PRACTICA N° 5

TÍTULO DE LA PRÁCTICA

IDENTIFICACIÓN DE LAS ESPECIES DEL GÉNERO Plasmodium

COMPETENCIAS

- Identificar a las especies Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum, en sus

diferentes estadios de desarrollo de la Fase Eritrocítica.
- Diferenciar los parásitos mediante el uso del método de la gota gruesa y frotis
sanguíneo.
- Manejar adecuadamente el Método de la Gota Gruesa y Frotis sanguíneo.

MATERIALES

De la Cátedra:
- Microscopios.
- Aceite de inmersión.
- Algodón.
- Colorante Giemsa.
- Agua tamponada.
- Láminas de sangre fijadas y coloreadas con Giemsa, conteniendo los estadios
parasitarios de Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum.

De los alumnos:
- 4 láminas porta-objetos nuevas.
- 2 Lancetas estériles.
- 1 Frasco de alcohol por grupo
- 2 Láminas de sangre fijadas y coloreadas con Plasmodium vivax y/o
Plasmodium falciparum.

PROCEDIMIENTO

Los parásitos del género Plasmodium habitan los hepatocitos y los eritrocitos del
hombre, ocasionándole la enfermedad de la Malaria, que es transmitida en la
naturaleza por dípteros del género Anopheles.
En su ciclo de vida requieren de dos hospederos importantes:

a) Hospedero Definitivo. Mosquito hembra del género Anopheles, donde el parásito

desarrolla el CICLO SEXUAL hasta la formación de los ESPOROZOITOS.

b) Hospedero Intermediario. Hombre, donde el parásito desarrolla su CICLO

ASEXUAL o ESQUIZOGONIA, que se realiza en dos fases:
- Fase Exo-eritrocítica: en el hígado.
- Fase Eritrocítica: en los hematíes.

IDENTIFICACION DE Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum:

Observar al microscopio con objetivo de inmersión algunos de los estadios
evolutivos que presentan en la fase eritrocítica de su ciclo asexual.

Plasmodium vivax: Agente etiológico de la Malaria Benigna.

a. Trofozoitos:
Jóvenes:
- Formas anulares y de tamaño relativamente grandes.
- Citoplasma de color azul que encierra una vacuola que no se colorea y que le
da el aspecto de anillo.
- Un núcleo pequeño de color rojo.
Medianos y Maduros:
- Formas irregulares, debido a su movimiento amiboideo.
- Citoplasma de color azul con granulaciones de coloración negruzco conocido
con el nombre de Pigmento Palúdico.
- Núcleo único de color rojo, de posición variable.
- Hematíe ligeramente agrandado, con gránulos de Schüffner de color rosado
(en frotis sanguíneo).

Trofozoito

Trofozoito joven
Trofozoito mediano

b. Esquizontes
Jóvenes y medianos
- Citoplasma de forma irregular con granulaciones de pigmento palúdico.
- Núcleo en proceso de división, de color rojo.
- Hematíe ligeramente agrandado, pálido y con gránulos de Schüffner (con
frotis sanguíneo).
Maduros:
- Citoplasma dividido de color azul y cada parte tiene su núcleo de color rojo;
de este modo se forman de 12 a 24 merozoitos.
- Granulaciones del pigmento palúdico de coloración negruzca, disperso entre
los merozoitos.
- Hematíe agrandado, pálido y con gránulos de Schüffner (en frotis sanguíneo).

Esquizonte maduro
c. Gametocitos:
Macrogametocito:
- Forma generalmente redondeada.
- Citoplasma abundante y homogéneo de color azul con gran cantidad de
pigmento palúdico.
- Un núcleo grande y compacto de color rojo.
- Hematíe ligeramente agrandado, pálido y con gránulos de Schüffner (en frotis
sanguíneo).
Microgametocito:
- Forma generalmente redondeada.
- Citoplasma abundante y homogéneo de color azul claro con gránulos de
pigmento palúdico en menor cantidad.
- Un núcleo grande, laxo, de color rosado.
- Hematíe ligeramente agrandado, pálido y con gránulos de Schüffner (en frotis
sanguíneo).

Plasmodium falciparum: Agente etiológico de la Malaria Maligna o Fiebre

Perniciosa.
Los parásitos invaden hematíes tanto jóvenes como maduros. Observe al parásito en
los siguientes estadios:

a. Trofozoitos jovenes:
- Son pequeños y adoptan formas anulares, algunos son observados en forma
de coma.
- Citoplasma de color azul, que encierra una vacuola que no se colorea y que le
da aspecto de anillo.
- 1 núcleo pequeño de color rojo.

* Los hematíes parasitados con Plasmodium falciparum pueden contener más

de un trofozoito, observándose por esta razón 2 ó más núcleos.

b. Gametocitos: Se caracterizan por su forma de media luna o banana.

