2013 Volumen 5, No 9

Revista Científica de la Universidad Autónoma de Coahuila

Actividad Cito-Tóxica de Extractos de Turnera diffusa Fermentada y no

Fermentada

Belmares-Cerda R. E1*., Garza-Villasana D. A1., Garza-García Y2., Rodríguez-Herrera R1.,

Martínez-Vázquez M.3 y Aguilar C.N.1
1
Departamento de Investigación en Alimentos, Universidad Autónoma de Coahuila, Unidad Saltillo, Blvd. Venustiano Carranza. C.P.
25000, Coahuila, México.*autor para correspondencia: ruthy_251m@yahoo.com.mx
2
Departamento de Biotecnología, Universidad Autónoma de Coahuila, Unidad Saltillo, Blvd. Venustiano Carranza C.P. 25000,
Coahuila, México.
3
Instituto de Química, Universidad Nacional Autónoma de México, Circuito Exterior, Ciudad Universitaria, Delegación Coyoacán
C.P. 04510, México, D.F.

INTRODUCCION terpenoides, sacáridos, fenoles y derivados cianogenicos

(Zhao et al., 2007).
Uno de los arbustos más abundantes del Semidesierto
Mexicano es Turnera diffusa mejor conocida
Debido a su composición química y efectos benéficos
tradicionalmente como “damiana” la cual se describe
de esta planta, nuestro trabajo se enfocó en conocer las
como un Afrodisíaco; siendo usada por dicha propiedad
diferencias que existe después de ser sometida T. diffusa
desde hace miles de años por antiguas civilizaciones; tal
a un proceso de fermentación con Aspergillus niger, el
fue el caso de la antigua civilización Maya; motivo que
cual ha sido implicado en la degradación de algunos
la convierte en la “diosa del amor” una especie vegetal
compuestos, principalmente de naturaleza fenolica
de gran importancia ya que por su condición natural y
(Lewis y Starkey, 1969). Y de este modo observar si el
cultural, es una planta utilizada en la medicina
efecto protector contra ciertas enfermedades
tradicional mexicana a la que se le asocian propiedades
degenerativas, como el cáncer; se ve favorecido después
anti-microbianas, analgésicas y anti-inflamatorias.
de este proceso de fermentación.

Por otra parte, existen trabajos que revelan usos para
esta especie, por ejemplo en 1999 Johnson, reporto
efecto como actividad purgante, estimulante,
astringente, diurética, expectorante, laxante, uso en
desorden nervioso, tratamiento para enférmeles
venéreas usando extractos de esta planta. Otros
beneficios encontrados al utilizar esta especie son que
ayuda a controlar los desordenes menstruales,
gastrointestinales y respiratorios (Hocking, 1955;
Parfitt, 1999) gracias a los componentes presentes en
esta. En un trabajo más recientes se pudo conocer que el
compuesto Apigenin aislado de la damiana por Suresh y
Sharma (2006) tiene un efecto anti-ansiedad, y esto es
muy importante ya que la ansiedad es en parte una
respuesta al estrés que se acompaña generalmente de
cambios fisiológicos que pueden llegar a conducir hasta
la depresión.
MATERIALES Y METODOS
Material vegetal
Las hojas de T. diffusa fueron colectadas en zonas cuyas
características geográficas pertenecen a las regiones
semidesérticas del estado de Coahuila, México;
especialmente en la periferia de la Ciudad Saltillo,
carretera federal No 54 y en ejidos cercanos. En los
meses de Junio y julio del año 2007.
Fermentación de T. diffusa
Las condiciones de fermentación fueron las siguientes:
Fuente de carbono: T. diffusa; Medio de cultivo:
Czapek-Dox; Humedad: 70%; Inóculo: 2*107 esporas/gr
de planta; Temperatura: 30 ºC; Agitación: Intervalos de
24 H; Tiempo de fermentación: 96 horas. (Aguilar,
2000)

En estudios químicos, se ha identificado un importante Extracción de T. diffusa fermentada (TDF) y no

compuesto de naturaleza 5,7,4’-trihidroxi flavona
conocido como Apigenin el cual fue aislado de las hojas
de esta especie por Suresh y Sharma (2006). En una
reciente investigación de la fitoquímica presente en esta
especie se encontró alrededor de 35 compuestos, dentro
de los cuales de identificaron algunos flavonoides,
fermentada (TDNF)
La planta de TDF y TDNF fueron extraídas
sucesivamente con hexano, acetato de etilo y metanol
durante dos días (por tres veces) a temperatura
ambiente, en una relación 1:8 (p/v). El disolvente de
maceración fue recuperado a presión reducida con

