Preinforme Bioquimica M

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD
Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente- ECAPMA Programa: Agronomía
PREINFORME: Laboratorio Bioquímica Metabólica-LBM
Nombre y Apellido: Leonardo Fabio Moreno Romero Código: 11444092 Fecha: 28 Octubre de 2013
PRACTICA N°1 ACTIVIDAD UREÁSICA EN 1.2 Reactivos a utilizar

MUESTRAS DE ORIGEN BIOLÓGICO
Reactivo Fórmula Conc.
INTRODUCCION Ureasa 0.1%
Urea CO(NH2)2 0,25M
Como regla general, se considera que cuando la Cloruro de mercurio HgCl2 1%
actividad de la ureasa es mínima los demás factores anti Ácido clorhídrico HCl 0,1N
nutricionales también han dejado de ser activos o se Buffer fosfato pH 7.0
encuentran presentes en bajas proporciones. Indicador de Tashiro
1.3 Procedimiento
La técnica para determinar la actividad de la ureasa es
rápida y sencilla, razones por las que su uso se ha 1.3.1 Toma de muestra (cuando se requiere) Se
generalizado. Los resultados se expresan en unidades requiere cuando se quiere saber cuál es la calidad de la
de pH, pudiendo variar desde 0,0 hasta un máximo de materia prima con la que estamos trabajando, o cuando
2,0 a 2,5 unidades (grano crudo). La actividad ureásica se quiere analizar el contenido de urea que contienen
tolerable en términos comerciales para la harina de soja los alimentos, la sangre, orina, o tejidos vegetales.
es de 0,2 a 0,5 unidades de pH.
1.3.2 En laboratorio
Mentefacto ó diagrama conceptual
Peso muestras: Wm; Extracción con NaCl 1%;
Centrifugación; Filtración; medida sobrenadante: Vs;
Titulación con HCl; Registro de mL gastados: VHCl;
Tabla de datos
1.3.3. Diagrama de Flujo
1. MATERIALES Y MÉTODOS
1.1. Materiales y equipos requeridos
Materiales Equipos
Tubos de ensayo con Balanza analítica
gradilla.
Erlenmeyer de Agitadores magnéticos
2. TABLA DE DATOS
125mL
Pipetas de 5 y 10mL Cronometro
TUBOS TIPO DE ML GASTADOS DE
matraz aforado de 100mL Cámara fotográfica MUESTRA HCl 0.1 N
Baño termostatado
B
Beaker de
St
400mL
1
Bureta de 25mL
2
Soporte universal
3
Pinzas para bureta
4
Probeta
3. RESULTADOS ESPERADOS
Al aparecer un color rosado-violáceo, en la muestra que

contiene el color blanco indica que los equivalentes-
gramo del hidróxido de amonio fueron neutralizados por
los equivalentes-gramo del ácido clorhídrico.
Realizar el procedimiento con los demás tubos y

registrar el HCl que fue empleado para cada tubo.
4. GLOSARIO
Ureasa: es una enzima amidohidrolasa de peso

molecular: 480.kD, punto isoeléctrico: 5.0 y pH óptimo
entre 6 y 7, cataliza la hidrólisis de la urea produciendo
gas carbónico, hidróxido de amonio, según la reacción
Sustrato: El término sustrato se refiere al material que

utilizamos para llenar el recipiente de cultivo y que, en
cierto modo, es el sustituto de la tierra
Hidrólisis: es una reacción química entre una molécula

de agua y otra molécula, en la cual la molécula de agua
se divide y sus átomos pasan a formar parte de otra
especie química. Esta reacción es importante por el
gran número de contextos en los que el agua actúa
como disolvente.
5. BIBLIOGRAFÍA
Jairo Enrique Granados Moreno. MSc. Protocolo de

práctica. Bioquímica Metabólica. Universidad
Nacional Abierta y a Distancia. UNAD. 2011.
es.wikipedia.org/wiki/Urea
es.wikipedia.org/wiki/Ácido clorhídrico
www.juntadeandalucia.es/averroes/.../06/.../apuntes
_formulacion.pdf
www.horturba.com/castellano/cultivar/ficha_manejo.
php?ID=19
quimicacotidiana.blogspot.es/1243907160/
es.wikipedia.org/wiki/Hidrólisis
PRACTICA N°2 CAPACIDAD AMORTIGUADORA Agitador De vidrio

