ULTIMA

PRÁCTICA

DETERMINACIÓN DE BACTERIAS Y
HONGOS DEL SUELO

1. INTRODUCCION:

En este presente informe tiene como objetivo fundamental de la práctica de laboratorio, es el

de dar a conocer y comprender los procedimientos y técnicas propias para el análisis
microbiológico del suelo, teniendo como elementos fundamentales el de adquirir
conocimientos y comprensión de las técnicas de recuento microbiano y hongos, los métodos y
principios para el manejo de muestras con diluciones, además de la determinación de
microorganismos patógenos del suelo y su importancia.
Microbiológico al suelo ya que nos permiten determinar la cargar microbiana de grupos
específicos de microorganismos patógenos del suelo.

El análisis de bacterias y hongos del suelo, recuentos microbianos: recuentos viables(recuentos

en placa en superficie y número más probable) y determinación de microorganismos patógenos
del suelo.
Además de la realización del análisis microbiológico del suelo, es necesario comprender el
metabolismo microbiano y la caraterizacion de los mismos, ya que de este depende su correcta
identificación y conocimiento de actividad en el suelo, es necesario entonces conocer sus
características morfología, fisiológicas, metabólicas, ecologías y genética.
Para llevar a cabo lo propuesto anteriormente, es necesario realizar la identificación los
microorganismos, para lo cual es indispensable, prevenir cultivarlo y aislarlo.

2. Objetivos

 Determinar el número de unidad formadora de colonia en el suelo.

 Conocer y comprender los procedimiento y técnicas para el análisis microbiología del
suelo
 Conocer y comprender las características morfológicas de bacterias y hongos
  Identificar diferencias entre la flora microbiana del suelo.

 Identificar las bacterias presentes en el suelo y comparar sus requerimientos

nutricionales con el contenido del medio cultivo en el que fueron incubados.

3. Fundamento
MICROORGANISMOS DEL SUELO

Bacterias: constituyen el grupo más diverso de microorganismos del suelo, hay benéficos y
fitopatógenos. Los actinomicetos pertenecen a este grupo. Hongos: los hay de vida libre y otros como
las micorrizas que viven en forma simbiótica en las raíces de plantas. Muchos hongos son importantes
en los procesos de descomposición de la materia orgánica. Además de los hongos benéficos, también se
pueden aislar del suelo los hongos fitopatógenos. Las levaduras pertenecen a este grupo. Protozoarios:
requieren de oxígeno por lo cual se encuentran cerca de la superficie del suelo. Se nutren de algas y
bacterias del suelo. Micro algas: se encuentran cerca de la superficie del suelo. Son fuente de nutrientes
para protozoarios, hongos, lombrices de tierra y nematodos. (José, 2015)

En la naturaleza los microorganismos se encuentran formando comunidades de

diversos géneros y especies, por lo que es casi imposible encontrar un hábitat con un solo
género de microorganismos. Por lo que para los estudios en que se requiera el conocimiento
de un solo organismo de esa comunidad (estudio autoecológico), es necesario el aislamiento
del mismo. Obviamente se debe tener en mente que muchas reacciones fisiológicas,
bioquímicas y hasta algunas morfológicas, requieren de la presencia del resto de los
integrantes de la comunidad para que se expresen (estudios sinecológicos).

Se han empleado una serie de métodos para la propagación de los microorganismos a

partir de células individuales. El cultivo en caja de Petri es un sistema sencillo y
rápido para el aislamiento de los microorganismos de una mezcla, permitiendo que a
partir de una célula o un conglomerado de células del mismo género y especie, se forme una
colonia (clona), que sea visible a simple vista. (Dary, 2012)

Los métodos más usados son:

  método de la estría cruzada
 el método del vaciado en placa.

