UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRACTICA Nº 1

PROPIEDADES FISICAS Y QUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS

OBJETIVOS

• Observar algunas propiedades físicas de los aminoácidos.

• Reconocer la presencia de aminoácidos por su reacción con la ninhidrina.
• Identificar algunos grupos funcionales presentes en algunos aminoácidos mediante la formación
de productos coloreados al reaccionar con reactivos específicos.

TEORIA RELACIONADA

Las células vivas producen macromoléculas que son biopolímeros constituidos por unidades
monoméricas o bases estructurales. Para las proteínas, estas unidades son los L-α-aminoácidos. Las
propiedades biológicas de estas macromoléculas están determinadas en gran parte por las clases de
aminoácidos presentes, por el orden en el que están dispuestos en una cadena polipeptídica y, por lo
tanto, por la relación espacial de un aminoácido con otro. Los α-aminoácidos contienen los grupos
funcionales amino y carboxilo, unidos a un carbono α. De los aminoácidos presentes en la
naturaleza, sólo 20 de ellos aparecen en las proteínas de todas las formas de vida, vegetal, animal o
microbiana. Los aminoácidos esenciales deben ser suministrados en la alimentación, ya que nuestro
cuerpo no puede sintetizarlos en cantidades adecuadas para respaldar el crecimiento o para
conservar la salud.

Reacción de la ninhidrina: La ninhidrina es un agente oxidante poderoso que reacciona con todos
los α-aminoácidos a un pH entre 4 y 8 para dar un compuesto de color púrpura. Esta reacción se
efectúa también con los aminoácidos prolina e hidroxiprolina, pero en este caso se obtiene un color
amarillo en vez de púrpura

Reacción Xantoproteica: Los aminoácidos que contienen un núcleo aromático forman

nitroderivados de color amarillo cuando se calientan con ácido nítrico concentrado. Las sales de
estos derivados son de color rojo naranja.

Reacción de Millon: Los compuestos que contienen el radical hidroxibenceno reaccionan con el
reactivo de Millon formando compuestos rojos. Los únicos aminoácidos fenólicos son la tirosina y
sus derivados y solamente ellos dan una reacción positiva. El reactivo original de Millon es una
solución de nitrato mercúrico en ácido nítrico al 50% v/v.

Reacción del ácido glioxílico para triptófano: El grupo indólico del triptófano reacciona con el
ácido glioxílico en presencia de ácido sulfúrico concentrado dando un color púrpura.
Reacción de Sakaguchi: El único aminoácido que contiene el grupo guanidino es la arginina; esta
reacciona con el α-naftol y un agente oxidante como agua de cloro o hipoclorito en un medio
alcalino, dando un color rojo.

MATERIALES Y REACTIVOS

▪ 10 tubos de ensayo ▪ Ninhidrina: disolución al 0.2% en alcohol

▪ 1 gradilla o acetona.
▪ 1 pinza para tubos de ensayo. ▪ HNO3 al 10%
▪ 3 pipetas de 1, 5 y 10 ml ▪ NaOH al 20% o amoniaco.
▪ 1 gotero. ▪ Fenol, disolución al 0.1%
▪ 1 estufa ▪ Reactivo de Millón.
▪ 1 beaker de 500 ml ▪ Agua de cloro
▪ Papel indicador. ▪ α-naftol: 0.2%
▪ Soluciones al 0.5% de aminoácidos: ▪ Nitrito de sodio.
glicina, tirosina, triptófano, fenilalanina, ▪ Ácido glioxílico
arginina. ▪ Ácido sulfúrico.

PROCEDIMIENTO:

1. Examen físico: Anote el estado físico de la sustancia (aminoácidos puros, no las

soluciones): sólido, líquido, polvo, cristal y aspecto (si es homogénea).
Color: Ver si es uniforme o si cambia durante el proceso.
Olor: Percibir si se trata de olor característico o relacionado con un grupo químico.

2. Reacción de la ninhidrina: Coloque 1 ml de solución de aminoácido (glicina,

tirosina y triptófano) en un tubo de ensayo y ajuste el pH cerca de la neutralidad;
agregue 5 gotas de solución de ninhidrina, deje hervir por 2 minutos y anote sus
resultados.

3. Reacción Xantoproteica: Adicione 1 ml de solución de ácido nítrico a

aproximadamente 1 ml de solución de aminoácido (glicina, tirosina, triptófano, y
fenilalanina), calentar por 2 min, deje enfriar y observe el cambio de color. Agregue
suficiente NaOH al 20% hasta que la solución sea fuertemente alcalina. El cambio
de coloración de amarillo en solución ácida a naranja brillante en solución álcali
constituye un resultado positivo.

4. Reacción de Millon: A 0.5 ml de la muestra (glicina, tirosina, y fenilalanina)

adicione 3 gotas del reactivo de Millon y caliente en un baño de María por 10
minutos. Deje enfriar a temperatura ambiente agregue 5 gotas de solución de nitrito
de sodio, la aparición de un color rojo ladrillo indica un resultado positivo.

5. Reacción del ácido glioxílico para el triptófano: A 1 ml de la muestra (glicina,

tirosina y triptófano agregue 1 ml de ácido glioxílico, Observe bien el color inicial
 en cada caso. Agregue 1 ml de ácido sulfúrico por las paredes del tubo, la formación
de un anillo color púrpura indica que la reacción es positiva.

6. Reacción de Sakaguchi: Mezcle 0.5 ml de álcali fuerte (NaOH al 20%) con 1.5 ml
de solución de aminoácido (glicina y arginina) y agregue dos gotas de α-naftol.
Mezcle fuertemente y agregue cuatro a cinco gotas de agua de cloro. Note el color
formado.

PREGUNTAS

1- Escriba la ecuación de la reacción para cada prueba realizada.

2- De acuerdo con las pruebas realizadas en esta práctica proponga una clasificación
para los aminoácidos.
3- Identifique los grupos químicos que caracterizan a los aminoácidos.
4- Explique cómo se encuentran estructuralmente los aminoácidos en el plasma
sanguíneo o líquido intracelular cuyo pH es de 7.4 y 7.1, respectivamente.
5- ¿Cuáles son las explicaciones prácticas de las pruebas realizadas?

BIBLIOGRAFÍA

Plummer DT. Introducción a la bioquímica práctica. Bogotá: McGraw-Hill; 1981.

López Rico E, Anzola Velasco C. Guías de laboratorio de bioquímica para la carrera de

química. 2a ed. Bogotá: Universidad Nacional de Colombia; 2013.