INDICE

1. RESUMEN: ...........................................................................................................................................2
2. INTRODUCCIÓN:...............................................................................................................................3
3. OBJETIVOS: ........................................................................................................................................4
4. PRINCIPIOS TEÓRICOS: .................................................................................................................4
5. DETALLES EXPERIMENTALES: ...............................................................................................6
5.1. PROCEDIMIENTO: ...................................................................................................................6
17. TABULACIÓN DE DATOS Y RESULTADOS EXPERIMENTALES: ......................................10
18. CÁLCULOS: ......................................................................................................................................11
18.1. Determinación de la concentración de Nitratos: .................................................................11
19. GRÁFICAS: ........................................................................................................................................12
20. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADO: ..............................................................................15
21. CONCLUSIONES: .............................................................................................................................15
22. RECOMENDACIONES: ...................................................................................................................15
23. BIBLIOGRAFÍA: ...............................................................................................................................16
24. ANEXOS: ............................................................................................................................................17

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 1. RESUMEN:

En esta práctica de laboratorio se analizan dos muestras de aguapara determinar la concentración

de nitratos en agua VIDA y CIELO mediante espectrofotometría ultravioleta.

Debemos recordar que la base de la espectroscopia Visible y Ultravioleta consiste en medir la

intensidad del color (o de la radiación absorbida en UV) a una longitud de onda específica
comparándola con otras soluciones de concentración conocida (soluciones estándar) que contengan
la misma especie absorbente. Para tener esta relación se emplea la Ley de Beer, que establece que,
para una misma especie absorbente en una celda de espesor constante, la absorbancia es
directamente proporcional a la concentración.

Para la realización del análisis usamos el espectrofotómetro UV- visible Shimatzu 1700, así como
también, celdas de cuarzo, balanza analítica, un desecador de vidrio con agente deshidratante,
algunas pipetas volumétricas, y fiolas en las que se llevaron el preparado de los patrones.

Los patrones se prepararon a partir de la solución madre compuesta por KNO3 disuelto en agua y
tratado con cloroformo cada una de estas diluciones se llevaron a 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 ppm.

En cuanto al blanco, este fue preparado acidulando con HCl 1N, cierta cantidad de agua redestilada.
Todos estos fueron analizados en el espectrofotómetro UV- visible y se determinaron las
absorbancias de cada patrón. De esta manera, al realizar las mediciones, las absorbancias obtenidas
fueron graficadas en GRAFICO 1.

El gráfico obtenido no fue lineal, por lo que tuvo que ser corregido eliminando ciertos patrones.
Por último, se utilizó la ecuación de la GRAFICA CORREGIDA para determinar la concentración
de nitratos en forma de N en las muestras de agua indicadas.

Esta concentración de N se convirtió en ppm de NO3- y luego se calculó que las concentraciones
de este, para cada muestra resultaron ser: 17.715 ppm de NO3- en agua CIELO y 32.48 ppm de
agua VIDA.

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 2. INTRODUCCIÓN:

El contenido de nitratos es un indicador importante de la calidad del agua y ha demostrado tener

un alto peso estadístico a la hora de clasificarla (Calvo-Brenes y Mora-Molina, 2010). El ion nitrato
tiene un origen natural, pero por el uso de fertilizantes inorgánicos, principalmente, o por residuos
humanos o animales se puede introducir en exceso, llegar por filtración o escorrentía hasta las
aguas superficiales y subterráneas y ser acumulado en concentraciones muy altas para la salud
humana (Galloway et al., 2003). Ya sea por los procesos agroindustriales, residuos domésticos o
residuos industriales, los nitratos en altas concentraciones multiplican el crecimiento de
organismos vegetales, elevan el nivel de fotosíntesis y agotan el oxígeno de las aguas superficiales
frescas, dañando la vida y los ecosistemas. La Organización Mundial de la Salud (OMS) norma el
máximo permitido en 50 mg/L para proteger a los lactantes alimentados con biberón contra la
metahemoglobinemiay recomienda concentraciones menores a 10mg/L (OMS, 2013). A nivel
nacional, el máximo permitido de nitratos es también de 50 mg/L, según lo indica el Reglamento
para la Calidad de Aguas Potables (ANEXO).

Por otra parte, el ion nitrato presenta un máximo de absorción de entre 200nm y 230nm, lo que
permite cuantificarlo por espectrofotometría directa en el ámbito de la radiación ultravioleta. Este
método es sensible a interferencias por cloruros y bromuros que se encuentran en altas
concentraciones en las aguas de estuarios y en materia orgánica disuelta en aguas dulces.

