Competencia: Entender el proceso de la fagocitosis como mecanismo de defensa de la inmunidad innata.

PRÁCTICA 2.

FAGOCITOSIS

I. INTRODUCCIÓN

La respuesta inmunitaria para su estudio se clasifica en innata y adaptativa, cada una de

estas se divide en humoral y celular. La respuesta inmunitaria innata celular está
representada por células fagocíticas como: neutrófilos (N), macrófagos (Mφ), células
dendríticas (DC) y no fagocíticas como las células NK.

La fagocitosis es el proceso por medio del cual las células especializadas se dirigen al sitio
de inflamación, reconocen a través de receptores de membrana y endocitan partículas y/o
microorganismos para digerirlos. Este proceso se lleva a cabo en cinco etapas (Figura 1):

1) Quimiotaxis: Migración leucocitaria inducida por un gradiente de quimioatrayentes

como los lipopolisacáridos (LPS) solubles, péptidos N-formil-metionilados, proteínas del
complemento como C5a y quimiocinas como interleucina 8 (IL-8), eotaxina, RANTES, y
proteína quimioatrayente de monocitos (MCP-1) entre otros, las cuales son reconocidas
por un receptor.

2) Reconocimiento y unión: Los microorganismos no opsonizados son reconocidos a

través de diferentes receptores como el receptor de manosa (MR) y CD14 mientras que
los opsonizados a través de CR1 (CD35), CR3 (CD11b) o FcγRI (CD64).

3) Ingestión (endocitosis): Una vez que ocurre la unión con el microorganismo, el fagocito
genera prolongaciones membranales para endocitarlo y formar un fagosoma.

4) Fusión fagosoma-lisosoma: Los lisosomas contienen una gran variedad de enzimas

hidrolíticas y un pH ácido. La fusión del fagosoma con el lisosoma forma el fagolisosoma y
es ahí donde los microorganismos son degradados por tres mecanismos diferentes:
dependientes del oxígeno, dependientes del óxido nítrico y no oxidativos (independientes
de oxígeno).

a) Dependiente de oxígeno: La ingestión incrementa el consumo de glucosa y oxígeno,

este evento bioquímico intracelular se conoce como “estallido respiratorio” y finaliza
con la producción de radicales libres de oxígeno (ROI), como anión superóxido (O2-),
peróxido de hidrógeno (H2O2), iones hidroxilo (OH-), el singlete del oxígeno (1O2) e
hipoclorito (HClO-). Todos estos metabolitos son altamente reactivos y tóxicos para los
microorganismos. Figura 1.

b) Dependientes del óxido nítrico: Este mecanismo es llevado a cabo principalmente

por los macrófagos activados por el interferón gamma (IFN-γ) y por el factor de
necrosis tumoral alpha (TNF-α). Los macrófagos activados expresan la enzima de
óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) la cual cataliza la reacción de NADPH, más

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 7

 Competencia: Entender el proceso de la fagocitosis como mecanismo de defensa de la inmunidad innata.

oxígeno y L-arginina para producir NADP, óxido nítrico (NO) y citrulina. El NO es

oxidado por el anión superóxido para producir una especie altamente tóxica llamada
peroxinitríto (ONOO-).

c) No oxidativos: Incluye las proteínas preformadas dentro de los lisosomas como

lactoferrina, péptidos antimicrobianos, granulisina, catepsinas, lisozima,
mieloperoxidasa, elastasas, colagenasas, e hidrolasas ácidas.

Figura 1. Etapas de la fagocitosis

5) Digestión y exocitosis: Una vez que los microorganismos han sido procesados hasta
unidades más simples, éstas son exocitadas o reincorporadas al metabolismo celular o
presentadas a linfocitos T.

Los fagocitos son los monocitos-macrófagos y los neutrófilos que forman parte de los
polimorfonucleares (PMN). Los PMN son los leucocitos más abundantes en la sangre, son
de vida corta (aproximadamente 6 horas) y mueren generalmente en el sitio de inflamación
formando pus.

