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Objetivos:
Ÿ Entender el concepto de cromatografía aplicado a la diferenciación de pigmentos
fotosintéticos de un vegetal.
Ÿ Diferenciar los diferentes pigmentos de un vegetal que intervienen en la
fotosíntesis, mediante su separación por cromatografía.
Conceptos básicos:
- Cromatografía: Técnica, frecuentemente utilizada en química y biología, de separación de
una mezcla compleja de solutos, basándose en la diferente velocidad con que se mueve cada uno
de los solutos a través de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento.
- Fotosíntesis: Proceso anabólico (ruta anabólica) por excelencia mediante el cual los
organismos convierten la energía luminosa en energía química estable necesaria para fabricar
sustancias orgánicas a partir de moléculas inorgánicas. Dependiendo de quien sea el dador de
electrones que alimenta la cadena transportadora de electrones haciendo posible la formación de
ATP y poder reductor, los procesos fotosintéticos se dividen en oxigénicos, en los cuales el dador
de electrones es el agua desprendiéndose en el proceso oxígeno, y anoxigénicos en los cuales el
dador de electrones no es el agua sino el sulfuro de hidrógeno, y por tanto no se desprende
oxígeno sino azufre.
Así concluye la etapa luminosa acíclica que será completada con una etapa luminosa cíclica,
donde no hay ni fotólisis del agua, ni reducción del NADP+, ni se desprende oxígeno;
únicamente produce poder energético para subsanar el déficit de ATP obtenido anteriormente y
poder realizar la etapa oscura.
Materiales:
Ÿ Hojas verdes de un vegetal.
Ÿ Mortero.
Ÿ Tubo de ensayo.
Ÿ Vaso de precipitados.
Ÿ Filtro o colador.
Ÿ Papel de filtro o papel para cromatografía (Whatmann).
Ÿ CaCO3
Ÿ Etanol (96%).
Ÿ Acetona.
Procedimiento:
Ÿ Se cogen hojas verdes de cualquier vegetal y se cortan en trozos muy pequeños.
Ÿ En un vaso preparamos una disolución de 50 cm3 de etanol (96%) y una pizca de
CaCO3, para evitar la degradación de los pigmentos, y la vertemos en un mortero
junto con los trozos de la hoja. De esta manera trituramos bien hasta que el
disolvente quede del mismo color que la hoja para extraer los pigmentos presentes en
la hoja.
Ÿ Una vez triturado, filtramos con un colador la masa resultante y colocamos la
disolución en un tubo de ensayo.
Ÿ Cogemos papel de filtro o papel para cromatografía y cortamos una tira de unos
15 cm de largo con la forma siguiente:
Lugar hasta donde llega el disolvente Lugar donde comienza la cromatografía
Resultado:
Cuando retiramos el papel del tubo de ensayo observamos una franja coloreada en la parte
superior de la tira que presenta diferentes tonos de color, diferenciando así los siguientes
pigmentos: clorofila α (verde limón), clorofila β ( verde azulado) y xantofila (amarillo).