RESUMEN:

El urocultivo es el análisis que se realiza a la orina para determinar con exactitud cuál es
el agente microbiano que está causando una infección en el organismo para luego de tener
un diagnóstico el paciente pueda seguir un tratamiento para eliminar microorganismos
patógenos para el ser humano. Por ello en la siguiente practica el alumno con los
conocimientos ya adquiridos realizó un urocultivo con los diferentes agares, además la
identificación de las bacterias desarrolladas en el medio de cultivo.
PALABRAS CLAVE: Urocultivo, orina, identificación
INTRODUCCION

El cultivo de orina se realiza para cuantificar el número de bacterias por ml y se expresa

como unidades formadoras de colonias/ml (UFC/ml), cada UFC en el cultivo representa
una bacteria viable en la muestra, la técnica de cultivo cuantitativo más utilizada es la
siembra con asa calibrada, que permite depositar un volumen determinado de orina sobre
la superficie del medio de cultivo y las asas calibradas utilizadas son las de plástico
desechables que obtienen un volumen fijo de muestra, si se sigue una correcta técnica de
siembra y el volumen obtenido con el asa es homogéneamente distribuido en la superficie
del medio de cultivo, el recuento de colonias sigue la aproximación normal en un recuento
de 100 colonias, utilizando un asa de 0,001 ml, la cifra real es de 100 ± 20 ×1.000 UFC/ml
(p = 0,05).

Los medios de cultivo para orina deben permitir el crecimiento de la mayoría de los
uropatógenos: uno selectivo y diferencial, como agar McConkey o eosina azul de
metileno (EMB), que permiten el crecimiento de Enterobacteriaceae y bacilos
gramnegativos no fermentadores, y un medio de agar sangre para grampositivos y
levaduras, el agar CLED (cistina-lactosa deficiente en electrolitos), un medio diferencial
no selectivo que permite el crecimiento de bacterias gramnegativas, grampositivas y
levaduras e inhibe el fenómeno de swarming de Proteus spp.

El examen microscópico permite la observación de leucocitos en orina y se realiza

mediante la centrifugación, las pruebas rápidas de diagnóstico permiten realizar de forma
rápida un diagnóstico presuntivo de ITU estas incluyen técnicas microscópicas,
enzimáticas, colorimétricas etc. El examen microscópico con tinción de Gram es el
método más simple, más rápido, más barato y probablemente más fiable para identificar
muestras de orina con recuentos bacterianos, así, la visualización de cocos grampositivos
obligará a cubrir fundamentalmente enterococo; por otro lado, si sólo se observan bacilos
gramnegativos, el tratamiento antibiótico puede realizarse con antibióticos con actividad
frente a los mismos, cubriendo también Pseudomonas aeruginosa, tales como aztreonam
o ceftazidima y/o amikacina.

Las pruebas enzimáticas más frecuentemente utilizadas para la detección de bacteriuria o

piuria se comercializan en tiras reactivas e incluyen la detección de nitritos (prueba de
Griess), que es una medida indirecta de la presencia de bacterias en orina, y esterasa
leucocitaria, que determina la presencia de piuria. Estas pruebas son fáciles de realizar,
rápidas y baratas, aunque presentan una sensibilidad muy variable según el tipo de
población estudiada, en general inferior al 80%, y no deben usarse como único método
de detección. Los factores que contribuyen a esta baja sensibilidad incluyen: baja
concentración de nitratos en orina (por bajos recuentos bacterianos); ITU por bacterias
que no reducen los nitratos (Enterococcus spp., Acinetobacter spp., levaduras, etc.);
ausencia de leucocituria, como sucede en la bacteriuria asintomática del embarazo;
presencia de sustancias que interfieren con la reacción, e interpretaciones erróneas de la
lectura.

MATERIALES:

•Agar CLED
•Agar MacConkey
•Agar EMB
•Asas calibradas
•Agares para pruebas bioquímicas (citrato, urea, TSI,LIA,SIM)
•Tubos
•Portaobjetos
•Cubreobjetos
•Muestra de orina contaminada

METODOS:

 Una vez recolectada la orina se inició con el análisis macroscópico en el cual se

observó el color, densidad, pH, olor, cabe recalcar que para la densidad y el pH se
utilizaron unas tiras.
 Una vez terminado el análisis macroscópico, se inició con el análisis microscópico
en el cual la orina se dividió en dos partes, una para el sedimento y la otra para
sembrarlo en todos los agares. Para poder obtener el sedimento se la centrifugó
por 10 minutos a 3000 revoluciones, luego se tomó una gota del sedimento y se
lo observó a 40X, esto nos permitió observar hematíes, bacterias, levaduras, etc.
 Con la otra porción de orina se realizó una tinción gram esto nos ayudó a observar
la morfología y el número aproximado de bacterias. Luego se sembró con el asa
calibrada haciendo una inoculación horizontal y luego estrías alrededor del centro
en el agar CLEC, MacConkey y EMB y se lo incubó por 24 a 37C.
 Luego de ello, se realizó tinción gram del agar CLED y en base a los resultados
obtenidos se hicieron pruebas iniciales en los cocos gram + ya que era
contaminación y se realizaron pruebas bioquímicas para los bacilos gram – para
la identificación de la bacteria.
RESULTADOS

El día lunes 07de mayo del 2018 se realizó un sembrado de la muestra de la orina en los
agares MacConkey, EMB y CLED, luego se los llevo a la estufa y se incubó a 37°C por
24 horas, luego se realizó la medición de pH en la orina:

Figura 1
Además, se realizó una prueba de la densidad de la orina:

Figura 2
Se realizó una tinción de Gram y en fresco del sedimentado de la orina dando lo
siguiente:
 Figura 3 Figura 4

Luego, el martes 08 de mayo del 2018 se observó el crecimiento bacteriano de los

agares antes mencionados dando un resultado:

Figura 5
Además, en ese mismo día se procedió a realizar una tinción Gram de las colonias de
color rosadas, las colonias verdes y grises transparentes se las realizo el día miércoles
09 de mayo del 2018:

Figura 6 Figura 7
Figura 8
El martes 08 de mayo del 2018 se realizaron pruebas iniciales como la catalasa de la
figura 6 y 7 dando lo siguiente:

Figura 9 Figura 10
El día miércoles 09 de mayo del 2018 se realizaron pruebas bioquímicas y se lo reviso
el día jueves 10 de mayo del 2018 dando lo siguiente:

Figura 11
DISCUSIÓN
En la figura 1 se observa que el pH de la orina es de 7 lo cual significa que esta estable,
sin problemas de acidosis o alcalosis.
En la figura 2 se observa que en las pruebas de densidad de la orina salen negativas ya
que en la tira se puede observar en los colores salen negativos para nitrilos bilirrubina,
glucosa, proteínas entre otras.
En la figura 3 representa el examen en fresco del sedimentado resultado de la
centrifugación del mismo, se observa hematíes y leucocitos.
En la figura 4 representa la tinción de Gram del sedimentado de la orina, se observa que
la tinción realizada no se pudo ver bien las bacterias, más parece que se tiño el
sedimentado, lo cual se esperó hasta el día siguiente a que hayan crecido bacterias en los
agares mencionados anteriormente.
En la figura 5 representa el agar CLED, se puede observar crecimiento bacteriano, la
colonia rosada y la colonia verde, al realizar la tinción de Gram se observaron cocos Gram
positivos lo cular representan contaminación en el agar, sin embargo, una colonia gris
mucoide al realizar una tinción de Gram se observó bacilos Gram negativos, se procedió
hacer pruebas bioquímicas posteriormente
En la figura 6 representa una tinción de Gram de la colonia rosada (contaminación del
agar CLED), se observó cocos Gram positivos
En la figura 7 representa una tinción de Gram de la colonia verde (contaminación del
agar CLED), se observó cocos Gram positivos
En la figura 8 representa una tinción de Gram de la colonia gris transparente mucoide,
se observó bacilos Gram negativos
En la figura 9 representa el resultado de la prueba de la catalasa de la colonia rosada
(contaminación del agar CLED) de la cual la prueba salió negativa (Streptococcus
catalasa negativa)
En la figura 10 representa el resultado de la prueba de la catalasa de la colonia verde
(contaminación del agar CLED) de la cual la prueba salió positiva (Staphylococcus
catalasa positiva)
En la figura 11 son el resultado de las pruebas bioquímicas de la colonia gris transparente
mucoide que creció en el agar CLED, dando los siguientes resultados:
 Agar TSI: Se observa en el tubo, el pico y el fondo son de color rojo k/k, no hay
producción de gas ni de Ácido sulfhídrico
 Agar Citrato: Es negativa debido a que el color del citrato(verde) no cambio a
color azul ya que la bacteria no utiliza el citrato en forma de hidratos de carbono
en el mismo agar.
 Agar Urea: Es negativa ya que la bacteria no hidroliza la urea
 Agar SIM: Es negativa porque en el agar no presenta turbidez en el sitio en donde
se hiso la punción; la prueba del indol no se lo pudo hacer
 Agar LIA: Presenta el pico color medio fuxia K y el fondo igual, no produce gas
ni Ácido Sulfhídrico, lo cual resultaría positivo ya que la bacteria descarboxila la
lisina.
De todo lo mencionado anteriormente el bacilo Gram negativo, se sospecha que se trata
de Alkalescens dispar; sin embargo, los agares MacConkey y EMB no hubo crecimiento
bacteriano alguno.

CONCLUSIONES
  La forma en que se introduce el asa en el contenedor para obtener la muestra puede
originar diferencias importantes, de hasta el 100%, en el volumen de muestra
examinado

 La técnica de cultivo con asa calibrada puede resultar más rápida, barata y fácil
de realizar que cualquiera de las técnicas automatizadas de detección disponibles

 El empleo de diferentes técnicas de laboratorio se puede conocer si existe

infección bacteriana en la orina así como el tipo de germen implicado en ella.

 Existen diferentes métodos para analizar una muestra de orina como: Tira
reactiva de orina (Examen microscópico) y sedimento de orina (urocultivo)
determinar el número de colonias en la superficie del medio de cultivo y el
número de UFC/ml multiplicando el número de colonias por el factor de dilución
(102 para un inóculo de 0.01 ml [una colonia representa 100 UFC/ml], 103 para
un inóculo de 0,001 ml [una colonia representa 1,000 UFC/ml]) Si el número de
microorganismos es: > 105 /mL hay infección

<103/mL no hay infección

Entre 103 y 104 /mL es dudoso. Repetir el análisis

RECOMENDACIONES

 Dejar el área de trabajo luego de la práctica limpia y ordenada

 Tener cuidado de no mover el sediment o deplazarlo brsucamente luego de la
centrifiguracion.
 Al momento de cultivar en las cajas petri hacerlo con la misma hasa calibrado y
no llevarla al rojo vivo si no solo quemar la puntita de ella hasta el final de todo
el sembrada en las cajas.

BIBLIOGRAFIA
Hernández-Burruezo, J. J., Mohamed-Balghata, M. O., Martínez, L. A., & Sociedad Andaluza de
Enfermedades Infecciosas. (2007). Infecciones del aparato urinario. Medicina clínica, 129(18),
707-715.