Las alteraciones en la fagocitosis que impiden desencadenar el estallido respiratorio y la

subsecuente generación de O2- originan una inmunodeficiencia primaria (IDP) conocida
como enfermedad granulomatosa crónica (EGC). En Latinoamérica los trastornos de la
fagocitosis comprenden el 8.6% de las IDP, en México representan el 14.1%. A nivel
mundial la tasa de incidencia de la EGC es de 1/200,000 nacidos vivos. La ausencia del
estallido respiratorio se traduce en infecciones bacterianas y fúngicas recurrentes que
ponen en peligro la vida, así como la formación de granulomas.

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 8

 Competencia: Entender el proceso de la fagocitosis como mecanismo de defensa de la inmunidad innata.

Además de una buena historia clínica y exploración física una de las técnicas esenciales
para evidenciar las alteraciones en el estallido respiratorio de los fagocitos es la reducción
del nitroazul de tetrazolio (NBT).

II. OBJETIVOS

1. Diferenciar la fagocitosis entre un microorganismo opsonizado y no opsonizado.

2. Interpretar el fundamento de la prueba de reducción del nitroazul de tetrazolio.
3. Analizar las consecuencias de las alteraciones en la fagocitosis.
4. Observar macrófagos pulmonares.

III. MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

Material Reactivos Equipo

- Preparaciones de fagocitos con levaduras - Aceite de inmersión - Microscopio óptico
opsonizadas y no opsonizadas teñidas con NBT
- Cortes histológicos de pulmón con tinción
Hematoxilina y Eosina (H&E)
- Papel seda

IV. PROCEDIMIENTO

1. Observar las laminillas al microscopio e identificar las células fagociticas, las

levaduras y las células que están realizando fagocitosis y reducción del NBT.
2. Contar 25 células en cada laminilla (opsonizadas y no opsonizadas) y calcular el
porcentaje de células fagocíticas y reductoras del NBT y anotar sus resultados en la
tabla 1.
3. Observar la citoarquitectura pulmonar e identificar los macrófagos alveolares.

Tabla. 1
CÉLULAS FAGOCÍTICAS
No. Total de No. de células con No. de células que
% %
células contadas levaduras internalizadas redujeron NBT
No opsonizadas

Opsonizadas

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 9

 Competencia: Entender el proceso de la fagocitosis como mecanismo de defensa de la inmunidad innata.

V. RESULTADOS

1. Tomar fotografías de campos representativos de cada una de las laminillas.

2. Describa de manera breve lo que observa en las laminillas.

VI. CUESTIONARIO ADICIONAL

1. En el Síndrome de Chédiak-Higashi ¿qué leucocitos se ven afectados, y de qué manera

repercute en la fagocitosis?
2. Describa un mecanismo de evasión bacteriano o viral de la fagocitosis.
3. Mencione 3 receptores que son reconocidos por los macrófagos para fagocitar células
apoptóticas
4. ¿Qué es un granuloma?
5. ¿Cómo es el proceso por el cual las células apoptóticas atraen a los fagocitos para ser
eliminadas y no inducir enfermedades autoinmunitarias?

VII. BIBLIOGRAFÍA

1. Baehner, R. L., Nathan, D. G. 1968. “Quantitative nitroblue tetrazolium test in Chronic

Granulomatosis Disease”. NEJM. 278:975-976.
2. Rodríguez Padilla, C., Tamez Guerra, R. 2010. “Evaluación del funcionamiento de
células fagocíticas” en Manual de Inmunología. 1a Ed. Edit. : Trillas. pp: 213 – 243.
3. Álvarez-Cardona A., Yamasaki-Nakashimada MA., Espinoza-Padilla, SE. 2009.
”Enfermedad granulomatosa crónica”. Alerg Mex. 56:156-74.
4. Parham P. El sistema inmune. 4ª ed. México: Manual Moderno., 2016. 600 p. ISBN:
9786074485646.
5. Pavón L, Jiménez MC, Garcés ME. Inmunología (molecular, celular y traslacional).
1° ed. Wolters Kluwer., 2016. 700 p. ISNB: 9788416004867.
6. Hoffman R, Benz EJ, Silberstein LE, Heslop HE, Wetz JI, et al. “Disorders of
phagocyte function” in Hematology: Basic Principles and Practice. 6th Ed.
Philadelphia: Elsevier. 2013. p. 656-72.

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 10