BIOQUÍMICA

ANÁLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO DEL GLUCÓGENO

𝑷𝒂𝒖𝒍𝒂 𝑨𝒓𝒅𝒊𝒍𝒂𝒂,𝒃 ,𝑱𝒖𝒂𝒏 𝑭𝒊𝒈𝒖𝒆𝒓𝒐𝒂𝒂,𝒃 ,𝑨𝒏𝒅𝒓é𝒔 𝑪𝒂𝒓𝒅𝒐𝒛𝒐𝒂,𝒃
a
Facultad de Ciencias y Educación. Licenciatura en química, Bioquímica
b Universidad Distrital Francisco José de Caldas

21 de mayo de 2018

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El glucógeno es la reserva esencial de
[C] Fd ABS
glucosa en los animales superiores, se
Muestra mg/dL
sintetiza en mayor medida en el citoplasma del
hepatocito y miocito por la acción de dos Blanco - - 0.174
enzimas, la glucógeno sintasa y la glucosil E1 2.5 - 0.307
𝛼 (4 → 6) transferasa sobre un precursor de
glucógeno (conformado por 8 residuos de E2 5 - 0.455
glucosa) unido a la glucogenina, además de E3 10 - 0.689
permite la formación de ramificaciones, que le H H+ 268.3 1/100 0.135
dan al glucógeno un carácter compacto,
M H+ 30.31 1/5 0.305
permitiéndole ocupar una menor cantidad de
espacio. H OH- 948.3 1/100 0.477
Cuantificación del Glucógeno. M OH- 28.62 1/10 0.144
El tejido se somete tanto a hidrólisis ácida MP 89.06 1/10 0.448
como básica, en la hidrólisis ácida se liberan
las moléculas de glucógeno, además de otras Tabla 3 Resultados experimentales de concentración y
absorbancia para muestras patrón, muestras por
sustancias como proteínas que son
hidrolisis ácida, básica y muestra problema.
precipitadas por acción del ácido
tricloroacético. Hígado por hidrólisis ácida,
El glucógeno recuperado se hidroliza gracias
a la presencia de ácido sulfúrico que al
𝐴𝑏𝑠 = 0.0503 ∗ [𝐶]
deshidratarse forman furfurales, que, al
reaccionar con la antrona, produce un 𝐴𝑏𝑠
[𝐶] =
cromóforo, el cual es leído a 625nm 0.0503
0.135
Concentración Absorbancia [𝐶] = = 2.683 × 100
0.0503
(mg/dL) = 𝟐𝟔𝟖. 𝟑𝒎𝒈/𝒅𝑳
blanco 0,174 1𝑔
2,5 0,307 ×
1000𝑚𝑔
5 0,455 = 𝟎. 𝟐𝟔𝟖𝒈/𝒅𝑳
10 0,689
Tabla 1 Curva de calibración para cuantificación de Músculo por hidrólisis ácida,
glucógeno.
𝐴𝑏𝑠 = 0.0503 ∗ [𝐶]
Curva de calibración 𝐴𝑏𝑠
[𝐶] =
Glucógeno 0.0503
0.305
1
[𝐶] = = 6.063 × 5
y = 0.0503x + 0.19
0.0503
R² = 0.9963
= 𝟑𝟎. 𝟑𝟏𝒎𝒈/𝒅𝑳
0.5
1𝑔
×
0 1000𝑚𝑔
0 5 10 15 = 𝟎. 𝟎𝟑𝟎𝟑𝒈/𝒅𝑳
Tabla 2 Regresión lineal curva de calibración

𝐴𝑏𝑠 = 0.053 ∗ 𝑏 ∗ [𝐶]

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Hígado por hidrólisis básica, La muestra problema presenta su