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 3. OBJETIVOS:

- Determinar el λ máximo al que se realiza el análisis.

- Determinar la concentración de nitratos presentes en aguas de mesa (marcas Cielo y
Vida).

4. PRINCIPIOS TEÓRICOS:

4.1. ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION MOLECULAR ULTRA VIOLETA:

El espectro Ultravioleta y Visible de las moléculas está asociado a transiciones electrónicas entre
los diferentes niveles energéticos en ciertos grupos o átomos de la molécula y no caracterizan a la
molécula como entidad. En contraste las absorciones de energía en la región Infrarroja estimulan
la molécula completa y causa cambios vibracionales y rotacionales en esta lo cual caracteriza la
entidad estructural de dicha molécula. Los grupos de átomos que dan origen a la absorción en el
UV cercano o UV de cuarzo, se conocen como grupos cromóforos. La mayoría de los grupos
insaturados y heteroatómicos que tienen pares de electrones no compartidos, son cromóforos
potenciales y estos grupos son la base de la elucidación de grupos estructurales en las moléculas
activas en el UV cercano.

Algunos términos utilizados muy frecuentemente en espectroscopia UV y Visible son: cromóforos,

auxocromos, efecto bato crómico y efecto hipsocrómico. La mayoría de las aplicaciones de la
espectroscopia de absorción a compuestos orgánicos se basa en transiciones de electrones n o π al
estado excitado π∗, ya que las energías que se requieren para estos procesos conducen a picos en
una región espectral conveniente experimentalmente ( 200-700 nm ), ambas transiciones requieren
la presencia de un grupo funcional que suministre los orbitales π .Hablando estrictamente, es a
estos centros absorbentes insaturados a los que se les aplica el término CROMÓFORO.

4
Debemos tener en cuenta que la obtención de un espectro UV supone en primer lugar disolver la
sustancia en una disolvente adecuado, que también absorbería en el UV, por lo que en la práctica
la espectroscopia UV se ve limitada a longitudes de ondas superiores a 200-220 nm.
Debido a ello, como podemos imaginar, no son muchos los grupos funcionales que podemos
determinar con la espectroscopia UV, siendo de destacar que todos ellos deben poseer al menos un
enlace doble.

Mientras mayor sea la energía requerida para una determinada transición, menor es la longitud de onda
de la radiación que debe suministrarse para conseguir tal fin; por ejemplo: la transición σ→σ∗ para el
propano requiere de radiación de 135 nm, la cual se encuentra en la región del Ultravioleta lejano por lo
que es necesario un equipo de alto vacío si se desea estudiar dicha región del espectro. La transición n
→π∗ es la que requiere de menor energía y mayor longitud de onda. Las cetonas y aldehídos saturados
efectúan esta transición a una longitud de onda de aproximadamente 285 nm.

La mayoría de las aplicaciones de la espectroscopía de absorción a compuestos orgánicos se basa en

transiciones de electrones n o π al estado excitado π∗, ya que las energías que se requieren para estos
procesos conducen a picos en una región espectral conveniente experimentalmente ( 200-700 nm ), ambas
transiciones requieren la presencia de un grupo funcional que suministre los orbitales π .Hablando
estrictamente, es a estos centros absorbentes insaturados a los que se les aplica el término CROMÓFORO.

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 5. DETALLES EXPERIMENTALES:

A) MATERIALES Y REACTIVOS:

a. Materiales y Equipos:

- Espectrofotómetro UV-Visible, - Desecador de vidrio, con agente

Shimatzu 1700. deshidratante.
- Celdas de Cuarzo - Pipetas volumétricas de
- Balanza Analítica 1,2,3,5,10,15,20 y 25 mL.
- Fiolas de 50, 100, 500, y 1000 mL
b. Reactivos:

- Agua exenta de nitrato

- KNO3 p.a.
- Cloroformo, CHCl3 (reactivo controlado)
- HCl

5.1. PROCEDIMIENTO:
5.1.1. Preparación de la solución de HCl 1N:

Diluimos 8,3 mL concentrado en agua destilada y enrazamos en fiola de 100 ml, homogenizamos
la solución por inversión.

5.1.2. Preparación del blanco:

En una fiola de 50 mL colocamos aproximadamente 45 ml de agua destilada, añadimos 1 ml de

solución de HCl 1N y luego completamos hasta enrazar, por último, homogenizamos la solución
por inversión.

5.1.3. Preparación de la solución de patrón primario de NO3- :

Pesamos 0.1805 g de KNO3, disolvimos en agua, agregamos 2 ml de CHCl3 y diluimos a 250 mL

en fiola, enrazamos y homogenizamos la solución por inversión.
6
De donde obtendremos una concentración de 100 ppm de N:

0.1805 𝑔 𝑑𝑒 𝐾𝑁𝑂3 14 𝑔 𝑑𝑒 𝑁 1000 𝑚𝑔 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑁

× × = 100 = 100 𝑝𝑝𝑚
0.25 𝐿 101 𝑔 𝑑𝑒 𝐾𝑁𝑂3 1𝑔 𝐿

5.1.4. Preparación de la solución intermedia de nitrato:

Diluimos 5 ml de solución de patrón primario con agua destilada, llevamos a fiola de 100 ml,
enrazamos y homogenizamos la solución por inversión.

De esta manera la solución intermedia adquiere una concentración de 5 ppm de N.

𝑋(𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛) × 100 𝑝𝑝𝑚 = 5 𝑝𝑝𝑚 × 100 𝑚𝐿

𝑋(𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛) = 5𝑚𝐿

5.1.5. Preparación de soluciones patrón para la curva de calibración:

Preparamos soluciones de calibración en el rango de 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, y 0.5 ppm de NO3—N,
tomando una alícuota correspondiente de solución intermedia (5 ppm), enrazándolo posteriormente
a 50 mL.

Por último, añadimos 1 mL de HCl 1N y homogenizamos la solución por inversión.

Las alícuotas de solución intermedia a tomar en cada caso fueron:

- P1 (0.1 ppm):
𝑉(𝑚𝐿) × 5 𝑝𝑝𝑚 = 0.1 𝑝𝑝𝑚 × 50 𝑚𝐿

𝑉(𝑚𝐿) = 1 𝑚𝑙

- P2 (0.2 ppm):
𝑉(𝑚𝐿) × 5 𝑝𝑝𝑚 = 0.2 𝑝𝑝𝑚 × 50 𝑚𝐿
𝑉(𝑚𝐿) = 2 𝑚𝑙
- P3 (0.3 ppm):
7
 𝑉(𝑚𝐿) × 5 𝑝𝑝𝑚 = 0.3 𝑝𝑝𝑚 × 50 𝑚𝐿
𝑉(𝑚𝐿) = 3 𝑚𝑙
- P4 (0.4 ppm):
𝑉(𝑚𝐿) × 5 𝑝𝑝𝑚 = 0.4 𝑝𝑝𝑚 × 50 𝑚𝐿
𝑉(𝑚𝐿) = 4 𝑚𝑙
- P5 (0.5 ppm):
𝑉(𝑚𝐿) × 5 𝑝𝑝𝑚 = 0.5 𝑝𝑝𝑚 × 50 𝑚𝐿
𝑉(𝑚𝐿) = 5 𝑚𝑙

5.1.6. Tratamiento de las muestras:

En una fiola de 50 mL agregamos 5 ml de agua de mesa de marca “Vida” y en otra, 10 mL de agua

de mesa de marca “Cielo”. A cada una de las fiolas añadimos 1 ml de HCl 1N, mezclamos bien y
completamos a 50 ml con agua destilada y, por último, homogenizamos la solución por inversión.
Leemos la absorbancia frente al blanco reactivo en agua destilada, ajustada a absorbancia cero.

5.1.7. Instrucciones para el manejo del espectrofotómetro UV-Visible

Shimatzu 1700.
1. Retiramos la bola de sílice, del compartimento de portaceldas del espectrofotómetro UV
visible.
2. Encendemos el supresor de picos, el estabilizador, el espectrofotómetro (botón lado
izquierdo), levantamos la pantalla del espectrofotómetro UV visible, se completa la
verificación del instrumento (Inicio y Mode).
3. Encendemos la PC, el monitor. Presionamos en el espectrofotómetro PC CONTROL (F4)
y cerramos la pantalla.
4. Ingresamos al software UV PROBE, luego SPECTRUM y presionamos CONNECT.
5. Luego vamos a EDIT e introducimos datos solicitados:
Wavelengh rang: Start:350, End: 190, Scan: fast, Single: simple.
Parametrs instruments: Absorbancia
No debemos modificar: Path lengh: 10 nm, Slit Wicht: 1.0 mm fixed.
Light source: 340.8

