NIVELES CELULARES DE 8-OXOGUANINA EN ADN O LA AGRUPACIÓN DE NUCLEÓTIDOS JUEGA

PAPELES FUNDAMENTALES EN LA CARCINOGÉNESIS Y SUPERVIVENCIA DE LAS CÉLULAS

CANCEROSAS

RESUMEN: La 8-oxoguanina, una lesión base oxidada principal formada por especies de
oxígeno reactivas, causa mutaciones de transversión G a T o conduce a la muerte celular en
mamíferos si se acumula en el ADN. 8-Oxoguanine puede originarse como 8-oxo-dGTP,
formado en el grupo de nucleótidos, o por oxidación directa de la base de guanina de ADN.
MTH1, también conocido como NUDT1, con actividad hidrolizante de 8-oxo-dGTP, 8-
oxoguanine DNA glycosylase (OGG1) una 8-oxoG DNA glycosylase, y MutY homolog (MUTYH)
con adenine DNA glycosylase actividad, minimizar la acumulación de 8-oxoG en ADN; las
deficiencias en estas enzimas aumentan la susceptibilidad a tumorigénesis espontánea e
inducida. Sin embargo, diferentes tipos de tejidos tienen diferentes susceptibilidades
tumorigénesis. Estos pueden revertirse por deficiencias combinadas en los sistemas de
defensa, porque la muerte celular inducida por la acumulación de 8-oxoG en el ADN depende
de MUTYH, que puede ser suprimida por MTH1 y OGG1. En las células cancerígenas que
encuentran altos niveles de estrés oxidativo, se acumula un alto nivel de 8-oxo-dGTP en el
conjunto de nucleótidos, y las células expresan, por lo tanto, niveles aumentados de MTH1
para eliminar 8-oxo-dGTP. La supresión de MTH1 puede ser una estrategia eficiente para
matar células cancerosas; sin embargo, debido a que MTH1 y OGG1 protegen a los tejidos
normales de la muerte celular inducida por estrés oxidativo, es importante que la inhibición de
MTH1 no aumente el riesgo de una degeneración tisular saludable.

Palabras clave: estrés oxidativo; conjunto de nucleótidos; ADN nuclear; ADN mitocondrial;
MTH1; OGG1; MUTYH; 8-oxoguanina; mutagénesis; muerte celular programada

I. INTRODUCCIÓN: Para los organismos vivos, mantener la integridad de la información

genética, codificar en el ADN genómico y transmitirlo de manera precisa de una célula a otra,
así como de los padres a la descendencia, es la función biológica más fundamental. La
fosforilación oxidativa en las mitocondrias es el mecanismo por el cual los organismos
eucarióticos producen energía para mantener la vida. Sin embargo, los electrones pueden
escaparse de la cadena respiratoria, lo que resulta en aproximadamente 1 a 3 por ciento de las
moléculas de oxígeno consumidas que se reducen parcialmente, generando así especies
reactivas de oxígeno (ROS) como superóxido, peróxido de hidrógeno y radicales hidroxilo. Los
ROS, que también se generan como subproductos de otros procesos metabólicos, o como
consecuencia de la exposición a patógenos, radiaciones ionizantes, productos químicos u otros
factores ambientales, y como ejecutores moleculares de la defensa del huésped, son tan
altamente reactivos que pueden oxidarse fácilmente macromoléculas en células vivas,
incluidos lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. Por lo tanto, el ADN genómico y sus nucleótidos
precursores siempre están en peligro de oxidación por ROS. Varias bases oxidadas y
nucleótidos se forman en grupos de ADN o nucleótidos mediante ROS, y tales lesiones
oxidativas pueden causar mutaciones o muerte celular si no se limitan o se reparan de manera
eficiente. Las mutaciones pueden inducir cánceres, y la muerte celular puede estar relacionada
con diversas enfermedades degenerativas durante el envejecimiento. La 8-oxoguanina (8-
oxoG) es una de las principales bases oxidadas en el ADN o en el conjunto de nucleótidos y es
altamente mutagénica porque puede emparejarse tanto con la adenina como con la citosina
en el ADN (Figura 1). 8-oxoG se acumula en el ADN nuclear y mitocondrial durante el
envejecimiento, y se cree que es una causa importante de cáncer.

Figura 1. Formación de 8-oxoguanina y su propiedad de emparejamiento de bases alteradas.

(A) La oxidación de la base de guanina por especies reactivas de oxígeno (ROS) genera 8-
oxoguanina; (B) 8-Oxoguanine (GO) forma un par de bases con adenina, así como con citosina
en el ADN.

