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Competencia: Identificar y caracterizar los componentes del sistema inmunitario

PRÁCTICA 1.

ÓRGANOS LINFOIDES Y CÉLULAS


DEL
SISTEMA INMUNITARIO

I. INTRODUCCIÓN

El sistema inmunitario para su estudio se puede clasificar en: órganos linfoides primarios
(centrales) y secundarios (periféricos), los cuales se describen brevemente a continuación:

Órganos linfoides primarios: Son órganos donde se generan y maduran las células del
sistema inmunitario. Antes del nacimiento son el saco vitelino y el hígado fetal, mientras
que en el adulto son la médula ósea y el timo.

a) Médula ósea: Formada por islotes de células hematopoyéticas y tejido adiposo, los
cuales se encuentran en huesos largos, cuerpos vertebrales, costillas, esternón, huesos
planos de cráneo y pelvis. En estos sitios, los progenitores hematopoyéticos se desarrollan
a partir de células troncales, mediante la interacción con: el estroma y citocinas
(Interleucinas (IL), quimiocinas y factores estimulantes de colonias (CSF)). Generando el
linaje mieloide y el linfoide. El linaje mieloide da origen a células dendríticas, monocitos,
macrófagos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos, mastocitos, plaquetas y eritrocitos. El linaje
linfoide da origen a linfocitos T, B y células NK. En este órgano maduran los linfocitos B y
células NK.

b) Timo: Es un órgano bilobulado, capsulado y trabeculado, cada lóbulo se divide en


corteza y médula. El progenitor linfoide común migra de la médula ósea al timo, donde
recibe el nombre de timocito y completa su proceso de maduración a linfocitos T
cooperadores (Th) o citotóxicos (Tc) o reguladores (Treg).

Órganos linfoides secundarios: Son órganos donde se inicia la respuesta inmunitaria


adaptativa, incluye al bazo, ganglios linfáticos y tejido linfoide asociado a mucosas
(MALT).

a) Bazo: Órgano capsulado donde se realiza la hemocatéresis (pulpa roja) y depuración


de antígenos sistémicos (pulpa blanca). La pulpa blanca contiene principalmente linfocitos
T y B, mientras que la pulpa roja es rica en fagocitos mononucleares, eritrocitos y restos
de células sanguíneas.

b) Ganglios linfáticos: Son órganos capsulados distribuidos a través de todo el sistema


linfático. A los ganglios llega la linfa procedente de los tejidos y están organizados en tres
zonas:

1. Corteza: Constituida principalmente por linfocitos B organizados en folículos


primarios y secundarios (centros germinales).

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2. Paracorteza: Formada esencialmente por linfocitos T y células presentadoras de


antígeno (APC).

3. Médula: Este sitio está conformado básicamente por macrófagos, linfocitos T,


linfocitos B y células plasmáticas.

c) Tejido linfoide asociado a mucosas (MALT): Se conforma por tejido linfoide


organizado y difuso. El tejido linfoide no encapsulado, situado en la lámina propia del
tracto gastrointestinal, (GALT), nasofaríngeo (NALT), bronquial (BALT) y genito-urinario
(GULT).

Células del Sistema Inmunitario


Las células del sistema inmunitario se originan a partir de las células troncales
hematopoyéticas de la médula ósea. Por efecto de la interleucina tres (IL-3) se originan
células de estirpe mieloide y a su vez la IL-7 da origen a la estirpe linfoide.

Células de la inmunidad innata

Monocitos/Macrófagos: Los monocitos (circulación) son los precursores de los


macrófagos (tejidos), poseen actividad fagocítica y son APC (Célula Presentadora de
Antígeno). Algunos marcadores de membrana que los identifican son CD14 y CD64 (CD:
marcador de diferenciación).

Células dendríticas (DC): Son APC y sus marcadores de superficie son CD11c y HLA-
DR. Tienen la capacidad de regular la respuesta inmunológica.

Neutrófilos: Células con actividad fagocítica, se encuentran en circulación sanguínea, su


tiempo de vida media es de aproximadamente seis horas. Expresan CD16 y CD33.

Basófilos: Contienen aminas vasoactivas y mediadores de la inflamación en sus gránulos.


Se encuentran en circulación sanguínea. Expresan constitutivamente en la membrana el
receptor FcεRI, CD63 y CD123.