concentración dentro de los valores
𝐴𝑏𝑠 = 0.0503 ∗ [𝐶] normales de glucógeno hepático,
𝐴𝑏𝑠 aumentado para glucógeno muscular. Solo
[𝐶] =
0.0503 con los resultados cualitativos se podría
0.477 afirmar bien si se trata de glucógeno,
[𝐶] = = 9.483 × 100
0.0503 amilosa, amilo pectina o almidón.
= 𝟗𝟒𝟖. 𝟑𝒎𝒈/𝒅𝑳 Los valores de glucógeno cuantificado por
1𝑔 hidrolisis acida presentan valores por
×
1000𝑚𝑔 encima de los niveles normales de
= 𝟎. 𝟗𝟒𝟖𝒈/𝒅𝑳 glucógeno hepático y muscular, esto puede
ser debido a que hay un problema en la
Músculo por hidrólisis básica,
actividad o un déficit de las enzimas β-
𝐴𝑏𝑠 = 0.0503 ∗ [𝐶] amilasa y amilo-1,6-glucosidasa por tanto
𝐴𝑏𝑠 la degradación completa del glucógeno no
[𝐶] = se está dando y se presentan los valores
0.0503
0.144 aumentados de este en hígado y musculo.
[𝐶] = = 2.862 × 10 La hidrólisis ácida del glucógeno libera
0.0503
= 𝟐𝟖. 𝟔𝟐𝒎𝒈/𝒅𝑳 glucosa cuantitativamente. El glucógeno
1𝑔 también es por la -amilasa y forma
× dextrinas límite y maltosa; para lograr la
1000𝑚𝑔
= 𝟎. 𝟎𝟐𝟖𝟔𝒈/𝒅𝑳 degradación enzimática completa también
se necesita la amilo-1,6-glucosidasa.[1]
Muestra Problema, Los valores cuantificados de glucógeno
hepático y muscular por hidrolisis acida se
𝐴𝑏𝑠 = 0.0503 ∗ [𝐶] encuentran dentro de los niveles normales
𝐴𝑏𝑠 o de referencia de estos.
[𝐶] =
0.0503
0.448 Análisis Cualitativo de Muestra
[𝐶] = = 8.906 × 10
0.0503 Problema (MP)
= 𝟖𝟗. 𝟎𝟔𝒎𝒈/𝒅𝑳
1𝑔 Para esta determinación se contó con una
×
1000𝑚𝑔 solución estándar de amilopectina de
= 𝟎. 𝟎𝟖𝟗𝟎𝒈/𝒅𝑳 1mg/1,5 mL (0,066g%) y una muestra
problema (MP) de las cuales se sacaron 0,4
Teniendo en cuenta que los valores mL y se adiciono 1,1 mL de solución
normales de glucógeno en hígado oscilan temperada (CaCl2-yodo-yoduro) en un
entre 6 a 10 mg por cada 100 mg de baño de hielo hasta aparición de color y
hígado, en los 1,008 g de hígado debería centrifugando para aislar el líquido, el cual
haber entre 60,8 y 100,8 mg de glucógeno mediante UV-Visible se realizo el barrido
presentes. En el musculo, los valores de espectral de muestras y patrones en un
glucógeno se encuentran entre 1 a 2 mg rango de 380-650nm con el fin de
por cada 100 mg de musculo. En los 1,042 determinar las longitudes de onda de
g de hígado pesados debería haber entre máxima absorción.
10,84 y 20,84 mg de glucógeno presentes. A continuación, en la tabla 4 se presenta
una comparación de picos máximo entre

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los distintos estándares y la muestra  El yodo no se fija a la estructura de

problema: la celulosa, por lo que se ve una
solución amarillo claro al hacer la
prueba de Lugol y la solución
temperada.
 La celulosa se compone de
Sustancia λmáx. A unidades de β-D glucopiranosa
(nm) unidas por enlaces β(1→4) para
Patrón 407 2,890 formar cadenas largas y rectas que
Glucógeno se refuerzan unas a otras por
(1,6mg/2mL) puentes de hidrógeno de los grupos
Patrón 392 2,979 OH formando una estructura
Almidón (31,8 fibrosa y firme que impide la
mg/1,5mL) infiltración de moléculas de agua
(1/2) y, por tanto, también el yodo, lo
Patrón 392 2,864 que puede explicar la ausencia del
Amilopectina color azul característico. [2]
(1mg/1,5mL)
Patrón 389 2,904 Conociendo esta información se puede
Celulosa calcular la concentración del problema
(8mg/dL) basándose en el patrón aplicando la ley
Patrón 392 2,967 de Beer:
Dextrina
(5,2mg/1,5mL) 𝐴 = εBC
(1/2)
Patrón 407 2,900 2,904 𝑑𝐿
ε= = 0,363
Dextrina 8𝑚𝑔 𝑚𝑔 ∗ 𝑐𝑚
∗ 1𝑐𝑚
(5mg/1,5mL) 𝑑𝐿
MP 389 2,778
Tabla 4. Comparación máximos de absorción patrones
y muestra problema. 2,778
𝐶𝑀𝑃 =
𝑑𝐿
Entonces teniendo en cuenta los valores 0,363 𝑚𝑔 ∗ 𝑐𝑚 ∗ 1𝑐𝑚
obtenidos se puede afirmar que la muestra
problema es una solución de celulosa y a = 𝟕, 𝟔𝟓𝟐 𝒎𝒈/𝒅𝑳
que su longitud de máxima absorción
coincide con el patrón de referencia, el
valor de A indica que se encontraba diluida
con respecto al patrón. Bibliografía
La suposición se puede validar basados en [1] Delgado, B. I. (s.f.). Reacciones de los
las siguientes observaciones: carbohidratos. Obtenido de
 La celulosa es insoluble en agua http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/m
oodle/pluginfile.php/45190/mod_resourc
por lo que antes de hacer de la e/content/0/REACCIONES_DE_LOS_C
prueba de yodo fue necesario agitar ARBOHIDRATOS-2008.pdf
el tubo un poco para [2] Rivera JMTAGPMDBGROLCTL.
homogeneizar. BIOQUIMICA ESTRUCTURAL:
Conceptos y Tests [Internet]. 2nd ed.
Madrid: EDITORIAL TÉBAR; 2014. 594

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dr/Downloads/dlscrib.com_bioquiacutemi
ca-estructural-conceptos-y-tests-2a-ed.pdf

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