En esta revisión, primero se resumen los sistemas de defensa que minimizan la acumulación de
8-oxoG en los ADN celulares como los genomas nucleares y mitocondriales. La interrupción de
estos sistemas de defensa tiende a aumentar la susceptibilidad a la tumorigénesis espontánea
e inducida en ratones. Sin embargo, hallazgos recientes han revelado que la tumorigénesis
inducida de esta manera puede ser resistida bajo ciertas condiciones. Además, es probable
que se necesiten algunos sistemas de defensa para la supervivencia de las células cancerígenas
y que, por lo tanto, puedan ser objeto de desarrollo de nuevos fármacos contra el cáncer.
Describiré cómo 8-oxoG y los sistemas que lo defienden están involucrados en estos
fenómenos, en base al progreso reciente en este campo.

2. FORMACIÓN DE 8-OXOGUANINA EN ÁCIDOS NUCLEICOS Y SU ORIGEN Y DISTRIBUCIÓN EN

EL ADN.

Entre los residuos de guanina en diversas formas de ácidos nucleicos, como desoxiguanosina
(dG), poli G, poli (dG-dC): poli (dG-dC) y ADN de timo de ternera desnaturalizado o nativo, la
posición C-8 de dG es el más eficazmente oxidado por el ácido ascórbico, generando así 8-oxo-
2'-deoxyguanosine (8-oxo-dG) (Figura 1A). La oxidación de dG se mejora en presencia de H2O2
con un rendimiento de casi 15%. La incubación de dGTP con H2O2 y ácido ascórbico también
da como resultado la generación de 8-oxo-2'-desoxiguanosina trifosfato (8-oxo-dGTP). El
tratamiento de dGTP con Fe2 + -EDTA genera de ocho a nueve veces más residuos de 8-oxoG
en el nucleótido dGTP libre que en las bases de guanosina en el ADN bicatenario. Es probable
que dGTP sea altamente susceptible a la oxidación por ROS in vivo, produciendo niveles
sustanciales de 8-oxo-dGTP en el conjunto de nucleótidos. Se ha informado que el 8-oxo-dGTP
está presente en el intervalo de 0,2-2 μM en los conjuntos de nucleótidos mitocondriales de
varios tejidos de rata en condiciones normales. 8-oxoG prefiere la forma syn en el ADN y
puede emparejarse con la adenina y la citosina con la misma eficacia, mientras que la guanina
en el ADN toma principalmente un anti-forma y se combina exclusivamente con citosina
(Figura 1B), por lo tanto, en ADN, 8-oxo- El dGTP con frecuencia se inserta erróneamente junto
con la adenina moldeada y la citosina opuesta por diversas ADN polimerasas desde las
bacterias hasta los mamíferos. Debido a que las bases de guanina en el ADN se pueden oxidar
directamente a 8-oxoG por ROS, es intrigante saber en qué medida la inserción de 8-oxo-dGTP
en el ADN o la oxidación directa de las bases de guanina en el ADN contribuyen a los niveles
estables de 8-oxoG en el ADN humano Usando HPLC-MS / MS, determinamos los contenidos
de 8-oxo-dG en ADN nuclear humano preparado a partir de linfocitos periféricos recién
aislados o de los mismos tipos de células que se habían cultivado in vitro. Se detectaron
aproximadamente de dos a tres residuos de 8-oxo-dG por 106 dG de residuos, lo que
corresponde a aproximadamente 10.000 residuos de 8-oxo-dG por núcleo humano individual.
La detección por inmunofluorescencia de 8-oxo-dG en cromosomas humanos reveló que 8-
oxo-dG está distribuido de manera desigual en el genoma humano normal y que el patrón de
distribución se conserva entre diferentes individuos. Regiones con un la alta frecuencia de
recombinación y los polimorfismos de un solo nucleótido se localizan preferentemente dentro
de las regiones cromosómicas que tienen una alta densidad de 8-oxo-dG.