El método de la estría cruzada, es un método cualitativo que permite trabajar un gran

número de muestras en corto tiempo y consiste en tomar una muestra con un asa
previamente esterilizada y colocarla sobre una superficie del medio de cultivo sólido que
se encuentra en una caja de Petri, Posteriormente se trazan una serie de estrías pegadas
al borde de la caja, esterilizando el asa al final de cada serie. El método de vaciado
en placa, es un método cuantitativo, ya que además de aislar a los microorganismos, en un
cultivo puro (formado por un solo género y especie), nos permite contar el número
de organismos presentes en esa muestra. Esto es posible ya que a partir de una
muestra perfectamente medida se realizan una serie de diluciones, lo que nos da la oportunidad
de conocer la cantidad exacta de muestra en cada tubo de dilución, si después de sembrar la
muestra en nuestro medio conocemos el número de colonias que crecieron, podemos
multiplicar este por la inversa de la dilución y por la inversa de la alícuota que
sembramos, dándonos como resultado el número de unidades formadoras de colonias
(UFC) por unidad de volumen o masa de la muestra original.
Para el trabajo con ambos procedimientos se requiere procesar las muestras bajo
condiciones de esterilidad con objeto de no incorporar microorganismos de otra
fuente extraña a la que estamos analizando.

3.1. Importancias de los microorganismos del suelo

Los microorganismos del suelo contribuyen al mantenimiento de la fertilidad química, física y biológica

del suelo. Transforman nutrientes inorgánicos, que de otra forma no pueden ser absorbidos por la planta;

además favorecen la descomposición y mineralización de la materia orgánica. (D. Hervé, 1994)

 3.2. Recolección de muestras
Una muestra es una fracción representativa del área total de suelo que se desea estudiar.

¿Cuándo tomar muestras de suelo?

• Cuando se desee cuantificar la población microbiológica.

• Para confirmar la presencia o ausencia de fitopatógenos que pueden afectar un cultivo. O bien la

presencia o ausencia de microrganismos benéficos.

• Para identificar y aislar microrganismos (benéficos y patógenos) del suelo.

• Para obtener curvas de mineralización de un terreno.

• Cuando se desee conocer la actividad enzimática del suelo.

• Para conocer el efecto de prácticas agronómicas sobre la población de microorganismos.

• Para evaluar la calidad de los suelos.

Condiciones para la toma de muestras

• Seleccionar las áreas características o representativas del estudio que se quiere realizar.

• Levantar un croquis con las condiciones del terreno (planos, pendientes, cercanías a ríos, con o sin

cultivo, áreas de bosque, áreas encharcadas, drenajes, etc).

III. Materiales y Métodos

3.3. Materiales

 Mechero
 Muestra de Suelo.
 Horno o incubadora
 5 pipetas de 1 mL estériles
 Frasco de dilución de 90mL
 Asa bacteriológica
 con agua destilada estéril
 Varilla acodada
 5 tubos con 9mL de agua
 Alcohol
destilada estéril.
 Agua destilada
 Metanol
 Capsulas de porcelana
 Succionador para pipetas
 Pinzas
 Cajas Petri con medio
de cultivo para hongos y
levaduras (Saboraud)
3.2. Procedimiento

a) Método de la disolución.
1. Pesar 10g de suelo y colocarlos en condiciones de esterilidad en una botella
de dilución conteniendo 90mL de agua destilada estéril.
2. Por medio de una pipeta de vidrio, tomar 1mL del sobrenadante de la botella de
dilución, teniendo cuidado de no arrastrar sedimento y vaciar en condiciones de
esterilidad a un tubo de ensaye con 9mL de agua destilada estéril. Agitar
perfectamente para homogenizar la muestra (figura 1).
3. A partir del tubo anterior, tomar 1 mL y vaciarlo a otro tubo de ensaye con 9 mL de
agua destilada estéril, agitar perfectamente.
4. Repita el punto tres, tomando siempre 1mL del último tubo inoculado y vacíelo a
un tubo nuevo con 9mL de agua destilada estéril (figura 1).
5. Al terminar la serie de tubos, tomar de los tres últimos tubos 0.1mL y colocarlo en
el centro de tres cajas de Petri perfectamente marcadas para su identificación.
6. Tomar una varilla acodada esterilizarla flameando con alcohol, y una vez fría,
distribuir la muestra sobre toda la superficie de la caja, girando ésta y moviendo la
varilla en un sentido.
7. Colocar las cajas en una canastilla e incubarlas a 35 – 37 °C durante 24 h.

