ALUR PERCOBAAN

Penentuan Kadar Protein Dengan Metode Biuret

1. Persiapan Sample
Sample

- Ditimbang 0.4 gram

- Dihancurkan/ ditumbuk dengan mortar + alu
- + aquades
- Dimasukkan ke tabung ukur ??????
- disaring

filtrat residu

2. Pembuatan Standar

tabung I tabung II tabung III tabung IV tabung V

1mL lar standar 1mL lar standar 1mL lar standar 1mL lar standar 1mL lar standar
protein 1 mg protein 2 mg protein 3 mg protein 4 mg protein 5 mg

- dimasukkan kedalam 5 tabung reaksi berbeda

- + 4mL reagen bernet kedalam masing-masing tabung
- Dikocok
- Diinkubasi pada suhu 37oC selama 10menit atau pada suhu kamar selama
10 menit

Warna ungu yang stabil

Diukur absorbansi masing-masing pada panjang gelombang 520nm

Absorbansi
3. Penetapan Absorbansi Larutan Blanko

1 mL Aquades

- Dimasukkan kedalam tabung reaksi

- +4mL reagen bremut

- Dikocok

- Diinkubasi pada suhu 37oC selama 10 menit / pada suhu kamar selama 30
menit

- Diukur absorbensinya pada panjang gelombang 520nm

Absorbansi

4. Penetapan Absorbansi Larutan Sample

1 mL Larutan Sample

- Dimasukkan kedalam tabung reaksi

- + 4ml Reagen Bremut
- Dikocok
- Diinkubasi pada suhu 37oC selama 10 menit / pada suhu kamar selama 30
menit
- Diukur absorbansinya pada panjang gelombang 520nm

Absorbansi

Reaksi-Reaksi

- CuSO4 5H2O(aq) + 2NaOH(aq) Cu(OH)2(aq) + Na2SO4(aq) + 5H2O(X)

- Cu (OH)2(aq) Cu2+(aq) + 2OH-(aq)
- COOH

R – CH R O H R O H R

H – N + Cu2+ H2N - Cu – C – N - Cu – C - N – Cu - COOH

O=C
Cu
R – CH
H2N - Cu – C – N - Cu – C - N – Cu - COOH
NH2
R O H R O H R
Rrantai paptida Ikatan peptide
Ikatan komplek berwarna ungu