTODO
ENZIMÁTICO) GLICEROL Y 2,3-BUTANODIOL
PRINCIPIO
Después del tratamiento con una columna de resina de intercambio aniónico para fijar
los azúcares y una cantidad significativa de manitol y sorbitol, el glicerol se oxida y 2,3
butanodiol con ácido peryódico. La combinación obtenida por acción de floroglucina en
metanal, en sí mismo formado por la oxidación de glicerol, es ensayado
colorimétricamente a 480 nm. La combinación de piperidina y nitroprusiato sódico con
etanal formado por la oxidación del 2,3-butanodiol es ensayado colorimétricamente a
570 nm.
APARATO
Columna de vidrio de aproximadamente 300 mm de largo y 10-11 mm de ancho
diámetro interno con un regulador de flujo (válvula).
Espectrofotómetro que permite mediciones entre 300 y 700 nm y tanques de
1cm de trayectoria óptica.
REACTIVOS
Glicerol, C3H8O3
2,3-butanodiol, C4H10O2
Intercambiador de aniones de alta basicidad, por ejemplo Merck exchanger III
o Amberlite IRA 400.
Polivinilpirrolidona polimerizada (PVPP). (Ver el Codex enológico
internacional).
M de solución de ácido peryódico en ácido sulfúrico 0.05 M:
Pesar 10,696 g de metaperiodato de sodio (NaIO4); disolver en un matraz
volumétrico de 500 ml con 50 ml de ácido sulfúrico 0,5 M; llevar a calibre
con agua destilada.
Solución de ácido peryódico 0,05 M en ácido sulfúrico 0,025 M:
Diluya la solución anterior con 1 + 1 de agua destilada.
Solución de ácido sulfúrico 0.5M
Solución de hidróxido de sodio 1 M
Solución de hidróxido de sodio al 5% 100 (m / v). 96% de alcohol 100 vol.
Solución de flioroglucina a 2 p. 100 (m / v) para renovar todos los días.
Solución de acetato de sodio anhidro, Na CH3COO a 27 p. 100 (m / v).
Solución de nitroprusiato de sodio, Na2Fe (CN) 5NO.2H2O a 2 p. 100 (m / v)
para renovar todos los días
Solución de piperidina C5H11N a 25 p. 100 (v / v); para renovar todos los días.
Solución estándar de glicerol.
Prepare una solución que contenga 250 mg en 100 ml de la muestra de glicerol
disponible y determinar el título de glicerol de esta muestra por el método
enzimático o por periodimetría (ver abajo en 6).
Luego prepare la solución estándar de glicerol pesando en un matraz
volumétrico una masa "m" correspondiente a 250 mg de glicerol puro; llevar con
la línea de medida con agua.
Solución estándar de 2,3-butanodiol
Prepare una solución que contenga 250 mg en 100 ml de la muestra de 2,3
butanodiol disponible y determinar el título de 2,3 butanodiol de este muestra
por periodimetría (ver más abajo en 6).
Luego prepare la solución estándar de 2,3 butanodiol pesando en un vial 100
ml de masa volumétrica "m" correspondiente a 250 mg de 2,3-butanodiol puro;
llevar a la marca con agua.
Solución cupro-alcalina.
La solución cupro-alcalina se obtiene mezclando, en el momento del
uso,soluciones A y B con partes iguales.
PROCEDIMIENTO DE OPERACIÓN
1.1. Preparación de la columna del intercambiador de aniones
La resina de intercambio aniónico (que generalmente tiene la forma de C1-)
debe mantenerse en una botella mientras se cubre con agua destilada
descarbonatada.
Introducir 30 ml de resina de intercambio aniónico en la columna. Lugar en
el parte superior de la columna un hisopo de algodón de vidrio; evitamos el
inclusiones de área en el lecho de resina. Pase 150 ml de solución Hidróxido
de sodio al 5% 100 con un caudal de 3,5 a 5 ml por minuto y luego pasa con
el mismo flujo una cantidad de agua destilada descarbonizado a reacción
neutra o ligeramente alcalina en fenolftaleína. La resina está lista para usar.
El intercambiador de aniones solo puede usarse una vez. Después, debe ser
regenerado con ácido clorhídrico al 5% 100 por unas pocas horas; uno luego
lave con agua hasta que el agua de enjuague esté libre de cloruros (verifique
si contienen cloruros).
1.2. Preparación de muestra
Diluya el vino a 1/5 (10 ml / 50 ml).
En el caso de los vinos fuertemente coloreados, realice una decoloración
preliminar el promedio de PVPP: coloque 10 ml de vino en un matraz
volumétrico de 50 ml; diluir con agua (20 ml) y agregar 300 mg de PVPP;
agitar de vez en cuando durante 20 minutos, ajústese a la marca y filtre en
papel de filtro plisado.