Figura 1. Procedimiento para la preparación de dilución seriada.

b) Método de estría cruzada.

1. A partir del frasco de dilución en que se realizó la primera dilución del

experimento anterior, tomar una asada y colocarla en una porción de
la caja, trazando una serie de estrías que cubran aproximadamente 1
cm a partir de la orilla de la caja.
2. Flamear el asa, dejar enfriar y trazar una nueva serie de estrías a partir
de un extremo de las anteriores.
3. Repetir el paso anterior durante dos series de estrías.
4. Trazar la última serie de estrías abriendo esta hacia el centro de la caja.
5. Incubar a 35 – 37°C durante 24 - 48 h.
6. Repetir los pasos anteriores para las diluciones 10-5, 10-6 y 10-7.

Figura 2. Procedimiento para la preparación de estrías cruzadas.

Transcurrido el tiempo de incubación para las cajas utilizadas en ambos

métodos, haga sus observaciones de morfología colonial.
 4. Resultados

Tabla 01: Descripcion de las placas para Homgos

A 10-4 A 10-5 A 10-6

No hubo crecimiento No hubo crecimiento No hubo crecimiento

B 10-4 B 10-5 B 10-6

No hubo crecimiento Si hubo crecimiento de un No hubo crecimiento
hongo

Tabla 01: Descripcion de las placas para Homgos

A 10-4 A 10-5 A 10-6

No hubo crecimiento No hubo crecimiento No hubo crecimiento

B 10-4 B 10-5 B 10-6

No hubo crecimiento No hubo crecimiento No hubo crecimiento

V. Discusiones
En la tierra analisada se debieron ver hongos u bacterias en la gran mayoría, pero como se
pudo notar en algunas placas no hubo crecimiento solo en una placa se noto que hubo
crecimiento de algún hongo

VI. Conclusiones
Podemos llegar a la conclusión de que el suelo de muestreo no tiene microorganismos que
puedan descomponer algunas sustancias, por lo cual no puede descomponer algunas
sustancias del suelo.

VII. Cuestionario

1. Desde el punto de vista práctico, ¿qué ventajas y desventajas encontró al utilizar

los dos métodos de aislamiento?
La ventaja es que entre mas diluciones mayor sertesa de los resultados
2. ¿Qué características generales tienen las colonias bacterianas que las distinguen de
los hongos?
La célula bacteriana tiene una membrana de célula que contiene citoplasma
3. ¿Por qué reportamos los resultados como UFC/mL ó g en la determinación
cuantitativa de microorganismos en lugar de usar el término células/mL ó g?
Para contabilizar las colonias de los diferentes análisis que se puedehacer, de esta forma es
mas útil, en trabajos de campo.

VIII Bibliografia

Bibliografía
D. Hervé, D. G. (1994). EL ESTADO MICROBIOLOGIC0 DEL SUELO,. Dinamicas ,
http://horizon.documentation.ird.fr/exl-
doc/pleins_textes/pleins_textes_7/b_fdi_03_01/41716.pdf.

Dary, R. (2012). ANALISIS MICROBIOLOGICO DE SUELOS. SAN JOSE DE CUCUTA:

www.monografias.com/docs/Análisis-Microbiológico-Del-Suelo-PKZJM8SYBY.

José, S. (2015). ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE SUELOS. Costa Rica:

http://www.mag.go.cr/bibliotecavirtual/Av-1820.PDF.