Y POTENCIAL AMORTIGUADOR DE MUESTRAS Probeta graduada 100ml
BIOLÓGICAS Balanza digital
1.2 Reactivos a utilizar
INTRODUCCION
REACTIVO FÓRMULA
Capacidad amortiguadora y potencial amortiguador, nos (NOMBRE) MOLECULAR CONC.
ayuda a evaluar si el Ph se mantiene constante en las
reacciones enzimáticas, las cuales pueden ser con Ácido HCl 0.1 N
sustancias acidas o bases, con las cuales debemos Clorhídrico
tener mucho cuidado ya que las especies vegetales y C20H14O4 ó
animales deben tener un pH adecuado de tal manera Fenolftaleína C6H4COOC(C6H4--HOH)2
que se podrá obtener un óptimo rendimiento y desarrollo
de los organismos, en el caso de las plantas si el cultivo Rojo de C15H15N3O2
establecido no cuenta con un pH optimo será muy difícil metileno
lograr que las plantas asimilen los nutrientes, causando Hidróxido de NaOH 0.1 N
que las reacciones catalizadas por enzimas no tengan sodio
una velocidad constante y se dificulte el proceso de Buffer fosfato
sobrevivencia en la planta pH=6,8-7,0 HPO4/H3PO4
Mentefacto ó diagrama conceptual 1.3 Procedimiento
1.3.1Tecnicas analíticas
Variable(indicador) Técnica analítica utilizada

evaluada(o)
pH Método potenciométrico
Capacidad Amortiguadora Método titulación
volumétrica
1.3.2 En laboratorio: Protocolos de muestras
analizadas (Elaborar una ficha ó formato que muestre la
información fundamental sobre el origen de cada una.
Por ej.: especie, nombre científico, lugar de muestreo,
datos agros climatológicos, animales, etapa productiva,
alimentación etc.)
Pesar Colocarlas Adicionar Agitar

las en el 100ml de agua y filtrar
muestra erlenmeyer 5 destilada
1. MATERIALES Y MÉTODOS s g
1.1. Materiales y equipos requeridos Medir
Medir PH y Agitar Agregar 5
Material/Equipo Características. por 1 min ml de HCL PH
tomar datos
Potenciómetro
Pipetas graduadas 10 mL y PH
Equipo de titulación Pyrex medianos 2. TABLA DE DATOS:
Bureta graduada 25mL
Erlenmeyer De 125mL TABLA 1: Datos volumétricos para capacidad
Beaker 250 ml amortiguadora de muestras biológicas.
Soporte universal Metálico, con pinza para
bureta Muestras Vm (ML) V NaOH 0,1N (mL)
Muestras Concentrado, orina, sangre y Agua destilada
forraje. Buffer fosfato
Espátula metálica Leche
TABLA 2: Datos potenciométrico para capacidad del pKa (la constante de disociación del ácido) y de las
amortiguadora de muestras biológicas concentraciones de equilibrio del ácido o base, del ácido
o la base conjugada.
Muestras Valores Evaluados
Wm (g) Vm (ml) pH 1 pH 2 5. BIBLIOGRAFÍA
Concentrado Módulo de bioquímica metabólica, AUTOR: JAIRO
Harina ENRIQUE GRANADOS MORENO., MSc.
Forraje DOCENTE ECAPMA
Sangre es.wikipedia.org/wiki/Bicarbonato
Orina es.wikipedia.org/wiki/Respiración_celular
www.ehu.es/biomoleculas/1b/pdf/5_buffers.pdf
aguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/.../amortiguador
TABLA 3. Valores de capacidad y potencial
es%20celulares.h...
amortiguador para las muestras analizadas.
Artículo científico Evaluación in vitro de dos
Muestras β β(mEqNaOH P (β) P (β) amortiguadores y un ionóforo sobre variables
(mEq /ΔpH) HCl NaOH fermentativas y microbiológicas.
HCl
/ΔpH)
Concentrado
Harina
Forraje
Sangre
Orina
Al realizar el procedimiento de la capacidad

