Procedimiento para un análisis cromatografico

Para un realizar un correcto análisis cromatografico de una muestra se debe tener en cuenta varios aspectos de la muestra

 Naturaleza de fase estacionaria

 Interacción de la fase móvil y estacionaria
 Tamaño de la partícula
 Composición y flujo
 Detector que se va a utilizar.

Es una de las técnicas analíticas ampliamente utilizadas, la cual permite separar físicamente los distintos componentes de una
solución por la adsorción selectiva de los constituyentes de una mezcla.

El solvente pasa hacia la columna cromatografía a través de la fase estacionaria mediante el

bombeo de liquido que impulsara a la fase móvil con velocidad y presión constante. Teniendo
en cuenta que el grado de retención de los componentes de la muestra depende de la
naturaleza del compuesto y de las interacciones física y químicas de los compuestos de la
composición de la fase estacionaria y de la fase móvil.
La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidad mediante un inyector que coloca
la cantidad necesaria hacia la columna. Posteriormente el solvente inyectado llega a las
columnas en donde un detector indicara el momento de aparición de los distintos
componentes que constituyen la muestra y esta se registrara en un cromatograma de registro

Existen 2 formas básicas de utilizar el solvente: Isocrático, lo cual significa que el solvente conserva la misma concentración
durante todo el tiempo de corrida (muestreo o análisis), sea que se trate de un solvente puro o de mezclas de solventes.

Por otro lado, está el sistema No-Isocrático, lo cual significa que la concentración del solvente utilizado varía durante la corrida.
Esto depende del tipo de muestra, de columna y de la necesidad del análisis de mejorar alguna separación (depende del analista
o investigador).

Un sistema de bombeo de HPLC debe ser capaz de generar elevadas presiones, producir un flujo libre de pulsaciones, conseguir
un amplio intervalo de caudales con elevada reproducibilidad y estar dotado de componentes resistentes a la corrosión.

Los sistemas de inyección hacen posible la introducción de la muestra sin despresurizar el sistema y sin sobrecargar la columna
Los sistemas de inyección son un componente fundamental del HPLC, ya que un factor limitante en la precisión de una
separación cromatografía es la reproducibilidad con la que se pueda introducir la muestra en la columna

Un detector es un instrumento con la capacidad de percibir la presencia de un compuesto y enviar la señal eléctrica
correspondiente a un ordenador de registro. Las características ideales de un detector son múltiples, se pueden citar la alta
sensibilidad, la respuesta lineal para los diferentes andinos, la reproducibilidad y el tiempo de respuesta corto.. De manera
general se distinguen dos tipos básicos de detectores. El primero de ellos engloba los que están basados en la medida de una
propiedad de la disolución, que se verá afectada por la presencia en la misma de las moléculas que se van a separar, destacando
los detectores que miden el Índice de refracción, la constante de eléctricidad y la densidad. El segundo tipo está formado por
aquellos que miden una propiedad de los compuestos que se desean separar, destacando los de absorbencia, los de
fluorescencia y los de espectrometría de masas.

Las columnas son un elemento esencial para que transcurra la separación cromatográfica. La fase estacionaria está contenida en
un tubo con terminaciones, aislada por ambos lados, que debe ser capaz de contener la presión generada en su interior tanto
durante su fabricación como durante su uso. Las columnas deben proporcionar un camino controlado y adecuado para la
entrada y la salida de la muestra, sin fugas, con el mínimo volumen posible.

La mayor parte de las columnas están construidas en acero inoxidable para conseguir la mayor resistencia posible a la presión.
La columna de cristal ofrece la ventaja de poder detectar visualmente la separación que tiene lugar en su interior. de la columna
suele estar determinada por el grado de separación entre componentes que se desee obtener.