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 S/R Exchange.
Damos CLICK en ACEPTAR.
6. Seleccionamos BASELINE (rango de 190- 350 nm), aparece SLEWING (esperamos) y
STOP (botón rojo), NO debemos manipular el equipo hasta que aparezca en la pantalla
inferior izquierda: λ máx. 0.00 Abs, al activarse los íconos presionamos START, para
iniciar la corrida de la línea base sobre la escala de cero.
7. En cada compartimento: muestra y referencia, colocamos las celdas con el Blanco (por la
parte opaca de la celda, frente nosotros) presionamos AUTOZERO, parpadea este ícono y
aparece λ máx. – 0.00 Abs.
8. DETERMINACIÓN DE λ máximo NO3-:
Colocamos en el compartimento de muestra la celda con patrón intermedio. Si deseamos
cambiar los límites, llevamos el cursor al gráfico, click derecho, CUSTOMIZE, LIMITS:
introducir datos necesarios, ACEPTAR. Presionamos START e iniciamos el barrido del
espectro, se activa STOP (rojo), no debemos manipular el equipo hasta que haya terminado
el gráfico de la curva. En NEW DATA SET completamos los datos y presionamos OK.
9. DETERMINACIÓN DE λ máximo EN LA CURVA:
Presionamos OPERATION, PEACK PICK, aparece la tabla, hacemos click en la celda de
DESCRIPTION a la altura de λ máximo apropiado, click derecho, click en Propiedades, en
PEAKS, activamos Description y Down, cerramos.
10. Ir a FILE, SAVE AS, introducir datos solicitados y guardamos.
11. GRÁFICA DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN:
Seleccionamos modo PHOTOMETRIC. Creamos método presionando M. En una nueva
ventana seleccionamos los parámetros del método.
Utilizamos λ máximo obtenida en (9), luego CLOSE, FILE, SAVE AS, completamos datos
y guardamos.
12. Colocamos en compartimentos de muestra (adelante), la celda con el BLANCO. En
ESTÁNDAR TABLE (Active) registramos los valores de las disoluciones preparadas.
Ejemplo: BK, std, 0.00, en las celdas SAMPLE, TYPE CONC. En SAMPLE TABLE
ACTIVE, registramos datos de las muestras, damos click en celda BK, luego en READ
STD y YES ante la pregunta ¿Quiere continuar?

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 13. Colocamos en el compartimento de la muestra (adelante), la celda con el patrón 1, damos
clic en celda correspondiente a P1, READ STD, continuar igual con cada patrón. Luego
colocamos las celdas con las muestras en el compartimento y marcar READ UNK para
realizar la lectura.
14. Ir a GRAPH, introducir parámetros estadísticos, FILE, SAVE AS, guardar.
15. Presionamos DISCONECT, si deseamos, guardamos la información en un USB nuevo.
16. Retiramos celdas, presionamos MODE (espectrofotómetro), apagamos el equipo,
estabilizador, monitor, supresor de picos y colocamos la sílice.

17. TABULACIÓN DE DATOS Y RESULTADOS EXPERIMENTALES:

Tabla 1. Absorbancias obtenidas:

CONCENTRACION (ppm) ABSORBANCIA

Bk 0 -0.001
P1 0.1 0.006
P2 0.2 0.002
P3 0.3 0.002
P4 0.4 0.005
P5 0.5 0.017

Tabla 2. Absorbancias obtenidas para corrección de la gráfica:

CONCENTRACION (ppm) ABSORBANCIA

Bk 0 -0.001

P2 0.2 0.002

P4 0.4 0.005

10
 18. CÁLCULOS:
18.1. Determinación de la concentración de Nitratos:

Sabemos que las Absorbancias medidas de las muestras fueron:

ABSORBANCIA

MUESTRA 1 0.011

MUESTRA 2 0.01

- Para la muestra 1 de agua marca CIELO:

De la ecuación de la gráfica corregida obtenemos la ecuación:

𝒀 = 𝟎. 𝟎𝟏𝟓𝒙 − 𝟎. 𝟎𝟎𝟏

A partir de ello calculamos la concentración para la muestra enrazada a 50 ml:

0.011 = 0.015𝑥 − 0.001

𝑥 = 0.8 𝑝𝑝𝑚

La concentración obtenida de NO3- en forma de N, debe ser convertida a concentración en forma

de NO3-:

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑁 62 g de NO3
0.8 × = 3.543 ppm de NO3
𝐿 14 𝑔 𝑑𝑒 𝑁