 Macrogametocito:
- Forma de media luna con extremos puntiagudos.
- Citoplasma de color azul intenso.
- Núcleo grande y compacto, de color rojizo.
- Pigmento palúdico de color negruzco, agrupado alrededor del núcleo.
Microgametocito:
- Forma de banana, con entremos romos.
- Citoplasma de color azul claro.
- Núcleo grande y laxo, de color rosado.
- Pigmento palúdico de color negruzco, diseminado en el citoplasma del
gametocito.

RELACION HOSPEDERO-PARASITO:

El Plasmodium es un parásito apicomplexo intracelular, causa la enfermedad

conocida como paludismo o malaria, que se caracteriza por manifestarse con
escalofríos, fiebre y sudoración, que se repite a intervalos variables según la especie
de Plasmodium, con frecuencia evoluciona hacia la cronicidad y se acompaña de
anemia y esplenomegalia.

METODOS DE EXAMEN PARA EL DIAGNOSTICO DE

HEMOPARASITOS:
EXAMEN DE SANGRE: Es útil para el diagnóstico de la enfermedad de la
malaria. Estos exámenes se hacen con la sangre extraída del pulpejo del dedo medio
de la mano o de la vena, utilizando el Método de Frotis sanguíneo y/o el Método de
la Gota Gruesa.

- Con el Método de Frotis Sanguíneo, se observará a los trofozoitos,

esquizontes y gametocitos dentro de los hematíes.

- Con el Método de la Gota Gruesa, se los observará en mayor cantidad, pero

fuera de los hematíes, o sea completamente libres.
La fase de diagnóstico es la ERITROCITICA. Se utiliza el Método de la Gota Gruesa
y/o Frotis Sanguíneo, cuyas preparaciones deben ser coloreadas con Giemsa o
Wright.

Es recomendable que la toma de la muestra de sangre se realice cuando el paciente

se encuentre en el periodo febril.
Procedimiento para la obtención de la muestra:
- Sostener la mano del paciente, con la palma hacia abajo, seleccionar el tercer
dedo a partir del pulgar o el dedo índice (el dedo gordo del pie puede ser
utilizado en niños recién nacidos)
- Limpiar el dedo con una pieza o torunda de algodón ligeramente humedecido
con alcohol, utilizando golpes firmes para retirar suciedad y grasa de la yema del
dedo.
- secar el dedo con un algodón limpio y seco, utilizando golpes firmes para
estimular la circulación de la sangre.
- Pulsar el borde de la yema del dedo con una lanceta estéril y un movimiento
rápido, presionar suavemente el dedo para extraer la primera gota de sangre y
limpiar con una torunda de algodón seco. Asegúrese que ninguna hilacha de
algodón, que pueda mezclarse posteriormente con la sangre, permane3zca en el
dedo.
- Trabajando rápidamente y manipulando láminas completamente limpias
colectar la sangre de la siguiente forma:

a. Aplique suave presión al dedo para extraer una gota de sangre y colocarla
inmediatamente en contacto por el primer tercio externo de la superficie
de la lámina. El tamaño de ésta gota se aproxima al tamaño de una cabeza
de fósforo.
b. Presionar nuevamente el dedo y colectar una segunda gota de sangre más
pequeña que la primera en el centro de la lámina, para realizar el frotís.
c. Limpiar la sangre restante con una torunda de algodón humedecido en
alcohol e indicar al paciente que presione ésta torunda contra el lugar de
la punción por 5 minutos

METODO DE LA GOTA GRUESA.-

Una vez obtenida la muestra, utilizando uno de los ángulos de una segunda lámina
(lámina auxiliar) esparcir rápidamente la gota de sangre y extenderla
uniformemente con el fin de desfibrinarla, hasta formar una gota gruesa de 1 cm
de diámetro. La sangre no debe ser excesivamente revuelta, es suficiente con 3 a 6
movimientos. De preferencia, realizar el homogenizado de la muestra en una sola
dirección, en forma concéntrica ( de adentro hacia fuera o viceversa)

FROTIS SANGUINEO
Es útil para estudiar las características de los hematíes y de los parásitos
sometidos a coloración.
Colocar una segunda gota de menor tamaño en el centro de la lámina.
Utilizando la misma lámina auxiliar, ponerlo en contacto con la superficie de la
lámina que contiene la gota central y hacerla correr firmemente a lo largo de su
borde en un ángulo de 45 º.Asegúrese de que ocurra un contacto parejo con la
superficie de la lamina todo el tiempo que la sangre esta siendo esparciada, de tal
manera que el frotís sea homogéneo y fino. Siempre manipular las láminas por los
bordes o por una esquina.