3. SISTEMAS DE DEFENSA PARA MINIMIZAR LA ACUMULACIÓN DE 8-OXOG EN ADN DE

MAMÍFEROS

En células humanas y de roedores, MTH1 (también conocido como NUDT1), un homólogo de la

proteína MutT de Escherichia coli, hidroliza eficazmente los trifosfatos de nucleósidos de
purina oxidados, tales como 8-oxo-dGTP, a los correspondientes monofosfatos y pirofosfatos
(Figura 2). 8-oxo-dGMP se convierte adicionalmente en el nucleósido, 8-oxo-dG, evitando así
su incorporación en el ADN. El gen humano MTH1 está ubicado en el cromosoma 7p22 y
consta de cinco exones principales: dos secuencias alternativas del exón 1, a saber, el exón 1a
y 1b, y tres segmentos contiguos del exón 2 (exón 2a, 2b y 2c), que se empalman
alternativamente. Por lo tanto, el gen MTH1 produce siete especies de ARNm que codifican
tres isoformas de MTH1 humanas diferentes, hMTH1b (p22), hMTH1c (p21) y hMTH1d (p18).
La mayor parte de la forma principal de hMTH1 (p18) se localiza en el citoplasma con
aproximadamente 5% en la matriz mitocondrial, lo que sugiere que hMTH1 desempeña un
papel importante en el mantenimiento de la calidad de los conjuntos de nucleótidos de los
genomas nuclear y mitocondrial.

Figura 2. Mutagénesis causada por 8-oxoguanine y sistemas de defensa de mamíferos. En la vía

de mutagénesis, la 8-oxoguanina (GO) se acumula en el ADN, mediante la incorporación de 8-
oxo-dGTP del conjunto de nucleótidos o debido a la oxidación directa del ADN. Esto aumenta
la ocurrencia de A: T a C: G o G: C a T: mutaciones de transversión después de dos rondas de
replicación. Línea roja: vía mutagénica. En los sistemas de defensa, MTH1 hidroliza 8-oxo-dGTP
a 8-oxo-dGMP y pirofosfato. 8-oxo-dGMP se convierte adicionalmente en nucleósido, 8-
oxodeozyguanosine (8-oxo-dG), evitando así su incorporación en el ADN. 8-oxoG DNA
glycosylase (OGG1) elimina 8-oxoG para iniciar la reparación de escisión de base (BER). OGG1
preferencialmente 8-oxoG frente a citosina. El homólogo MutY (MUTYH) escinde la adenina
insertada frente a 8-oxoG en la cadena molde. Una vez que se inserta citosina opuesta a 8-
oxoG durante la BER iniciada por MUTYH, OGG1 puede eliminar el residuo 8-oxoG frente a la
citosina. Sin embargo, la adenina puede reinsertarse frente a 8-oxoG durante BER (línea roja
discontinua). En mamíferos, la maquinaria de reparación de desapareamientos reconoce 8-
oxoG opuesta a la adenina en el ADN molde y escinde la cadena naciente que contiene 8-oxoG
(línea verde). OGG1 puede mejorar la transversión de A a C si elimina 8-oxoG frente a la
citosina que se había insertado frente a 8-oxoG emparejado con la adenina en el ADN molde
(línea discontinua azul). Líneas azules: caminos BER. Modificado de Ref. 6?

Una vez que 8-oxoG se ha formado en el ADN, 8-oxoG DNA glycosylase, codificado por el gen
OGG1, e identificado como un homólogo de Saccharomyces cerevisiae OGG1, elimina esta
base oxidada para iniciar la reparación por escisión de base (BER). La actividad de ADN
glicosilasa de OGG1 escinde preferentemente 8-oxoG frente a citosina (Figura 2). Además,
OGG1 también posee una actividad débil de liasa AP. El gen humano OGG1 se encuentra en el
cromosoma 3p25, un locus frecuentemente perdido en el cáncer de pulmón. Hay más de siete
formas empalmadas alternativamente de ARNm de OGG1, y estos se han clasificado en dos
tipos en función de sus últimos exones (tipo 1 con exón 7: 1a y 1b, tipo 2 con exón 8: 2a a 2e).
Los tipos 1a y 2a son los principales transcritos de OGG1 en diversos tejidos humanos y
codifican OGG1-1a y OGG1-2a. La proteína OGG1-1a tiene una señal de localización nuclear en
su extremo C-terminal y, por lo tanto, está localizada en el núcleo. Mientras tanto, la proteína
OGG1-2a, que tiene una región C-terminal única que consta de dos regiones distintas, una
región ácida (residuos de aminoácidos Ile345 a Asp381) y una región hidrofóbica (los últimos
20 residuos), se encuentra exclusivamente en la mitocondria, aunque ambos comparten la
señal de direccionamiento mitocondrial N-terminal. Una DNA glicosilasa codificada por
MUTYH, un homólogo de E. coli mutY, escinde la adenina insertada frente a 8-oxoG en la
cadena molde (Figura 2). Una vez que se inserta citosina opuesta a 8-oxoG en el ADN molde
durante la BER iniciada por el homólogo MutY (MUTYH), OGG1 puede eliminar el residuo 8-
oxoG frente a la citosina en el ADN. MUTYH por lo tanto contribuye a minimizar la acumulación
de 8-oxoG en el ADN. MUTYH también tiene la capacidad de escindir 2-hidroxiadenina (2-OH-
A) incorporada junto a la guanina en la plantilla. MUTYH tiene un motivo funcional de unión al
antígeno nuclear de células proliferativas (PCNA), y hemos demostrado que la reparación con
MUTYH de adenina incorporada frente a 8-oxoG en ADN de plásmido transfectado en células
cultivadas depende de este motivo de unión a PCNA. Sin embargo, encontramos que el motivo
de unión a PCNA en MUTYH no es esencial para suprimir el aumento de la tasa de mutación
espontánea observada en las células madre embrionarias Mutyh-knockout (KO). MUTYH
también interactúa con otras proteínas asociadas a la replicación, como RPA y MSH2, que
también pueden interactuar con PCNA, lo que sugiere que las interacciones de MUTYH con
estas proteínas respaldan su función. El gen humano MUTYH se encuentra en el brazo corto
del cromosoma 1 entre p32.1 y p34.3, y consta de 16 exones. Hay tres transcripciones MUTYH
principales en células humanas, a saber, tipos α, β y γ. Cada transcripción tiene una secuencia
5 'o un primer exón diferente, y cada uno está alternativamente empalmado, por lo tanto, hay
múltiples formas de proteínas MUTYH humanas presentes en los núcleos y las mitocondrias.