Eosinófilos: Abundan en los infiltrados inflamatorios de la fase tardía de las reacciones de


hipersensibilidad inmediata y participan en la defensa contra los helmintos. Contienen
proteína básica mayor (MBP), eotaxina y proteína catiónica del eosinófilo (ECP) entre
otras.

Mastocitos: Son células residentes en tejidos que expresan constitutivamente FcεRI en


su membrana, poseen gránulos con aminas vasoactivas y mediadores de la inflamación.
Son una estirpe celular distinta a los basófilos.

Células NK: Expresan en membrana las proteínas CD16 y CD56. Ejercen citotoxicidad
sobre células propias modificadas (tumorales) e infectadas.

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Células de la inmunidad adaptativa

Linfocitos B: Células de la respuesta inmunitaria adaptativa humoral, sus marcadores de


superficie son CD19 y CD20, entre otros. Su vida media si no ocurre encuentro antigénico
es aproximadamente de 30 días y una vez que éste ocurre, se diferencian a células
plasmáticas productoras de anticuerpos (Ab).

Linfocitos T: Participan en la respuesta inmunitaria adaptativa celular, sus marcadores de


membrana son entre otros: CD3, CD4 (Th), CD3, CD4, CD25 (Treg) y CD3, CD8 (Tc). Su
función es modular la respuesta inmunológica a través de la producción de citocinas (Th y
Treg) y la inducción de apoptosis en células infectadas y tumorales (Tc). Su vida media es
aproximadamente de 30 días si no ocurre encuentro antigénico.

Estudio de laboratorio
Citometría hemática (Biometría hemática): Es un estudio que informa sobre el número y
características de las células de la sangre, se divide en el estudio de la serie roja, serie
blanca y serie trombocítica. La serie roja incluye la determinación de hemoglobina (Hb),
hematocrito (Hto.), número de glóbulos rojos, volumen corpuscular medio (VCM), Hb
corpuscular media (HCM), concentración media de Hb globular (CmHb). La serie blanca
incluye la cuenta total y diferencial de leucocitos. La serie trombocítica determina la cuenta
de plaquetas. Los valores de referencia de la biometría hemática para la población
mexicana se presentan en el anexo correspondiente.

II OBJETIVOS

1. Correlacionar la localización y función de las células con la estructura de los órganos


linfoides en la respuesta inmunológica.
2. Identificar las poblaciones leucocitarias en un frotis de sangre periférica
3. Conocer los parámetros de referencia de una cuenta leucocitaria

III. MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

Material Reactivos Equipo


- Lancetas - Colorante de Wright - Microscopio óptico
- Portaobjetos - Solución amortiguadora de
- Torundas con alcohol fosfatos
- Preparaciones finas de médula ósea - Aceite de inmersión
- Cortes histológicos de órganos linfoides
secundarios
- Inmunohistoquímica de ganglio linfático
- Láminas
- Puentes de tinción
- Hoja de papel seda

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IV. PROCEDIMIENTO

a) Frotis:
1. Desinfectar el pulpejo con una torunda saturada con alcohol al 70%.
2. Con una lanceta puncionar el pulpejo en la porción lateral.
3. Depositar una gota de sangre en un extremo del portaobjetos.
4. Colocar otro portaobjetos limpio sobre la gota de sangre en un ángulo de 45°, hasta
que por capilaridad la gota de sangre se extienda en el borde del porta objetos y
proceder a extender la gota de sangre hasta formar una monocapa.
5. Secar a temperatura ambiente.
6. Agregar colorante de Wright y dejar reposar durante 8 minutos.
7. Adicionar solución amortiguadora hasta cubrir el portaobjetos en su totalidad. Dejar
reposar por 10 minutos.
8. Enjuagar por goteo con agua corriente.
9. Eliminar el exceso de agua y limpiar la superficie contraria al frotis.
10. Secar al aire a temperatura ambiente.
11. Enfocar la preparación con los objetivos 10x, 40x y finalmente observar a 100x
agregando 1 gota de aceite de inmersión.
12. Identificar las diferentes estirpes celulares como: Granulocitos (neutrófilos,
basófilos y eosinófilo), Linfocitos y Monocitos.

b) Observación de preparaciones histológicas de órganos linfoides

Aspirado de médula ósea teñida con hematoxilina y eosina (H&E)

1. Observar la preparación con el objetivo 10x.


2. Identificar megacariocitos y distribución de médula roja y amarilla.

Órgano linfoide secundario teñido con H&E

1. Observar la preparación con el objetivo 10x.


2. Identificar las zonas de la corteza, folículo primario y centros germinales.

Inmunohistoquímica de ganglio linfático marcada con anti-CD3 o anti-CD20

1. Observar la preparación con el objetivo 10x.


2. Identificar las zonas de la corteza, folículo primario y centros germinales.

NOTA: Las zonas positivas para CD3 o CD20 se observarán en color café.

