ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS

INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA N°6

DATOS GENERALES

Alumno:Angy Lisbeth Estrada

Código: 93

Nota :...................

TEMA:
EXTRACCIÓN DE ADN
2.OBJETIVOS.-

2.1 Objetivo General.-

Extraer ADN de un tejido animal

2.2 Objetivos Específicos.-

1. El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas

técnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto

que presenta, confirmar su estructura fibrilar.

2. A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que

en el núcleo el ADN se encuentra replegado.

3. .MARCO TEÓRICO

ADN

Estructura del ADN.

Las cuatro bases nitrogenadas del ADN se encuentran distribuidas a lo

largo de la "columna vertebral" que conforman los azúcares con el

ácido fosfórico en un orden particular. (la secuencia del ADN). La

 adenina(A) se empareja con la timina (T), mientras que la citosina (C)

lo hace con la guanina. Las dos hebras de ADN se mantienen unidas

por hidrógenos entre las bases.

FUNDAMENTO.- La separación del material genético se basa en que

esté tiende a precipitar en un solvente polar como el alcohol luego de

haber tratado el tejido y triturado para obtener la máxima

desnaturación de las proteínas existentes en dicho tejido.

Secuenciación del ADN

La secuenciación del ADN es la

tecnología que permite a los

investigadores determinar el orden de

las bases en una secuencia de ADN. La

tecnología se puede usar para

determinar el orden de bases en los genes, cromosomas, o un genoma completo. En

2000 los investigadores completaron la primera secuencia completa del genoma

humano.

Las pruebas de ADN

Tu ADN contiene información acerca de tu

herencia, y a veces puede revelar si estás en

riesgo de contraer ciertas enfermedades. Las

pruebas de ADN o pruebas genéticas se utilizan

por una variedad de razones, para diagnosticar

trastornos genéticos, para determinar si una

persona es portadora de una mutación genética que podría transmitir a sus hijos,

para examinar si una persona está en riesgo de una enfermedad genética. Por

ejemplo se sabe que las mutaciones en los genes BRCA1 y BRCA2 aumentan el

riesgo de cáncer de mama y cáncer de ovario, y el análisis de estos genes en una

prueba genética puede revelar si una persona tiene estas mutaciones.

FUNDAMENTO PARA EXTRACCION DEL ADN

El ADN se encuentra en el interior del

núcleo celular, disperso y muy replegado,

unido a proteínas para formar la cromatina.

Así, para extraerlo será necesario

homogeneizar el tejido y romper las células

para separar el núcleo, romper también la

 envoltura nuclear para liberar su contenido, luego separar el ADN de las proteínas

que lo protegen y, por último, precipitarlo para extraerlo de la solución. Una

vez realizado esto, el ADN aparecerá como un agregado de fibras blanquecinas que

se adhieren a la varilla de vidrio.

DESNATURALIZACION DEL ADN

Cuando se rompen las fuerzas de unión entre las dos hebras del DNA, éstas acaban por

separarse. Por tanto, el DNA desnaturalizado es de una sola hebra.

La transición entre el estado nativo y el desnaturalizado se conoce como

desnaturalización.

La forma más corriente de desnaturalizar el DNA es por calentamiento. Otro agente

desnaturalizante es :

• el pH elevado porque cambia la carga de algunos grupos que forman parte de los
 puentes de hidrógeno.

• El agua destilada (con una fuerza iónica muy reducida) se produce la separación de

las hebras. Este fenomeno se debe a que en agua muy pura, la fuerte repulsión entre

las cargas negativas de los grupos fosfato no es contrarrestada por los

correspondientes contraiones (Na+, Mg+2).

4.MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES.- REACTIVOS.-

- Varilla de vidrio - Higadito de pollo

- Mortero - Alcohol del 96%

- Vasos de precipitado - Cloruro sódico 2M

- Pipeta - SDS

- Probeta - Arena

- Trocitos de tela para filtrar

5. GRÁFICO.-

GRAFICO DESCRIPCION

Hígado triturado
 Hígado mezclado con arena

Primera filtración

Ultima Filtración

EXTRACCIÓN DEL ADN

Formación de las Fibras de ADN

6.PROCEDIMIENTO.-
 INICIO

Se tritura medio higadito de pollo en un mortero. Se añade arena para que al triturar
se puedan romper las membranas

Se añade al triturado, 50 centímetros cúbicos de agua. Se remueve hasta hacer

una especie de papilla o puré

Se filtra varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan
quedado por romper

Se mide el volumen del filtrado con una probeta.

Se añade al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con ésto

conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras
de cromatina.

A continuación se añade 1 centímetro cúbico de SDS. (Nota: Si no se dispone

de este producto puede sustituirse por un detergente de vajillas, tipo Mistol o
similar).

Se añade mediante una pipeta 50 cm3 de alcohol de 96. Hay que hacerlo de
forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas.
En la interfase, precipita el ADN.

Se introduce una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma

dirección. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas

7.-OBSERVACIONES
 • El momento de triturar el hígado es dificil hacerlo pero con ayuda de la

arena es mas facil romper las membranas del higado.

• Al momento de filtrar varias veces se pudo observar como estamos

eliminando residuos de arena

• Al momento de colocar el alcohol por las paredes del vaso de precipitación

se pudo observar la formación de grumos que son las fibras de ADN que se

tornaron de un color blanquecino que se pegan con facilidad a las paredes

de la varilla.

8. CONCLUSIONES:

• Se pudo verificar la presencia de hebras finas de ADN al momento de

colocar el alcohol sobre las paredes del el vaso de precipitación las mismas

que se adhieren a la varilla de agitacion.

• Se identificó la forma de una larga hebra fina de ADN el mismo que en el

núcleo se encuentra plegado dando la aprariencia de ovillo de hilo

9.CUESTIONARIO.-

1.¿Cuál es el objetivo de añadir arena al hígado triturado?

Se añade arena al hígado para que al momento de empezar a triturar el higado de

pollo se puedan romper las membranas queden los núcleos sueltos y sea mas facil

la observacion del AND.

2.¿Qué se produce al añadir cloruro sódico?

Al momento de añadir el cloruro sódico se produce el rompimiento de la

membrana de los núcleos para que puedan quedar libres las fibras de cromatina.

3.¿Cuál es la acción el detergente?

Al moemento de añadir detergente se trata de formar un complejo con las

proteínas y separarlas del AND haciendo que esta forma el ADN pueda quedar libre

de las proteínas.

4.¿Cómo comprobamos que el ADN se encuentra replegado?

A simple vista podemos observar agrupación de muchas fibras de AND

que se adhieren a la varilla de agitacion

10. BIBLIOGRAFÍA

• ALVEAR, David. BIOTECNOLOGIA. ADN. REVISTE DE DIVULGACION. [EN

LINEA]. 2010. [FECHA DE CONSULTA: 22/07/2015]. EXTRAIDO DE:

http://www.syngenta.com.mx/que-es-adn.aspx

• ALMEIDA, Cinthia. ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO O ADN. TEXTO DE

DIVULGACION. [EN LINEA]. 2011. [FECHA DE CONSULTA

22/07/2015].EXTRAIDO DE:http://www.um.es/molecula/anucl02.htm