En la alícuota de 10 ml tomada se tendrá:

mg 50 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙
3.543 de N × = 𝟏𝟕. 𝟕𝟏𝟓 𝒑𝒑𝒎 𝒅𝒆 𝑵𝑶𝟑 𝒆𝒏 𝒍𝒂 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂
L de sol 10 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

- Para la muestra 2 de agua marca VIDA:

De la ecuación de la gráfica corregida obtenemos la ecuación:

𝒀 = 𝟎. 𝟎𝟏𝟓𝒙 − 𝟎. 𝟎𝟎𝟏

A partir de ello calculamos la concentración para la muestra enrazada a 50 ml:

0.01 = 0.015𝑥 − 0.001

𝑥 = 0.733 𝑝𝑝𝑚

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La concentración obtenida de NO3- en forma de N, debe ser convertida a concentración en forma
de NO3-:

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑁 62 g de NO3
0.733 × = 3.248 ppm de NO3
𝐿 14 𝑔 𝑑𝑒 𝑁

En la alícuota de 5 ml tomada se tendrá:

mg 50 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙
3.248 de N × = 𝟑𝟐. 𝟒𝟖 𝒑𝒑𝒎 𝒅𝒆 𝑵𝑶𝟑 𝒆𝒏 𝒍𝒂 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂
L de sol 5 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

19. GRÁFICAS:

A) Determinación del λ máximo:

12
B) Determinación cuantitativa de manganeso en acero

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 CURVA DE CALIBRACION ORIGINAL
0.018

0.016
y = 0.0249x - 0.001
0.014 R² = 0.5438
0.012
ABSORBANCIA

0.01

0.008

0.006

0.004

0.002

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
-0.002
CONCENTRACION

CURVA DE CALIBRACION CORREGIDA

0.006

0.005
y = 0.015x - 0.001
0.004
R² = 1
ABSORBANCIA

0.003

0.002

0.001

0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45
-0.001

-0.002
CONCENTRACION

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20. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADO:

- La concentración obtenida de nitratos en las muestras de agua, muestran que éstas son
adecuadas para el consumo humano pues ambas son menores a 50 ppm, la cual es la máxima
concentración permitida para este tipo de agua. (ANEXO 1).

- Al analizar la curva de calibración considerando todos los patrones preparados, notamos

que la curva no resultó lineal, por lo que se eliminaron algunos de estos datos; logrando así
un ajuste perfecto lineal y poder realizar el cálculo de las concentraciones de nitratos en las
muestras.

21. CONCLUSIONES:

- Se determinó que la longitud de onda máximo resultó ser 249 nm; el cual fue determinado
por el espectrofotómetro.

- La concentración de nitratos en este tipo de aguas resultó ser: 17.715 ppm para la muestra
de agua CIELO y 32.48 ppm para la muestra de agua VIDA.

22. RECOMENDACIONES:

- Para esta práctica realizada se tuvo un error porque la curva de la calibración no resultó ser
lineal tomando todos los puntos, por lo que se debe tener sumo cuidado en la preparación
tanto del blanco como de los patrones.
- El tratamiento de la muestra debe ser el adecuado para que las concentraciones a calcular
sean los correctos y no existan interferencias de ningún tipo.

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- La celda debe ser sostenida por la parte oscura de la misma, así evitamos contaminar el lado
por el cual pasará el haz de luz para la absorción UV.
- Uno de los errores que se pueden cometer con facilidad es provocado por el hecho de sacar
y poner repetidamente el blanco del espectrofotómetro de haz simple puede generar errores
de tipo instrumental, por lo que debemos procurar no hacerlo.

23. BIBLIOGRAFÍA:

- Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales Ministerio de Ambiente,

Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia.
SUBDIRECCIÓN DE HIDROLOGÍA - GRUPO LABORATORIO DE CALIDAD
AMBIENTAL
DETERMINACION DE NITRATOS EN AGUAS POR ESPECTROFOTOMETRIA UV

- Reglamento de la Calidad del Agua para Consumo Humano DS N° 031-2010-SA

Dirección General de Salud Ambiental Ministerio de Salud Lima – Perú 2011

- SKOOG, D.A.; Leary J.J., Holler F. James; PRINCIPIOS DE ANÁLISIS

INSTRUMENTAL, 5° ed.; Ed. McGraw-Hill (1998), págs. 353-367.

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24. ANEXOS:

Reglamento de la Calidad del Agua para Consumo Humano DS N° 031-2010-SA./PERU

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