Tome 10 ml de la dilución de vino (tratada o no con PVPP) y colóquelos en el
intercambiador de aniones Permita que el vino diluido gotee no exceda un
caudal de 2 ml por minuto. Cuando el nivel de vino diluido alcanza 5-10 mm por
encima del algodón de vidrio, pasando agua destilada descarbonizado en
cantidad suficiente para llevar el volumen del eluato a 100 ml, a razón de 2-3 ml
por minuto. Se debe verificar que el eluato es libre de azúcares. Para este
propósito, 5 ml de eluato se hierven brevemente con 5 ml de solución.
Cuproalcaline no debe haber coloración ni precipitarse.
1.3. Determinación de glicerol.
1.3.1. Determinación fotométrica
Introducir en un matraz cónico de 100 ml con tapón de esmeril:
10 ml de eluato y agregar sucesivamente
10 ml de agua destilada y
10 ml de solución 0,05 M de ácido peryódico.
Agite bien para mezclar bien y permita que ocurra la oxidación durante 5
minutos (medido exactamente). A continuación, agregue: solución de 10 ml de
hidróxido sódico 1 M y 5 ml de alcohol al 96%.
Agitar después de cada adición, luego agregar: 10 ml de solución de
floroglucina.
Mezcle rápidamente y transfiera la solución al tanque trayectoria óptica
espectrofotométrica de 1 cm. La coloración violeta obtenida evoluciona muy
rápido, su intensidad pasa por un máximo después de 50 a 60 segundos y luego
disminuye. Tenga en cuenta la absorbancia máxima. La medida es en
comparación con una capa de área equivalente a la longitud de onda de 480
nm.
1.4. Determinación de 2,3-butanodiol
4.4.1. Determinación fotométrica
Introducir en un matraz cónico de 100 ml con tapón de esmeril: 20 ml de eluato
y agregar sucesivamente:
5 ml de la solución de acetato de sodio y
5 ml de la solución 0,1 M de ácido peryódico.
Agite suavemente para mezclar y deje reposar 2 minutos exactamente para esa
oxidación ocurre.
Agregar:
5 ml de la solución de nitroprusiato de sodio y
5 ml de la solución de piperidina.
Transfiera la solución al tanque espectrofotométrico de 1 cm de espesor.
La coloración violeta obtenida evoluciona muy rápidamente: su intensidad es
máximo después de 30 a 40 segundos y luego disminuye. Tenga en cuenta la
absorbancia
Max. La medición se realiza con respecto a la capa de área equivalente en la
longitud de onda de 570 nm.
BIBLIOGRAFIA
PRESENTACIÓN
en muestras de cinco litros de aire. Los datos de validación para estos intervalos
se incluyen en el anexo A.
El límite inferior del intervalo útil depende de una serie de factores tales como:
nivel de ruido del detector, blancos de la muestra y reactivos, eficacia de desorción
y las interferencias en el análisis cromatográfico.
b. FUNDAMENTO
Se obtiene las áreas de los picos de los analitos de interés y del patrón interno,
determinando la cantidad presente en la muestra.
c. REACTIVOS Y PRODUCTOS
Gases
Nitrógeno purificado
Hidrógeno purificado
Aire sintético puro
Reactivos
a. 2-Propanol (Isopropanol)
b. 2-Metil-1-propanol (Isobutanol)
c. 1-Butanol (n-butanol)
d. 2-Butanol
e. n-Propilbenceno (patrón interno)
f. Sulfuro de carbono.
d. Disoluciones
Disolución desorbente: de 5% (V/V) de 2-butanol en sulfuro de carbono y
conteniendo el patrón interno en una concentración de 1µl/ml.
Disolución patrón para la calibración a un nivel de concentración. Se
prepara añadiendo mediante microjeringas de precisión, una cantidad
determinada de cada analito a un volumen de disolución desorbente
(4.3.1), a fin de obtener una disolución patrón de concentración similar a la
muestra a analizar. Dicha concentración se debe expresar en términos de
mg/ml de disolución desorbente.
Disoluciones patrón para la calibración multinivel. Se preparan cinco
disoluciones añadiendo mediante microjeringas de precisión diferentes
cantidades de cada analito a un volumen de disolución desorbente (4.3.1.)
a fin de obtener disoluciones patrón de concentraciones que cubran el
intervalo de aplicación del método. Dichas concentraciones se deben
expresar en términos de mg/ml de disolución desorbente.
BIBLIOGRAFIA
Real Decreto 2216/1985(1) de 23-10 (Presid BB.OO. 27-2-85, rect. 9-5-86) (1999)
"Reglamento sobre declaración de sustancias nuevas y clasificación, envasado y
etiquetado de sustancias peligrosas".