4. SUSCEPTIBILIDAD ALTERADA A MUTAGÉNESIS Y CARCINOGÉNESIS ESPONTÁNEAS EN

RATONES DEFICIENTES EN SISTEMAS DE DEFENSA 8-OXOG

En ratones Mth1-KO, la incidencia de carcinogénesis espontánea en el hígado y el estómago, y

en menor medida en el pulmón, fue varias veces mayor en comparación con la de los ratones
de tipo salvaje a la edad de 18 meses. También se confirmó un aumento de 2-3 veces en la
tasa de mutación pontánea en células madre embrionarias Mth1-KO. Sin embargo, el aumento
de la acumulación de 8-oxo-dG no fue aparente en los ratones Mth1-KO, probablemente
debido a la eficiencia de BER por OGG1. Dos grupos informaron que los ratones Ogg1-KO no
son propensos al cáncer dentro de las 50 semanas posteriores al nacimiento, aunque se
observó una mayor acumulación de 8-oxo-dG en su ADN genómico. Sin embargo, la
observación durante un período de tiempo más largo reveló el desarrollo espontáneo de
adenoma / carcinoma pulmonar en ratones Ogg1-KO de 18 meses de edad. Esto se asoció con
una acumulación varias veces mayor de 8-oxo-dG genómico, que es consistente con la
ubicación del cromosoma 3p25 del gen humano OGG1, un locus frecuentemente perdido en el
cáncer de pulmón. Curiosamente, la acumulación de 8-oxo-dG también se confirmó en ratones
Ogg1 / Mth1-double KO (DKO), aunque no se encontraron tumores en los pulmones de estos
ratones. Esta observación sugiere que la deficiencia de MTH1 produce una supresión de la
tumorogénesis causada por la deficiencia de OGG1, que analizaré más adelante.

Un examen histológico sistemático de grandes cohortes de ratones reveló que se habían

desarrollado más tumores espontáneos en ratones Mutyh-KO (72 de 121, 59.5%) que en los
ratones de tipo salvaje (38 de 109, 34.9%) a la edad de 18 meses . El aumento de la incidencia
de tumores intestinales en ratones Mutyh-KO (11 tumores en 121 ratones) fue
estadísticamente significativo en comparación con el tipo salvaje (sin tumores intestinales en
109 ratones). Se observaron dos adenomas y siete adenocarcinomas en el intestino delgado, y
dos adenomas, pero no se encontraron carcinomas en el colon. Estos resultados
proporcionaron evidencia experimental de la asociación entre mutaciones MUTYH de línea
germinal bialélica y una forma recesiva de adenoma y carcinoma colorrectal hereditario
humano. La deficiencia doble de Mutyh y Ogg1 predisponen al 65,7% de los ratones a tumores,
predominantemente tumores de pulmón y de ovario y linfomas dentro de los 20 meses
posteriores al nacimiento. La edad de supervivencia del 50% en los ratones Mutyh / Ogg1-DKO
se redujo significativamente a 10.3 meses. Sorprendentemente, los análisis posteriores
identificaron mutaciones G a T en el 75% de los tumores pulmonares en una zona activa de
activación, el codón 12, del oncogén K-ras, pero no se observaron mutaciones de este tipo en
los tejidos normales adyacentes. Es digno de mención que el 8,6% de los ratones Mutyh /
Ogg1-DKO también exhibieron adenomas / carcinomas en sus tractos gastrointestinales, que
nunca se observaron en ratones de tipo salvaje. Recientemente, establecimos el mouse Mth1 /
Ogg1 / Mutyh-triple KO (TKO) en el fondo C57BL / 6J. Los ratones TKO son viables y fértiles,
aunque se acumularon más de 10 a 20 residuos de 8-oxo-dG por 106 dG en diversos tejidos,
incluidas las gónadas. Los ratones TKO mostraron una esperanza de vida más corta (50% de
supervivencia, 57 semanas) y más del 35% de los ratones TKO desarrollaron varios tipos de
tumores distinguibles por observación macroscópica, como glándula de Harder, piel, mama y
tumores de ovario, o linfoma . Criamos la línea de ratón TKO de un par (G1) y la mantuvimos
hasta la octava generación (G8) por apareamiento intrageneracional. A medida que las
generaciones aumentaron, se hizo difícil obtener ratones para la reproducción debido a la
disminución del número de ratones destetados. Se encontraron varias variaciones fenotípicas
entre la progenie, como hidrocefalia, mancha blanca del vientre y anoftalmia. En los casos de
hidrocefalia y mancha blanca, los rasgos se transmitieron a la siguiente generación de forma
autosómica dominante con penetrancia incompleta, lo que indica que las mutaciones
heredables deberían surgir en los ratones TKO. Mediante análisis exómicos que cubren 40.9
Mb de regiones transcritas de ratón TKO, se identificaron 247 mutaciones puntuales y 244
(99%) de ellas fueron mutaciones G a T. La tasa de mutación se calculó en 2 × 10-7 mutaciones
/ base / generación. Esta tasa de mutación es 18 veces mayor que el nivel basal de 1,1 × 10-8
mutaciones / base / generación, calculado a partir de la prueba del locus específico en el ratón.
En el análisis trío humano, se calculó que la tasa de mutación de la línea germinal era de 1,2 ×
10-8 mutación / base / generación, y se observaron mutaciones de transversión G a T en
aproximadamente 9% de todas las mutaciones, lo que indica un aumento aproximado de 200
veces en G a Mutaciones T en los ratones TKO.

Estos resultados demuestran que los sistemas de defensa para minimizar la acumulación de 8-
oxoG en el ADN de mamíferos, que consta de MTH1, OGG1 y MUTYH, son muy eficaces para
minimizar la mutagénesis espontánea en las células tanto somáticas como germinales.
Además, la acumulación de 8-oxoG en el ADN genómico, independientemente de sus orígenes
(inserción de 8-oxo-dGTP del grupo nucleotídico o de oxidación directa de guanina en el ADN),
causa principalmente mutaciones de transversión G a T, pero no A a C. Se cree que estas
últimas son causadas por la inserción de 8-oxo-dGTP opuesta a la adenina en el ADN molde
porque los mutantes deficientes en E. coli mutT presentan un número muy elevado de
mutaciones A a C [39]. Es probable que en los mamíferos, la maquinaria de reparación de
desajustes reconozca 8-oxoG opuesta a la adenina en el ADN molde, y por lo tanto extirpe 8-
oxoG de la cadena naciente (Figura 2).

5. SUSCEPTIBILIDAD ALTERADA A LA TUMORIGÉNESIS INDUCIDA EN RATONES DEFICIENTES EN

LOS SISTEMAS DE DEFENSA

La administración oral crónica de reactivo oxidante, bromato de potasio (KBrO3), a ratones

