REACCIONES DE CUANTIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS

Reacciones de cuantificación
La tabla 1 resume los ensayos para cuantificar proteínas totales más comunes. Es importante evaluar la
compatibilidad de cada ensayo con los tipos de muestra, el rango del ensayo, el volumen de muestra y la
disponibilidad de un espectrofotómetro adecuado, así como el tiempo y el costo.

ensayo absorción mecanismo límite de ventajas desventajas

detección
absorción UV 280 nm absorción de 0.1-100 pequeño volumen de incompatible con
tirosina y ug/ml muestra, rápido, detergentes y
triptófano económico agentes
desnaturalizantes,
alta variabilidad
ácido 562 nm reducción de 20-2000 compatible con compatibilidad con
bicinconínico cobre (Cu2+ a ug/ml detergentes y agentes reductores
Cu1+), Reacción agentes baja o nula
del BCA con desnaturalizantes,
Cu1+ baja variabilidad
Bradford o 470 nm formación de 20-2000 compatible con incompatible con
azul brillante complejo entre ug/ml agentes reductores, detergentes
de Coomassie el colorante azul rápido
brillante de
Coomassie y las
proteínas
Lowry 750 nm reducción de 10-1000 alta sensibilidad y incompatible con
cobre por ug/ml precisión detergentes y
proteínas, agentes reductores,
reducción de procedimiento largo
Folin Ciocalteu
por el complejo
de cobre con
proteína

Tabla 1. Ensayos comunes para medir proteínas totales.

Figura 1. Representación esquemática del ensayo de BCA.

Figura 2. Representación esquemática del ensayo de Bradford.

 Figura 3. Representación esquemática del ensayo de Lowry.

Reacciones de identificación

Entre las principales reacciones de identificación de los aminoácidos se encuentran las siguientes:
Reacción con la ninhidrina: El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos coloreados con la
ninhidrina: violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo amino es primario, amarillo para la
prolina e hidroxiprolina y café para la asparagina que tiene un grupo amido en la cadena lateral. Esta reacción
también identifica los grupos alfa-amino libres presentes en péptidos y proteínas.
Reacción de Millón: El anillo fenólico tiene un comportamiento característico frente a las sales de Mercurio
a pH ácido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico de la tirosina y las proteínas que la
contienen.
Reacción Xantoprotéica: Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan con ácido
nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o anaranjado por lo cual esta reacción
permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y Triptófano.
Reacción de Sakaguchi: El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con
soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rosados
o rojos.
Reacción de Ehrlich: La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena lateral de los
Aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido sulfanílico y nitrito de Sodio por formación
de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo así detectar la presencia de Tirosina e Histidina
libres o formando péptidos y proteínas.
Reacción de Hopkins Cole: El anillo indólico presente en la cadena lateral de los alfa-aminoácidos libres o
haciendo parte de péptidos y proteínas se puede reconocer mediante reacción con el ácido glioxílico a pH
ácido, puesto que forma complejos de coloración violeta o amarillo violeta, permitiendo así identificar al
triptófano.
Reacción con acetato de Plomo alcalino: Los Aminoácidos azufrados como Metionina, Cisteína y Cistina se
reconocen por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman
cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino.