Materiales y métodos.

Los materiales utilizados para el desarrollo de la siguiente practica de laboratorio son, una cebolla
cabezona grande, detergente lavavajillas líquido, sal, agua destilada, zumo de papaya, alcohol de
96° frio, vaso de cristal alto, cuchillo, varilla de cristal, licuadora, microscopio, laminillas porta y
cubre objetos.

A continuación se describe el proceso para el aislamiento de ADN por métodos no convencionales,

cabe resaltar que este proceso no hace parte de ningún método de tipo analítico o científico, solo
es un proceso analógico utilizando materiales convencionales.

1. El proceso inicia partiendo el centro de la cebolla en pequeños cuadros, simultáneamente

en un vaso alto adicione 3 cucharadas pequeñas de jabón lavavajillas liquido y una de sal,
posteriormente añada agua destilada hasta llenar el vaso, mezcle esta solución con los
cuadros de cebolla anteriormente cortados.
2. Licue el conjunto (cebolla-sal-lavavajillas-sal y agua destilada) en la velocidad máxima de
la licuadora durante 30 segundos, filtre el liquido por medio de un filtro de café o en su
defecto utilice dos coladores tradicionales.
3. Limpie el vaso previamente utilizado para la preparación del jabón y la sal, en este y
adicione el contenido filtrado hasta llenar la mitad de este vaso, simultáneamente con la
licuadora previamente limpia y seca realice el zumo de papaya licuándola con poca agua
destilada.
4. A la mezcla depositada en el vaso adicione tres cucharadas del zumo previamente
preparado y mezcle bien.
5. Añada ahora un volumen de alcohol de 96° muy frio similar al volumen adicionado en el
vaso de la mezcla filtrada, deje que este caiga de manera cuidadosa por las paredes del
recipiente, de tal manera que forme una capa con el filtrado.
6. Deje reposar la mezcla durante un lapso de tiempo de 2 y 3 minutos hasta que se
evidencien dos capas y una zona turbia en la mitad de estas. Con la ayuda de una varilla
agitadora extraiga una maraña de fibras blancas de ADN, y ubíquelas en una laminilla
portaobjetos.
7. Ubique la laminilla cubreobjetos sobre la muestra y sitúelo formando un ángulo 90° con la
platina, inicie la observación de la muestra en el objetivo de 4x haciendo un barrido por la
muestra y registrando lo observado, repita el procedimiento anteriormente mencionado
para los objetivos de 10x y 40x.

Cabe resaltar que los métodos analíticos requieren de mayor rigurosidad en el desarrollo
especifico y preciso de sus pasos, de la calidad de los reactivos y materiales a utilizar y del material
vegetal del cual se espera extraer ADN, por ende es preciso y vital tener en cuenta las cantidades
de reactivos para todos los procesos involucrados en este, contar con buenos equipos que
permitan el optimo desarrollo de una practica y no una perdida de tiempo deliberada a causa de
un equipo en deficiente estado, así también es de suma importancia seleccionar un material
vegetal a trabajar joven y con buena humedad, y tener claros los procedimientos para la
preparación de los reactivos evitando así, obtener un mal resultado recordar en la etapa final del
proceso que hace falta algo.

Preguntas
1. El proceso de extracción de ADN necesita pasar por tres procesos diferentes para poder
llegar a un fin el primero es la lisis [x] que es una lesión celular en su membrana plasmática
que provoca su ruptura, en segundo lugar se encuentra el lavado donde las proteínas que
no hacen parte del material genético se destruyen, y por ultimo el proceso de elusión
donde se precipita y se desenrolla el material genético.
Realizando pues un análisis del papel que juega cada reactivo, se concluye que la solución
de jabón lavavajillas, sal, catalizadas por la acción de la licuadora ayudan romper las
membranas plasmáticas y celulares, el zumo de papaya ahora por la presencia en este de
una enzima capaz de destruir las proteínas que pueden contaminar el ADN, por ultimo el
proceso de elusión se realiza a través del alcohol pues el ADN al ser soluble en agua y no
en alcohol se precipita y se desenrolla en la fase intermedia entre alcohol agua.[x1]
2. El proceso descrito a continuación se realiza de manera análoga al realizado en esta
práctica, con la diferencia de que este se realiza con material genético animal necesitando
así reactivos y catalizadores distintos.
1. Triturar 200 g hígado de pollo en un mortero. Añadir arena para que al triturar se
puedan romper las membranas y queden los núcleos sueltos.
2. Añadir al triturado, 50 centímetros cúbicos de agua destilada. Remover hasta hacer
una especie de papilla o puré.
3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan
quedado por romper.
4. Medir el volumen del filtrado con una probeta.
5. Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con esto conseguimos
producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina.
6. A continuación se añade 1 centímetro cúbico de SDS.
7. Añadir mediante una pipeta 50 centímetros cúbicos de alcohol de 96° el alcohol debe
de estar frio. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso
y se formen dos capas. En la interface, precipita el ADN.
8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. Sobre la varilla
se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la
agrupación de muchas fibras de ADN. [x2]

Introducción:
El ADN (ácido desoxirribonucleico) es el material genético que determina todas las características
y funciones de una célula sin importar si fuese procariota o eucariota, que difieren solo en la
manera en la que lo guardan, mientras las primeras lo tienen disperso en el citoplasma, el segundo
caso lo tiene recluido en el núcleo un organelo con membrana protectora que se encarga de dirigir
las actividades celulares y realizar los proceso de replicación de ADN, conociendo la importancia
del ADN se hace pertinente desarrollar e implementar técnicas de extracción del mismo sean
analíticas o no, ahora en el caso pertinente del objeto estudio de esta practica se trabajara con
células vegetales (eucariotas) , y mediante un proceso no analítico, teniendo en cuenta que para
esto es necesario que se cumplan tres etapas básicas que son lisis, lavado y elusión, por ende se
hace importante la determinación de los reactivos y procesos, para el cumplimiento mediante
materiales comunes de cada una de estas etapas, y comprobar la efectividad de los mismos, en
ultimo lugar se realiza el análisis de las consideraciones principales para la realización mediante
métodos analíticos. [x3]

[x] Diccionario de Cáncer: Lisis, Instituto Nacional del Cáncer de los Institutos Nacionales de la
Salud de EE. UU, tomado de https://www.cancer.gov/espanol/publicaciones/diccionario/def/lisis

[x1] Extrae el ADN de una cebolla, COINICYT ministerio de educación, gobierno de chile, tomado
de : https://www.explora.cl/index.php/192-ambitos-de-la-ciencia/ser-
humano/biologia/experimentos-biologia/762-extrae-el-adn-de-una-cebolla

[x2] Extracción del ADN animal, universidad continental, tomado

de:https://es.slideshare.net/anawii/extraccin-de-adn-animal
[x3] introducción practica de laboratorio, Profesora Kelly Johana Cardona