Ogg1-KO induce una acumulación significativamente mayor de 8-oxo-dG en el ADN del riñón y
del hígado, así como mutaciones G a T. Aunque los ratones exhibieron una disminución más
severa de la ganancia de peso corporal en comparación con los ratones de tipo salvaje y un
mal funcionamiento del riñón, no se encontraron tumores en el riñón u otros órganos como
pulmón, hígado, bazo, timo, estómago e intestino. Por el contrario, la administración oral de
KBrO3 a ratones Mutyh-KO indujo efectivamente mutaciones G a T y tumores epiteliales en el
intestino delgado, lo que demuestra la importancia de MUTYH en la supresión de la
mutagénesis y la tumorigénesis inducida por el estrés oxidativo. Análisis de mutaciones de
genes asociados a tumores de los tumores intestinales de ratones MUTYH-KO que habían sido
tratados con KBrO3 reveló muchos G a T mutaciones en cualquiera Apc, que se requiere para
la degradación mediada por ubiquitina de β-catenina, o CTNNB1, que codifica la β -catenina
proteica, un activador transcripcional que funciona en la vía de transducción de señal Wnt / β-
catenina. No se detectó ninguna mutación en K-ras (exón 2) o Trp53 (exones 5-8). Estos
resultados sugieren que la interrupción de la vía de transducción de señal Wnt / β-catenina,
que conduce a la estabilización y acumulación de β-catenina en los núcleos que da como
resultado una mayor expresión de c-Myc y ciclina D1, es causal de tumorigénesis inducida por
estrés oxidativo en el intestino delgado de Mutyh-KO ratones. De hecho, la administración oral
repetida de factor-1 inductor de la diferenciación (DIF-1), que se sintetiza por Dictyostelium
discoideum y suprime la vía de señalización Wnt / β-catenina, redujo notablemente el número
y el tamaño de los tumores intestinales que se desarrollaron en Mutyh-KO ratones después de
la administración de KBrO3. La diferencia en la susceptibilidad a la tumorigénesis inducida por
KBrO3 entre Mutyh-KO y Ogg1-KO los ratones sugieren fuertemente que MUTYH tiene una
función (es) especial (es) para suprimir la tumorogénesis en el tracto gastrointestinal. Esto
puede explicar la asociación entre MUTYH-deficiencia y la forma recesiva de hereditaria
múltiple colorrectal denoma / carcinoma en los seres humanos, conocido como asociado-
MUTYH poliposis adenomatosa familiar (MAP), que tiene el rasgo característico de G a
mutaciones de transversión T en la secuencia de GAA contexto.

Es bien sabido que la radiación UVB aumenta la formación de 8-oxo-dG en el ADN genómico de
las células epidérmicas. Para verificar el efecto de la irradiación UVB crónica sobre la
tumorigénesis mediada por 8-oxoG en células epidérmicas, irradiamos ratones heterocigotos
de tipo salvaje y Ogg1-KO con UVB a una dosis de 2,5 kJ / m2 tres veces a la semana durante
40 semanas [46 ] Encontramos que el número medio de tumores en ratones Ogg1-KO
aumentó significativamente en comparación con el de los ratones heterocigotos o de tipo
salvaje. La tasa de desarrollo de tumores malignos en ratones Ogg1-KO también fue
significativamente mayor que en ratones de tipo salvaje. Por otra parte, la edad de aparición
en ratones Ogg1-KO para el desarrollo de tumores de piel fue anterior a la de los otros
genotipos. Recientemente, se identificaron mutaciones de p53 en tumores inducidos por UVB
tanto en ratones de tipo salvaje como en ratones Ogg1-KO. Sin embargo, la mayoría de las
mutaciones de p53 encontradas fueron transiciones G: C a A: T en sitios de dipirimidina; el
número de mutaciones G a T causadas por 8-oxoG no aumentó en ratones Ogg1-KO expuestos
a UVB. Estos resultados indican que UVB induce tumores altamente malignos causados por
mutaciones de p53 dipirimidina a través de la formación de dímeros de ciclopirimidina. Se
puede especular que el 8-oxoG formado en el ADN genómico de las células epidérmicas
deficientes en OGG1 por los rayos UVB aumenta la inflamación crónica, lo que exacerba el
potencial carcinogénico de los dímeros de pirimidina. Las diferencias en la susceptibilidad de
los ratones Ogg1-KO a la carcinogénesis inducida por UVB y KBrO3, sugiere que la acumulación
genómica de 8-oxoG debe procesarse de manera diferente entre las células epidérmicas y las
células epiteliales del riñón, hígado o gastrointestinales. Por ejemplo, 8-oxoG en células
epiteliales gastrointestinales o riñón puede inducir predominantemente la muerte celular,
causando la disminución severa de la ganancia de peso corporal y el mal funcionamiento del
riñón en ratones Ogg1-KO tratados con KBrO3, como se analiza en la siguiente sección.

6. DO THE DEFENSE SYSTEMS THAT MINIMIZE 8-OXOG ACCUMULATION IN DNA CONTRIBUTE

TO THE SURVIVAL OF CANCER CELLS?

Los ratones Mth1-KO y Ogg1-KO exhiben una mayor incidencia de tumores espontáneos en
hígado y pulmón, respectivamente, acompañados por la acumulación de 8-oxoG en su ADN
nuclear. Esto demuestra que MTH1 y OGG1 evitan la acumulación de 8-oxoG en el ADN
nuclear, lo que suprime la mutagénesis y la carcinogénesis. Sin embargo, los ratones Mth1 /
Ogg1-DKO no desarrollan tumores de pulmón, aunque 8-oxoG se acumula a niveles elevados
en su ADN nuclear. Esta observación sugiere que la acumulación excesiva de 8-oxoG en
combinación con MTH1 y deficiencia de OGG1 puede inducir la muerte de células tumorales, lo
que conduce a una disminución de la aparición de tumores pulmonares. Además, la
sobreexpresión de MTH1 en células cultivadas o ratones transgénicos MTH1 crea una
resistencia significativa a la muerte celular inducida por diversos factores de estrés oxidativo.
Esto ocurre con la disminución de la acumulación de 8-oxoG tanto en el ADN nuclear como en
el mitocondrial, mientras que una mayor acumulación de 8-oxoG en el ADN nuclear y / o el
ADN mitocondrial causa la muerte celular. Bajo estrés oxidativo, la acumulación de 8-oxoG en
ADN molde puede aumentar mucho, y MUTYH induce ciclos inútiles de BER porque una
adenina puede reinsertarse frente a un 8-oxoG durante BER reparando ADN polimerasas tales
como pol β y pol κ. El ciclo de BER fútil provoca la acumulación persistente de roturas de
cadena simple (SSB) en la cadena naciente porque hay muchas endonucleasas apurínicas /
apirimidínicas (AP) o AP liasas que escinen eficientemente sitios AP repetidamente generados
por MUTYH (figura 3A). La acumulación persistente de SSB en el ADN nuclear activa
continuamente la poli (ADP-ribosa) polimerasa y provoca la acumulación prolongada de
polímero de poli (ADP-ribosa) o el agotamiento del dinucleótido de adenina de nicotinamida y
el ATP. Bajo estas condiciones, se promueve el procesamiento del factor inductor de apoptosis
mitocondrial y su translocación nuclear, iniciando así la muerte celular (Figura 3B arriba). Las
mitocondrias carecen de factores de acoplamiento de replicación tales como PCNA; por lo
tanto, en el ADN mitocondrial, MUTYH puede extirpar adenina opuesta a 8-oxoG
independientemente de su origen. De hecho, la acumulación de 8-oxoG en el ADN
mitocondrial da como resultado la formación excesiva de SSB en ambas hebras de ADN a
través de la BER iniciada por MUTYH. Esto causa la depleción del ADN mitocondrial, lo que
resulta en disfunciones mitocondriales, tales como el agotamiento del ATP y la apertura del
poro de transición de la permeabilidad de la membrana. Estos conducen al flujo de salida de
Ca2 + de las mitocondrias que causa la activación de las proteasas dependientes de Ca2 +
(calpaínas) en el citoplasma. Las calpaínas activadas inducen rotura lisosomal y muerte celular
(Figura 3B, parte inferior).

Figura 3. Muerte celular programada dependiente de MUTYH desencadenada por la

acumulación de 8-oxoG en el ADN nuclear y mitocondrial. (A) 8-oxo-dGTP generado en el
conjunto de nucleótidos es una fuente principal de 8-oxoG acumulada en el ADN, que causa la
acumulación de SSB en la cadena de ADN naciente a través de BER inútil iniciado por MUTYH.
ROS, especies reactivas de oxígeno; Flechas rojas, ciclo inútil BER; (B) Dos vías de muerte
celular distintas inducidas por BER dependiente de MUTYH. Panel superior: cuando 8-oxoG se
acumula a niveles altos en el ADN nuclear, la poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) se une a las
SSB generadas por la BER iniciada por MUTYH. Los SSB activan PARP, aumentando así el
polímero de poli (ADP-ribosa) (PAR). La activación persistente de PARP da como resultado el
agotamiento tanto del dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD +) como del ATP, seguido
de la translocación nuclear del factor inductor de apoptosis (AIF). AIF luego ejecuta la muerte
celular apoptótica; Panel inferior: la acumulación de altos niveles de 8-oxoG en el ADN
mitocondrial causa el agotamiento del ADN mitocondrial a través de la BER iniciada por
MUTYH, causando la disfunción mitocondrial y dando como resultado la activación de
calpaínas, que a su vez causan la rotura lisosomal que conduce a la muerte celular.

