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Carrera de Optometría
Microbiología Aplicada
Práctica No. 1
Medios de cultivo, Tinción de Gram y Toma
de muestra
Y
Objetivos
Aprender y realizar correctamente exudado Faríngeo y conjuntival
Iniciación en las técnicas del estudio de microorganismos: cultivo, tinción y morfología.
Comprender los pasos necesarios para realizar la tinción deG ram
Reconocer los microorganismos Gram positivos y negativos, al igual de la aplicabilidad clínica de
la tinción.
Identificar bacterias en los medios de cultivo.
Realizar correctamente la siembra en el medio de cultivo
INTRODUCCIÓN:
Toma de muestra: Los exudados abarcan una amplia variedad de muestras según su
procedencia. Los microorganismos que se encuentran en los exudados van a estar condicionados, en
bastantes ocasiones, por el lugar donde se presente la lesión o la patología y el área adyacente a la
misma. Si se produce una herida en la piel y se infecta, es posible que la colonización proceda de la
microbiota bacteriana de la piel actuando de forma oportunista. Lo mismo puede ocurrir ante un
desequilibrio en la microbiota bacteriana de lugares como la faringe, boca o vagina.
Exudado faríngeo: Bajo visión directa y ayudándonos de un depresor lingual, se tomará la muestra
haciendo rodar el hisopo sobre las criptas tonsilares y la faringe posterior, tocando en todas las zonas
con exudado, membranas o inflamación. Debe evitarse tocar la mucosa oral, lengua o úvula para evitar
la contaminación de la muestra.
Exudado conjuntival:
Tinción de gram:
De gran importancia en Microbiología porque permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias
(Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. El fundamento radica en la diferente
estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de
peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano
más fina y una capa lipopolisacarídica externa. La tinción de Gram fue creada por Hans Christian
Gram a fines del siglo XIX y puede utilizarse para separar la mayoría de las especies bacterianas en
dos grandes grupos, a saber, las que captan el colorante básico, cristal violeta (es decir las bacterias
gran positivas),y las que pierden ese colorante por el lavado con el de colorante alcohol o acetona
(es decir las bacterias gram negativas).
Materiales
Reactivos Agares:
Agar chocolate
Agar sal y manitol
Cristal violeta
Solución lugol
Alcohol acetona
Safranina
Metodología
Medios de cultivo:
Después de haber obtenido las muestras, realizamos siembra de cultivos:
• Técnica A
1. Consiste en cargar el asa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa
3. Se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa.
4. Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.
Técnica B
En la prueba de catalasa los resultaron que las bacterias son Catalasa Positivo.
OBSERVACIONES.
Se observó en el cultivo de agar chocolate, una siembra
contaminada.