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V. RESULTADOS

Reportar lo que observó en las diferentes preparaciones.

- Frote sanguíneo: Describir la morfología de los leucocitos observados.

- Aspirado de médula ósea: Describir la morfología del megacariocito, heterogeneidad


celular y distribución de médula roja y amarilla.

- Órgano linfoide secundario: Diferenciar folículos primarios de los folículos secundarios.

- Inmunohistoquímicas de ganglio: Identificación de la región de la corteza, folículos


primarios y paracorteza.

VI. CUESTIONARIO ADICIONAL

1. Defina y describa las diferencias de: molécula, organelo, célula, tejido y órgano, y de
tres ejemplos de cada uno.
2. ¿Qué es una célula troncal hematopoyética?
3. ¿Qué diferencias morfológicas, fenotípicas y funcionales existen entre los siguientes
leucocitos?
a) Neutrófilo y Basófilo
b) Monocito y eosinófilo
c) Neutrófilo y Linfocito B
d) Monocito y linfocito T
e) NK y linfocito T
4. Elabore una tabla donde compare los valores de referencia para la biometría hemática
de un neonato y un adulto.
5. ¿Qué poblaciones leucocitarias se ven alteradas en una infección bacteriana, viral,
parasitaria y micótica?

VII. BIBLIOGRAFÍA

1. Parham P. El sistema inmune. 4ª ed. México: Manual Moderno., 2016. 600 p. ISBN:
9786074485646.
2. Pavón L, Jiménez MC, Garcés ME. Inmunología (molecular, celular y traslacional). 1°
ed. Wolters Kluwer., 2016. 700 p. ISNB: 9788416004867.
3. Murphy K, Travers P, Walport M. Inmunobiología de JANEWAY. 7ª ed. México:
McGraw-Hill-Interamericana., 2009. 887 p. ISBN-13: 978-970-10-7347-6.
4. Ruiz–Argüelles GJ, Ruíz-Delgado GJ. Fundamentos de Hematología. 5a edición. ed.
México: Panamericana., 2014. 394p. ISBN: 978-607-9356-08-8

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Anexo 1. INTERVALOS DE REFERENCIA PARA BIOMETRÍA HEMÁTICA

(Población mexicana)

Mujeres >20 años Hombres >20 años

Hemoglobina (g/dL) 11.7-16.3 13.8/18.5

Hematocrito (%) 35.4-49.40 35.4-49.40

Eritrocitos (millones/mL) 3.87-5.44 4.39-6.10

VCM (fL) 83.3-100 84.4-100

HCM (pg) 26.8-33.2 27.1-33.5

CMHC (g/dL) 31.0-34.4 31.6-34.8

ADE (%) 12.0-17.7 11.8-17.6

Plaquetas (miles/mL) 167-431 147-384

Leucocitos (miles/mL) 3.56-10.30 3.84-9.79

Neutrófilos (%) / (miles/mL) 39.6-76.1 / 1.7-6.48 39.6-76.1 / 1.7-6.48

Linfocitos (%) / (miles/mL) 15.5-48.6 / 0.99-3.24 15.5-48.6 / 0.99-3.24

Monocitos (%) / (miles/mL) 3.4-10.10 / 0.19-0.71 3.4-10.10 / 0.19-0.71

Eosinófilos (%) / (miles/mL) 0.3-5.5 / 0.02-0.32 0.3-4.5 / 0.02-0.32

Basófilos (%) / (miles/mL) 0.0-1.4 / 0.0-0.09 0.0-1.6 / 0.0-0.09

VCM: volumen corpuscular medio; HCM: hemoglobina corpuscular media; CMHC: concentración media de
hemoglobina corpuscular; ADE: amplitud de distribución eritrocitario.
Adaptado de: Díaz-Piedra P, Olay Fuentes G, Hernández Gómez R, Cervantes-Villagrana RD, et al. Determinación de
los intervalos de referencia de biometría hemática en población mexicana. Rev Latinoamer Patol Clin. 2012 Oct; 59(4).

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