amortiguadora por el método de titulación y con la ayuda
del potenciómetro llegar a siguientes concluir:
Si los procesos biológicos son dependientes del pH; Si
un pequeño cambio en el pH lleva a un gran cambio en
la velocidad de un proceso.
4. GLOSARIO
Capacidad Amortiguadora: La capacidad
amortiguadora de un tampón es la cantidad de ácido o
de base que se puede agregar, antes de que el pH
comience a cambiar de modo apreciable, y está
determinada por el valor real de las concentraciones de
los componentes del par ácido/base conjugado.
Solución Buffer: Es una o varias sustancias químicas

que afectan a la concentración de los iones de
hidrógeno (o hidronios) en el agua. Siendo que pH no
significa otra cosa que potencial de hidrogeniones (o
peso de hidrógeno), un "buffer" (o "amortiguador") lo que
hace es regular el pH. Cuando un "buffer" es añadido al
agua, el primer cambio que se produce es que el pH del
agua se vuelve constante. De esta manera, ácidos o
bases (álcalis = bases) adicionales no podrán tener
efecto alguno sobre el agua, ya que esta siempre se
estabilizará de inmediato.
La ecuación de Henderson-Hasselbalch es una

fórmula química que se utiliza para calcular el pH, de
una solución buffer, o tampón, a partir
PRACTICA N°3: DETERMINACION DE Pesar +/- 1.0g de muestra de forraje, en balanza

CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES (CNE), analítica y registrar como: (Wm) depositarla luego
POR EL MÉTODO DE FENOL-ACIDO en un vaso de precipitado y agregar 50 mL de
SULFURICO. solución de HCl 0,6N. Agitar constantemente con la
varilla de vidrio durante 3 minutos.
INTRODUCCION
Llevar el breaker con la solución al baño
INTRODUCCIÓN termostatado y calentar a 90°C, durante 10 min.
El proceso de determinación de carbohidratos no Dejar enfriar por 5 min y filtrar sobre papel filtro.
estructurales (CNE), por el método de fenol-ácido
sulfúrico es un procedimiento que nos ayuda a conocer Medir el volumen del filtrado (Vf) y pasar 5mL a un
dichas proporcionas en alimentos líquidos, extractos tubo de ensayo, adicionar a éste 5mL de NaOH
líquidos, materiales de celulosa, entre otros, esto se 0,6N, agitar por 15 segundos, tapar y rotular así:
logra gracias a las reacciones llevadas en laboratorio, ya FCNE: Filtrado para carbohidratos no estructurales.
que los azucares simples, oligosacáridos, polisacáridos,
y sus derivados dan una coloración al entrar en contacto
con fenol ácido sulfúrico. 1.3.2 EN LABORATORIO
Mentefacto ó diagrama conceptual
1.1. Materiales y equipos requeridos
Materiales Equipos
Vidriería Tubos de ensayo
Gradilla
pinzas para bureta
erlenmeyer de 125mL
Filtrado pipetas de 5 y 10mL
para carbohidratos no matraz aforado de 100mL
estructurales
baño termostatado
Beaker de 400mL
bureta de 25mL 2. Tabla de datos
soporte universal
1.2 Reactivos a utilizar Tabla 1: Datos para la cuantificación CNE
Reactivo Fórmula Concentración Indicadores Descripción Valor

Fenol C6H5OH 5% Wm Peso de la muestra
Ácido sulfúrico H2SO4 1N Vf Volumen del filtrado
Hidróxido de sodio NaOH O,6N
Ast Absorbancia del estándar
Agua destilada H2O 20 mL
Am Absorbancia del tubo que

1.3 Procedimiento
contenía el FCNE
1.3.1 Extracción:
Determinar los carbohidratos no estructurales
4. GLOSARIO
Método de fenol-sulfúrico: Este método propuesto

por Dubois en 1956 se fundamenta en que los
carbohidratos son particularmente sensible a ácidos
fuertes y altas temperaturas. Bajo estas condiciones una
serie de reacciones complejas toman lugar empezando
con una deshidratación simple, si se continúa el
calentamiento y la catálisis ácida se producen varios
derivados del furano que condensan consigo mismos y
con otros subproductos para producir compuestos
coloridos producto de la condensación de compuestos
fenólicos y con heterociclos con el nitrógeno como
heteroátomo.
Termostato: Es el componente de un sistema de

control simple que abre o cierra un circuito eléctrico en
función de la temperatura. Su versión más simple
consiste en una lámina bimetálica como la que utilizan
los equipos de aire acondicionado para apagar o
encender el compresor.
Ácido sulfúrico: Es un compuesto químico

extremadamente corrosivo cuya fórmula es H2SO4. Es
el compuesto químico que más se produce en el mundo,
por eso se utiliza como uno de los tantos medidores de
la capacidad industrial de los países.
5. BIBLIOGRAFÍA
Módulo de bioquímica metabólica, AUTOR: JAIRO

ENRIQUE GRANADOS MORENO., MSc. DOCENTE
ECAPMA.
Granados, J.,(2010),Protocolo prácticas de laboratorio,

ECAPMA; UNAD.
PRACTICA N°5: CUANTIFICACIÓN DE 1.2 Reactivos a utilizar

NITRÓGENO NO PROTEICO (NNP) (Fracción A
de Van Soest) Reactivo Fórmula Concent.
Ácido Tricloroacético (ATA) CI3- C- 10 %.
INTRODUCCION COOH)
Agua destilada H2O 20 mL
El nitrógeno no proteico Corresponde a los
compuestos que poseen nitrógeno en su molécula en 1.3 Procedimiento
formas diferentes a la que es propia de las proteínas
(cadenas peptídicas). (Aminoácidos libres, Purinas, Pesar +/- 1,0 g de muestra (forraje) y colocar en
Amidas, Alcaloides, Sales de amonio, Compuestos vaso de precipitado.
nítricos y Urea). Su utilización queda limitada a nivel del Adicionar 30 mL de agua destilada, agitar por un
ciego y colon principalmente. La urea en el intestino minuto.
delgado es absorbida como tal y solamente es Dejar reposar la mescla por un minuto.
desdoblada en los sacos fermentadores. Adicionar 20 mL de solución de ATA, agitar por un
minuto.
Reposar a temperatura ambiente 15 minutos.
ANALISIS DE VAN SOEST
Filtrar con papel filtro sobre probeta.
Medir el volumen de filtrado (VF).
Mediante este método se diferencian los componentes
estructurales presentes en las paredes celulares, de Recolectar 5 Ml del filtrado, colocarlos en un tubo de
aquellos que constituyen los contenidos celulares. ensayo y rotularlo: FNNP- filtrado para nitrógeno no
proteico. Tuvo con la muestra de forraje y Proceso de
Mentefacto ó diagrama conceptual filtrado nitrógeno no proteico (NNP)
1.3.2 EN LABORATORIO
1.1 Materiales y Equipos requeridos 2. Tabla de datos

Materiales Equipos Tubos Wm (g) Vf (mL) A
Vidriería Tubos de ensayo Estándar (st) m
gradilla
pinzas para bureta tipoy origen de la
Erlenmeyer de 125mL muestra
Filtrado pipetas de 5 y 10mL
para carbohidratos no matraz aforado de 100mL
estructurales baño termostatado
Beaker de 400mL
bureta de 25mL
soporte universal
3. RESULTADOS ESPERADOS (según lo planteado BIBLIOGRAFÍA

