Extraemos ADN del hígado de pollo

Objetivo

En esta práctica realizaremos la extracción del ADN de células animales poniendo de

manifiesto su estructura fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el
empaquetamiento en el núcleo celular de larguísimas cadenas de esta molécula.

Tras la extracción se realizará una tinción específica del ADN obtenido.

Material necesario

- Tejido animal (hígado de pollo) - Licuadora - Embudo

- Trozo de gasa para filtrar - Detergente - Probeta
- Pipeta - Varilla de vidrio - Vaso de precipitados
- Alcohol 96º - Agua - Sal

Fundamento

El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado, unido a
proteínas para formar la cromatina. Así, para extraerlo será necesario homogeneizar el tejido
y romper las células para separar el núcleo, romper también la envoltura nuclear para liberar
su contenido, luego separar el ADN de las proteínas que lo protegen y, por último,
precipitarlo para extraerlo de la solución. Una vez realizado esto, el ADN aparecerá como un
agregado de fibras blanquecinas que se adhieren a la varilla de vidrio. Por último, se puede
situar sobre un porta, teñirlo con un colorante básico y observarlo al microscopio.

Procedimiento

1. Triturar en frío la muestra de hígado usando la batidora para

homogeneizar el tejido. Este procedimiento también rompe muchas
células liberando su contenido. Parecer ser más eficaz el empleo de
una batidora, con la que se obtiene una mezcla más homogénea y
fácil de filtrar después.

2. Añadir unos 50 ml de agua destilada o, en su defecto, agua mineral,

y remover suavemente pero mezclando a fondo.

3. Filtrar varias veces el resultado a través de un pedazo de tela. Un

pañuelo viejo de algodón va bien. Este filtrado es lento y difícil, pero
retendrá en el pañuelo restos de tejido.
4. Añadir al filtrado resultante un volumen igual de sal.

5. Añadir ahora 1 ml de detergente y remover suavemente,

mezclando bien pero evitando que se forme espuma.
El detergente completa la rotura de las membranas al disolver y
separar los lípidos de las mismas. También interviene en la
separación de las proteínas que rodean al ADN. Si es posible
volver a filtrar, se obtendrá una solución más limpia de restos.

6. Con los pasos anteriores hemos conseguido tener el ADN libre en

la disolución acuosa (la cual contendrá también diversos restos
tisulares y celulares en función de la bondad del filtrado). A continuación hay que separar el ADN
haciéndolo precipita.

7. Ahora se añaden unos 50 ml de

alcohol muy frío, teniendo cuidado de
hacerlo ladeando el tubo o vaso de
precipitados y dejando resbalar muy
lentamente el alcohol por la pared de
aquel para formar una capa sobre la
solución anterior. Es muy importante evitar
que se mezclen ambas soluciones, pues
será en la interfase donde precipitará el
ADN

8. El ADN irá apareciendo poco a poco en la interfase

agua-alcohol en forma de grumos blancos. Se
favorece la precipitación y recolección si se va
recogiendo mediante la varilla de vidrio, u otro
instrumento similar, introduciéndola ligeramente bajo
la interfase y haciéndola girar suavemente mientras
se extrae. Así se irán pegando en la varilla unas
hebras blancas que corresponden a miles de fibras de
ADN

9. Se puede ahora tomar una muestra del ADN recogido,

depositarla sobre un porta y teñir con azul de metileno
durante 1 a 3 minutos. Tras limpiar bien el porta, se
observa al microscopio.