SECADO DE LAS MUESTRAS

- Dejar secar a temperatura ambiente.
- Luego del secado el frotís, rotular con lápiz de carbón suave, escribiendo en
la parte más gruesa el código; número y fecha de la muestra.
- Dejar secar la lámina con la gota gruesa en la superficie plana y protegida
de polvo, calor e insectos.
Coloración con Giemsa:
Asegúrese que la gota gruesa y el frotis estén secos antes de iniciar el proceso de
tinción.
a. Fijar el frotis sumergiendo en metanol, por 3 segundos y déjelo secar
b. Cubrirla con colorante Giemsa diluido (2 gotas de colorante de giemsa
madre diluido en 1 ml de agua tamponada).
c. Dejar colorear por 10 minutos
d. Lavar con agua tamponada y dejar secar a temperatura ambiente para
observar al microscopio.

RESULTADOS
 CUESTIONARIO

1. Esquematice en forma explicativa el Ciclo Vital de los parásitos del Género

Plasmodium.
2. Para el diagnóstico de la malaria ¿Por qué se recomienda la toma de muestra de
sangre durante el periodo febril?

Porque durante este periodo hay mayor proliferación y actividad de los

trofozoitos, los que originan los síntomas característicos como la fiebre lo que
también permite la diferenciación entre las cuatro especies.

3. Mencione a los principales vectores de la malaria en la Amazonía Peruana.

Principales vectores en la Amazonia Peruana.

 A. benarrochi
 A. oswaldol
 A. darlingi
 A. rangeli

Características de los vectores primarios y secundarios del Perú

 VECTOR ESPECIE Meses de Mes Horario
abundancia pico picada
A. pseudopunctipennis Feb-Jun Abr 18-24 h
04-06 h
A. albimanus Feb-Jun May 20-22 h
PRINCIPALES A. darlingi Mar-Jun Abr 22-01 h
A. benarrochi Nov-Abr Mar 18-22 h
05-06 h
A. calderoni Mar-Ago Jun 19-22 h
A. dunhami Ene-Jun Abr 18-22 h
A. rangeli Ene-Jun Abr 18-24 h
SECUNDARIOS 05-06 h
A. nuneztovari Ene-Jun Mar 24-04 h
A. evansae Dic-Jul Mar 18-23 h
A. oswaldol Ene-Jun Mar 05-06 h

4. Mencione diferencias entre Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum que

encontró en las observaciones hechas durante la práctica.

Características P. Vivax P. Falciparum

Glóbulo rojo. Agrandado, palido, con Pequeños con gránulos de
Aspecto general gránulos de Schüffner Maurer
Formas parasitarias.
Trofozoito juvenil Grandes, uninucleados. Pequeños. Con frecuencia
(anillos) Por lo general uno por binucleados o varios en el
eritrocito eritrocito
Trofozoito maduro Grande, ameboide Rara vez visto en sangre
periférica
Número de merozoitos 12-14 8-32
Gametocitos Esféricos, grandes Semilunares o en banana

SUGERENCIAS

 Antes de empezar las prácticas el alumno debe seguir cuidadosamente las

indicaciones dadas por el profesor para evitar accidentes que pueden frustrar
la práctica.
 Evitar trasladarse de sus lugares a otras mesas de trabajo.
 Llevar sus materiales completos.
 Asistir con mandil limpio.
 Dejar ordenado y aseado el laboratorio.
 Es necesario contar con muy buenos instrumentos de laboratorio para
obtener resultados óptimos.
 Manipular adecuadamente las muestras de heces para evitar contaminar.

BIBLIOGRAFÍA

 ATIAS, A. 2007. Parasitología Médica. Quinta Reimpresión. Publicaciones

Mediterráneo. Chile.
  BEAVER, P. y col. 2003. Parasitología Clínica de Craig y Faust. 3° ed.
Editorial Mason. Doyma. México.

 ELLIOT, A.; CACERES, I. 1990. Parasitología Médica del Perú. 2° ed.

Martegraf. Lima. Perú.

 MANUAL DE TÉCNICAS BÁSICAS PARA UN LABORATORIO DE SALUD.

Organización Panamericana de la Salud. Publicación Científica Nº 439.

FACULTAD DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

BROMATOLOGÍA Y NUTRICIÓN HUMANA

Parasitología

Práctica Nº 5 “Plasmodium”
 Códigos
 2096619
 2096642

 Nombres y Apellidos:
  Joe Alberto del Aguila Heller.
 Erika Francis Perea Alva.

 Docente:

Blga. Mirle Cachique Pinche.

 Semestre académico:

I semestre-2011

 Fecha de ejecución :

Miércoles 8 de junio

 Fecha de presentación:

Miércoles 15 de junio