en las guías de laboratorio)
http://quimicosfarmacobiologos.bligoo.com.mx/m
edia/users/10/523320/files/51871/Manual-
Con este laboratorio se lograra mostrar definiciones de Bioqu_mica_II.pdf
algunos conceptos, procedimientos, datos y soluciones http://es.scribd.com/doc/20270275/Informe-
que debemos tener y manejar como la base N%C2%BA1-laboratorio-de-bioquimica-II
fundamental del conocimiento de la bioquímica http://www.elergonomista.com/quimica/q9.html
metabólica. http://es.wikipedia.org/wiki/Hidr%C3%B3lisis
Debido a que cerca del 90 % del nitrógeno total (NT) se MODULO BIOQUIMICA METABOLICA, UNAD
encuentra en forma insoluble con el desarrollo del http://www.a14.san.gva.es/laboratorio/web/poten
laboratorio se busca conocer el contenido de este en ciometricas.htm
una muestra de forraje y concentrados. http://espanol.answers.yahoo.com/question/inde
x?qid=20101014210010AADGjg6
Se busca comprender la manera en la que en nitrógeno http://www.slideshare.net/ekathy80/mentefacto-
a través de muchos procesos internos del animal se conceptual
convierte en amoniaco o gas carbónico.
Se espera que los resultados obtenidos sean similares a
los encontrados en la literatura. Cuantificar el Nitrógeno
en el filtrado, por método espectrofotométrico de Biuret-
Lowry. Se busca desarrollar los cálculos siguiendo las
formulas propuestas en la guía de laboratorio.
4. GLOSARIO
Nitrógeno no proteico: Se denomina Nitrógeno no

proteico a los compuestos de nitrógeno que pueden ser
convertidos en proteínas por algunos organismos vivos.
Muchos organismos superiores no pueden obtener
aminoácidos de otras formas, más que absorbiéndolos
de la dieta. Los cuales pueden ser convertir algunos
aminoácidos en otros diferentes. Los compuestos que
forman el NNP son los que
contienen amoníaco, nitritos y nitratos y otros como
la urea, el biuret o el ácido úrico. Los organismos que
puede utilizar el NNP son los hongos,
las plantas y algas, bacterias y organismos que viven en
simbiosis con ellos.
Espectrofotométricas: Un espectrofotómetro es un
instrumento usado en el análisis químico que sirve para
medir, en función de la longitud de onda, la relación
entre valores de una misma magnitud fotométrica
relativos a dos haces de radiaciones y la
concentración o reacciones químicas que se miden en
una muestra. También es utilizado en los laboratorios de
química para la cuantificación
de sustancias y microorganismos.
Análisis Kjeldahl: Las determinaciones de nitrógeno de

Kjeldahl se realizan sobre una variedad de sustancias
alimentarias. El método Kjeldahl se puede desglosar en
tres pasos principales: digestión, destilación y
valoración.
Forraje: Pasto puede ser el verde plantado o el seco. El

forraje es cualquier hierba seca que sirva de alimento a
los animales.

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PRACTICA N°1 ACTIVIDAD UREÁSICA EN 1.2 Reactivos a utilizar

1.3.3. Diagrama de Flujo

Al aparecer un color rosado-violáceo, en la muestra que

Realizar el procedimiento con los demás tubos y

Ureasa: es una enzima amidohidrolasa de peso

Sustrato: El término sustrato se refiere al material que

Hidrólisis: es una reacción química entre una molécula

Jairo Enrique Granados Moreno. MSc. Protocolo de

PRACTICA N°2 CAPACIDAD AMORTIGUADORA Agitador De vidrio

Mentefacto ó diagrama conceptual 1.3 Procedimiento

Variable(indicador) Técnica analítica utilizada

1.3.3. Diagrama de Flujo

Pesar Colocarlas Adicionar Agitar

Al realizar el procedimiento de la capacidad

Solución Buffer: Es una o varias sustancias químicas

La ecuación de Henderson-Hasselbalch es una

PRACTICA N°3: DETERMINACION DE Pesar +/- 1.0g de muestra de forraje, en balanza

Reactivo Fórmula Concentración Indicadores Descripción Valor

Am Absorbancia del tubo que

Determinar los carbohidratos no estructurales

Método de fenol-sulfúrico: Este método propuesto

Termostato: Es el componente de un sistema de

Ácido sulfúrico: Es un compuesto químico

Módulo de bioquímica metabólica, AUTOR: JAIRO

Granados, J.,(2010),Protocolo prácticas de laboratorio,

PRACTICA N°5: CUANTIFICACIÓN DE 1.2 Reactivos a utilizar

1.1 Materiales y Equipos requeridos 2. Tabla de datos

3. RESULTADOS ESPERADOS (según lo planteado BIBLIOGRAFÍA

Nitrógeno no proteico: Se denomina Nitrógeno no

Análisis Kjeldahl: Las determinaciones de nitrógeno de

Forraje: Pasto puede ser el verde plantado o el seco. El

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