Basándose en la dependencia MUTYH de la muerte celular inducida por 8-oxoG, proponemos

que MUTYH suprime principalmente la tumorigénesis al inducir la muerte de células pre-
mutagénicas o precancerosas que, bajo estrés oxidativo, acumulan altos niveles de 8-oxoG en
nuclear o ADN mitocondrial, eliminándolos así de las poblaciones de células madre o
progenitoras. En ausencia de MUTYH, tales células pre-mutagénicas o precancerígenas pueden
sobrevivir y tener una mayor tasa de mutación en proto-oncogenes o genes supresores de
tumores debido al aumento de los niveles de 8-oxoG. Por lo tanto, bajo el estrés oxidativo, los
ratones Mutyh-KO y los pacientes MAP son muy susceptibles a la tumorogénesis.
Recientemente, dos grupos informaron inhibidores de MTH1 como nuevos medicamentos
contra el cáncer. Mostraron que se requiere MTH1 para la supervivencia de células cancerosas
pero no células normales, probablemente porque el aumento del estrés oxidativo en las
células cancerosas provoca la oxidación de precursores de nucleótidos en el conjunto de
nucleótidos y se requiere MTH1 para evitar su incorporación al ADN durante la replicación. La
acumulación de oxoG en el ADN celular causa la muerte celular. Para sustentar este nuevo
concepto, se ha establecido que los tejidos cancerosos exhiben altos niveles de acumulación
de 8-oxo-dG en el ADN, y tales células también exhiben niveles altamente aumentados de
expresión de MTH1. Los niveles incrementados de ARNm de MTH1 en diversos tejidos
cancerosos se han confirmado mediante el perfil de expresión génica comparativa en cáncer y
tejidos normales. Por otra parte, Rai et al. demostraron que la sobreexpresión de MTH1 puede
prevenir la respuesta al daño del ADN inducida por el sarcoma de rata oncogénico de Harvey
(HRAS) y la senescencia prematura acompañante. Por el contrario, encontraron que la pérdida
de MTH1 induce preferentemente un defecto de proliferación in vitro en células tumorígenas
que sobreexpresan RAS oncogénico. Estos resultados indican que el grupo de nucleótidos de
guanina es un objetivo crítico para las ROS intracelulares producidas por RAS oncogénico y que
las células transformadas con RAS requieren una expresión robusta de MTH1 para proliferar.

7. PERSPECTIVAS FUTURAS:

Recientemente, informamos que la reparación por escisión de adenina insertada frente a 8-

oxoG por MUTYH desencadena la neurodegeneración bajo estrés oxidativo. Los ratones
mutantes que carecen de MTH1 y / o OGG1 exhiben una neurodegeneración grave, mientras
que los ratones mutantes que carecen de MUTYH u OGG1 / MUTYH son resistentes a la
neurodegeneración bajo estrés oxidativo. Estos resultados indican que OGG1 y MTH1 pueden
proteger el cerebro, mientras que MUTYH promueve la neurodegeneración. Debido a la
acumulación altamente incrementada de 8-oxoG en células cancerosas con expresión
aumentada de MTH1, la supresión de MTH1 puede ser una estrategia eficaz para matar células
cancerosas, en la que puede estar implicada la muerte celular dependiente de MUTYH u otros
tipos de muerte celular. Sin embargo, es importante no causar la degeneración de los tejidos
normales mediante la inhibición de MTH1; por lo tanto, una evaluación experimental adicional
es esencial.

8. CONCLUSIONES:

8-oxoG puede originarse como 8-oxo-dGTP en el conjunto de nucleótidos, o por oxidación

directa de la base de guanina en el ADN. MTH1 con actividad hidrolizante de 8-oxo-dGTP,
OGG1 con actividad de 8-oxoG ADN glicosilasa y MUTYH con actividad de adenina ADN
glicosilasa, minimizan la acumulación de 8-oxoG en ADN celulares. Los estudios en ratones
Mth1 / Ogg1 / Mutyh-TKO demostraron que los sistemas de defensa para minimizar la
acumulación de 8-oxoG en los ADN celulares son muy eficaces para minimizar la tumorigénesis
espontánea así como mutagénesis. Mth1 / Ogg1-DKO ratones, sin embargo, exhibieron una
menor susceptibilidad a espontánea