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TINCION GRAM

Esta tinción es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se


manejan pruebas microbiológicas. Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos
colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y
bacterias Gram positivas. Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en
1884; hoy en día, sigue siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo
económico, sencillo y eficaz que resulta. En microbiología clínica resulta de gran utilidad, ya
que a partir de muestras clínicas directas provenientes de sitios estériles se puede saber de
manera rápida las características de la muestra y hacer una diferencia de los potenciales
microorganismos causantes de una infección. Los principios de la tinción de Gram están
basados en las características de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere
propiedades determinantes a cada microorganismo. La pared celular de las bacterias Gram
negativas está constituida por una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular
externa, mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa
constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa; así pues, la
composición química y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias
Gram negativas y Gram positivas explica y determina las características tintoriales. La tinción
de Gram se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, el cual tiene afinidad con
el peptidoglicano de la pared bacteriana. Posteriormente, se coloca lugol, el cual sirve como
mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formación de un complejo cristal violeta
yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. En seguida, se coloca
una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la
misma, también destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a que
ésta es soluble a la acción de solventes orgánicos, como la mezcla de alcohol-acetona. Las
bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor
fuerza este complejo, mientras que las Gram negativas no lo pueden retener por tener menos
cantidad de peptidoglicano. Por último, se coloca safranina, la cual funciona como un
colorante secundario o de contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron
retener el complejo cristal violeta-yodo. Hay bacterias de un mismo género que pueden
observarse en la misma muestra como Gram positivas y como Gram negativas, a este evento
se le llama tinción Gram variable secundaria a alteración en nutrientes, temperatura, pH o
concentración de electrolitos. No todas las bacterias se pueden teñir por esta técnica, ya que
carecen de pared celular (micoplasma) o su pared celular tiene una composición química
diferente (micobacterias, que cuentan con una gran cantidad de ácidos icólicos). Las muestras
útiles para su uso son líquidos estériles, biopsias para cultivo, abscesos, hisopados, crecimiento
de colonias aisladas en medios de cultivo. Las bacterias Gram positivas se observan de color
azul obscuro a morado, mientras que las Gram negativas se observan de color rosa a rojo.
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES

 Laminas portaobjetos
 Laminas cubreobjetos
 Una centrifuga
 Tubos de ensayo
 Microscopios
 Tincion de cristal violeta (básico)
 Tincion de zafranina (contraste)
 Tincion de lugol (impregnar)
 Alcohol cetona (descolorante)
 Muestra de orina

METODOS

1. Verter la muestra de orina en dos tubos de ensayo


2. Solo uno de ellos va a ser centrifugado y se usara el sedimento para la prueba
mientras que la otra muestra se utilizara el liquido
3. La muestra 1 será centrifugada a 3000 rv/5min
4. El sedimento de la muestra 1 será extendida en el portaobjetos y el líquido de la
muestra 2 también será extendido en un portaobjetos
5. A las dos muestra se le aplicara unas cuantas gotas de la tinción cristal violeta por el
periodo de 2min
6. Se lava con agua a las dos muestras
7. Luego se le añadirá la tinción de lugol
8. Se vuelve a lavar con agua las dos muestras
9. Seguido se le aplicara unas cuantas gotas de alcohol cetona
10. Una vez más se lava con agua las muestras
11. Ahora , se le aplicara a las muestras la tinción de zafranina por el periodo de 1min
12. Por última vez se lavaran las muestras y serán secadas a temperatura ambiente
13. Visualizar en un microscopio a 100x
RESULTADOS
MUESTRA 1 (sedimento)

3 cocos gram +

MUESTRA 2 (liquido)

2 cocos gram +
INTERPRETACION DEL EXPERIMENTO
TINCION GRAM

Los procedimientos de tinción gram se inicia con la aplicación de un colorante


básico, violeta de genciana, a continuación se aplica una solución de yodo,
todas las bacterias se tiñen de color azul en este punto del procedimiento,
luego la célula se trata con alcohol. Las células grampositivas que conservan el
complejo de violeta genciana adquieren un color azul y las células
gramnegativas se decoloran por completo con la adicion de alcohol. Como
último se agrega otro colorante como rojo de safranina de forma que las células
gramnegativas decoloradas adquieran un color contraste; las grampositivas
adquieren un color violáceo.

En el experimento de la orina que se realizó se hizo dicho procedimiento para


el reconocimiento de bacterias grampositivas y gramnegativos, la pared celular
de las bacterias es importante para esta coloración y en los resultados se
obtuvo tres cocos grampositivos al verse teñidas de color violeta.

CONCLUSION

 La pared celular de las bacterias es importante y determinante en la


coloración gram.
 La coloración grampositiva de las bacterias es más directa debido a la
complejidad de su pared celular por poseer acido teicoico y
peptidoglucano grueso , y la ausencia de estos componentes y la
presencia de proteínas porinas nos darán una coloración gramnegativa.
BIBLIOGRAFIA
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf

ANEXOS

BACTERIAS GRAMPOSITVAS BACTERIAS GRAMNEGATIVAS

Staphylococcus aureus. Neisseria meningitidis

Streptococcus pyrogenes Neisseria gonorrhoeae

Streptococcus aglactiae Escherichia coli

Streptococcus faecalis. Salmonella typhi.

Streptococcus pneumoniae. Salmonella enteritidis

Streptococcus sanguis Haemophilus influenzae

Clostridium tetani. Bordetella pertussis.

Clostridium botullinum Brucella abortus

Clostridium perfringes Francisella tularensis

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