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MODO DE PREPARACIÓN:
FUNCIONALIDAD:
Solución stock 1000X……………………0.5 mg/ml
En la electroforesis, se utiliza para "teñir" el DNA,
Bromuro de etidio……………………………. 50 mg
para revelar su posición en el gel. Se puede bañar
Agua……………………………………..100 ml de H2O
el gel tras la electroforesis en una disolución de
bromuro de etidio, o bien incorporar éste a la
Solución de trabajo: 0.5 µg/ml:
disolución de agarosa con la que se prepara el gel.
Diluir la solución stock 1:1000
ESTRUCTURA: C19H10Br4O5S
NOMBRE: AZUL DE BROMO FENOL
MODO DE PREPARACIÓN:
FUNCIÓN:
FÓRMULA:
AGUA BIDESTILADA
H2O
– Migración: El TAE es mejor para el análisis electroforético de fragmentos grandes de ADN (900 –
2000bp) ya que corren más rápido y tiene mayor capacidad de discriminación en un gel de agarosa
a 0.8%. Mientras que en TBE para fragmentos pequeños de ADN (100 – 500bp) corren más rápido y
tiene mayor capacidad de discriminación en gel de agarosa al 2%.
– Capacidad tamponante: el TBE es más estable y tiene una capacidad tampón más alta que el TAE.
– Reciclaje: el TAE no aguanta más de 3 corridas de electroforesis seguidas sin alterar sus
propiedades, mientras que el TBE dura 3 o 4 días independientemente de las corridas de
electroforesis realizadas.
– Recuperación del ADN: el TBE tiene una interacción pegajosa con la agarosa, lo que provoca una
recuperación baja del ADN.
ESTRUCTURA:
ÁCIDO BÓRICO
MODO DE PREPARACION:
FUNCIONALIDAD: contribuye a ajustar el pH La concentración que se suele realizar para el
deseado y a mantenerlo ajuste de Ph es de 1 molar
ESTRUCTURA:
NOMBRE. SDS
Dodecilsulfato sódico
MODO DE PREPARACIÓN:
Solución 10 % de SDS
Para pesar el SDS (dodecilsulfato sódico) debe utilizarse
FUNCIONALIDAD: una mascarilla, ya que el SDS se dispersa fácilmente, y
Es un detergente aniónico que debe limpiarse cuidadosamente la balanza y el área de
se une a las proteínas,
pesado. La solución se prepara en una botella estéril de
desnaturalizándolas en una
conformación extendida vidrio Pyrex
recubierta de moléculas de Disolver 25 mL de SDS en 175 mL de agua Milli-Q estéril,
SDS. calentando para favorecer la disolución.
Se usa para desnaturalizar las Llevar el volumen a 250 mL con agua Milli-Q
proteínas de la muestra antes Ajustar el pH a 7.2, con soluciones estériles de HCI (1%
de aplicar ésta y como
V/V) o NaOH (1% P/V)
componente del gel para
mantenerlas desplegadas Aflojar el tapón y poner en el microondas durante 2 o 3
durante la electroforesis. minutos, para inactivar posibles enzimas.
Almacenar a temperatura ambiente (no refrigerar, por
que el SDS precipita)
ESTRUCTURA:
NOMBRE. EDTA
Ácido etilendiamino tetraacético
MODO DE PREPARACIÓN:
EDTA 0.5 M (1L)
Disolver 186.1g de EDTA disódico-2H2O
FUNCIONALIDAD:
en 800 ml de agua Milli-Q.
En sus formas desprotonadas (2− y 4−), es un
conocido agente quelante de cationes divalentes, Ajustar el pH a 8 mediante la adicción de
en especial Ca2+ y Mg2+. unos 20 g de lentejas de NaOH. El EDTA
Dado que el Mg2+ es un cofactor requerido por no se disuelve hasta que el pH está
la mayoría de nucleasas, su secuestro por el EDTA ajustado a 8
evita la degradación del DNA durante la Llevar el volumen a 1 L con agua Milli-Q
preparación y la electroforesis.
Autoclavar durante 30 minutos
Almacenar a 4 °C
ESTRUCTURA:
Nombre: ÁCIDO ACÉTICO
MODO DE PREPARACION:
FUNCIONALIDAD: contribuye a ajustar el pH La concentración que se suele realizar para el
deseado y a mantenerlo ajuste de Ph es de 1 molar
ESTRUCTURA: HO-CH2
|
NOMBRE. Glicerol
HO-CH
|
HO-CH2
MODO DE PREPARACIÓN:
FUNCIONALIDAD:
Glicerol (10 % V/V)
El glicerol (glicerina) se utiliza como agente denso Diluir 1 volumen de glicerol grado
en la composición del tampón de carga. molecular en 9 volúmenes de H2O estéril
La muestra + tampón de carga se deposita al Esterilizar la solución pasándola a través
fondo del pocillo y no difunde por el tampón que de un filtro de 0.22 micrómetros
llena la cubeta y cubre el gel. De ese modo no se Almacenar en alícuotas de 200 mL a 4
pierde y se mantiene concentrada.
°C.
MODO DE PREPARACIÓN:
ESTRUCTURA:
PREPARACIÓN (100ml)
Pesar 18,17 g de Tris base
Disolver en 80 ml de H2O Milli-Q
Ajustar a pH 8,8 agregando HCl concentrado
FUNCIONALIDAD: Enfriar a temperatura ambiente antes de
En la electroforesis, es el agente tamponante realizar el ajuste final del pH de la solución
que mantiene el pH. Se incluye tanto en el gel Ajustar el volumen de la solución a 100 ml
como en el tampón de cubeta. con agua Milli-Q en una probeta
Filtrar la solución antes de guardar
Nota: El pH de la solución de Tris es
dependiente de la temperatura, y disminuye
aprox. 0.03 unidades de pH por cada grado
centígrado de incremento de temperatura.
ESTRUCTURA:
MODO DE PREPARACIÓN:
Midori Green
ESTRUCTURA:
Preparación:
Preparad 100 ml de gel de agarosa en
solución (0.8-3.0%) y calentar hasta que la
solución se vuelve totalmente clara sin
FUNCIONALIDAD: es una alternativa al bromuro partículas flotantes.
de etidio (EtBr) ; su sensibilidad y uso son Añadir 2-5 µl de Midori Green DNA Stain a la
idénticos (EtBr). solución del gel y mezclar
Sirve para verificar la progresión del DNA o de Enfriar hasta alcanzar los 50-60ºC y echar en
proteínas en la electroforesis. la bandeja del gel
Cuando se solidifique, cargar las muestras y
realizar la electroforesis
Ver las bandas a través de un transiluminador
de luz UV
ESTRUCTURA:
FUNCIONALIDAD: PREPARACIÓN:
solución tamponante para la extracción de ADN.
Y es uno de los compuestos del antiséptico
tópico Cetrimide. El catión cetiltrimetilamonio es
un agente antiséptico efectivo contra bacterias y
hongos. El CTAB es un detergente catiónico que
tiene la propiedad de precipitar ácidos nucléicos
y polisacaridos ácidos en soluciones de baja
concentración iónica
NOMBRE. GEL DE POLIACRILAMIDA
ESTRUCTURA:
MODO DE PREPARACIÓN: