PURIFICACIÓN DE ENZIMAS

Normalmente el proceso de purificación

consta de 6 etapas: A La producción de enzimas a gran escala;
los efectos de esta discusión, purificación ¿consigue el proceso producir enzima con
Eliminación de ácidos nucleicos, y concentración serán tratadas de forma la pureza necesaria al mínimo coste
eliminación de restos celulares, conjunta para ser llevadas a una posible? Sí, siempre que se haya
purificación preliminar, concentración, concentración. optimizado al máximo el proceso
purificación final, concentración y integrado.
envasado.

Sin embargo hay que tener presente 2
factores que no han sido discutidos hasta
ahora.
Primero, la mayoría de los
microorganismos son capaces de
proporcionar grandes cantidades de una
enzima a la vez
y segundo, que normalmente hay
mercado para más de una enzima. Puede
resultar ventajoso considerar
normalmente hay mercado para más de
una enzima a partir de un solo proceso, si
se adopta este proceso tendríamos una
producción multienzimática
La Obtencion de 2 o mas productos
enzimaticos a partir de un proceso tiene
claramente una ventaja economica, ya
que hay mas productos los costes de
produccion, inversion del capital.

Hicieron unplanteamiento de este tipo

para la purificacion regular de 4 enzimas
superoxido, dimutasa, rodanasa,tirosil-
tRNA sintetasa, y triptofanil-tRNA
sintetasa a partir de la una unica
extracción de bacillus stearothermophilus
Y con un proceso que se permitia
recuperar alrededor de 18 enzimas.
 ELIMINACIÓN DE ÁCIDOS NÚCLEICOS

Dentro de la celula el contaminante

Sus metodos de extraccion tienen escasas
importante que debe ser eliminado es el Es por ello que el primer paso para la
excepciones, pues tienen como resultado
acido nucleico. Con la mayor parte de los purificacion de enzimas es la eliminacion
la destruccion mas o menos completa de
polimeros solubles, los acidos nucleicos de acidos nucleicos y para ello existen 2
celula. dentro de la celula el contaminante
contribuyen de forma considerable la caminos posibles: la precipitación y la
importante que debe ser eliminado es el
viscosidad de la solucion sido dificil de digestión.
acido nucleico.
manipularla.

Aunque el tratamiento con nucleasa no

La precipitacion se consigue mediante la
adicion de policationes pero estos son
muy caros y casi no son utilizados por
cuestiones economicas.
elimina propiamente los acidos nucleicos
La digestion enzimatica con nucleasas es
si no que meramente los acorta, pero al
facil y barato por lo que viene a ser el
hacer esto reduce la viscosidad de la
metodo elegido en la mayoria de los casos
mezcla. los oligonucleotidos resultantes se
.
eliminan en estadios posteriores a la
purificacion

Los casos en que la digestion enzimatica

tiene menor validez es cuando son los de
preparacion de DNA ligasas y
endonucleasas debido al alto grado de
pureza que el empleo de estas enzimas
exigen pero es necesario hacer
precipitacion pero se le debe agregar
valores agregados al precio.
 ELIMINACION DE PARTICULAS SOLIDAS

existen 2 caminos posibles:

Centrifugación y Filtración
Si se trabaja en una escala intermedia,
con menos de 5 kg de material de
partida se necesitara emplear una
centrifuga grande que trabaje con
tanques.
Para separaciones de mayor escala es
necesario optar porun proceso
continuo
La eleccion dependera en
parte de la escala a la que se
desea realizar la operación y
en parte de la naturaleza de
los solidos presentes.
y aunque la centrifugación
es un buen metodo para
eliminar el material viscoso
es dificil de filtrar y no es un
procedimiento muy
adecuado

Tipos de Cetrifugas:
de cestillo, de tasa,
cilindrica,sharples super
 Purificación y concentración

Hay una serie de métodos disponibles para purificar
y concentrar la enzima deseada, la seleccion del
metodo de purificacion en gran medida suele ser
fruto de una mezcla de empirismo, pragmatismo y
experiencia y es imposible hacer generalizaciones
El proceso de purificacion consta de una serie de
pasos individuales purificación inicial seguida del
paso de purificación a base de cromatografia y
finalmente una concentracion del enzima
purificado.