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ayuda de un evaporador rotatorio para producir un especie permitiendo la liberación mas rápida y eficiente
extracto metanólico concentrado. de los compuestos presentes y por ende una fácil
separación de estos (Mercado y col., 2007).
Aislamiento de los metabolitos secundarios
El extracto de T. diffusa fue adsorbido en sílica gel (1:1) Tabla 1. Rendimiento de extracción (%) de Turnera diffusa.
y aplicado en una columna cromatográfica empacada TDF= T. diffusa fermentada y TDNF= T. diffusa no
fermentada
con la misma sílica gel (1:4) como fase estacionaria y
como sistema eluyente, se emplearon mezclas de
hexano, acetato de etilo y metanol de polaridad Sistema TDF TDNF
creciente. Durante este procedimiento cromatográfico Hexano 7.6 % 3.8 %
se obtuvieron fracciones, las cuales fueron reunidas en Acetate de etilo 7.4 % 3.7 %
grupos de acuerdo con la similitud de su composición Metanol 7.8 % 3.9 %
química en cromatografía en placa fina. En este último
método cromatográfico los compuestos fueron
Este proceso de extracción fue apropiado para la
visualizados mediante revelado con sulfato sérico.
obtención de una variedad de compuestos fitoquímicos
en ambas plantas (TDF y TDNF) que fueron analizados
Determinación de Citotoxicidad en línea de células de por cromatografía en capa fina (TLC), donde es
cáncer humano por el método de sulforodamina claramente visible que existe una diferencia entre ambas
(SRB) (figura 1). Esta diferencia puede deberse a que
Se siguió el protocolo establecido por (Monks et al.,
Aspergillus niger GH1 utilizado para fermentar T.
1991). Las líneas celulares: Cáncer de próstata (PC-3),
diffusa, han sido implicado en la transformación de
leucemia (K562), sistema nervioso central (U251),
algunos fitoquímicos (Suseela y Nandy, 1985) los
cáncer de mama (MCF-7) y cáncer de colon (HCT-15),
cuales pudieron ser transformados o utilizados para su
estas fueron cultivadas en medio RPMI 1640
propio crecimiento. Por otra parte, se realizó una
enriquecido con 10% de suero bovino fetal, glutamina 2
comparación utilizando un Cromatógrafo de líquidos
mM, 100 IU/mL de penicilina, 100 Ag/mL de
Waters 1525, que confirmó las diferencias por medio
estreptomicina y 1% de aminoácidos no esenciales.
del perfil cromatógrafico de la TDF y TDNF.
Fueron mantenidas a 37°C, atmósfera de 5% CO2 y
95% de humedad. En el ensayo las células fueron
separadas con tripsina-EDTA 0.1% para hacer una
suspensión de células. Las células viables fueron
contadas en un hematocitometro, las células fueron
sembradas en placas e incubadas a 37 °C. Después se
prosiguió con el método de la sulforodamina (SRB)
reportado por Monks (1991).

Identificación de algunos constituyentes químicos

La estructura algunos compuestos obtenidos fue
determinada mediante el análisis de sus datos
espectroscópicos (IR, RMN) y espectrométricos (EM).
Los espectros de IR fueron obtenidos en un
espectrómetro en solución de CHCl2, los espectros de
RMN H1 fueron obtenidos en DMSO en espectrómetro
300 MHZ Joel (E), utilizando TMS como estándar
interno y los espectros de masas fueron determinados en
un espectrómetro JEOL AXC 505 HA mediante
impacto electrónico con una energía de ionización EI+.

RESULTADOS Y DISCUSION
El rendimiento del proceso de extracción con hexano,
acetato de etilo y metanol de T. diffusa se observa en la
tabla 1, expresándose de manera porcentual tanto para
la planta fermentada (TDF) como para la no fermentada
(TDNF). Donde se observa que el rendimiento de
extracción de TDF fue de 7.8% y TDNF de 3.9%, estas
diferencias entre una planta y la otra son debidas al
proceso de fermentación al que fue sometida esta
A B
Figura 1. Cromatografía en capa fina (TLC) de Turnera
diffusa fermentada (a) y no fermentada (b)
Lo interesante de los resultados anteriores permitió
seguir con la separación de los metabolitos secundarios
presentes en ambas plantas que pudieron confirmar las
diferencias entre la TDF y la TDNF. La figura 2
muestra el total de fracciones obtenidas del proceso

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cromatográfico, la mezcla de disolventes utilizados para correspondientes al espectro de masas muestra un
su purificación y las fracciones reunidas en cada grupo fragmento a los 397 m/z correspondientes a un
de acuerdo con su similitud por TLC para ambos alcaloide. El compuesto 2 se observo como un polvo
extractos. El compuesto 1 fue obtenido como un polvo blanco granuloso que de acuerdo con sus características
blanco grisáceo, con un punto de fusión de 295°C y es un posible azúcar.
características del IR con bandas de absorción en 3413

Tabla 2. Separación de fracciones por cromatografica en columna de T. diffusa fermentada (TDF) y no fermentada (TDNF). Sistema
eluyente: Hexano (Hx), acetato de etilo (AcOEt) y metanol (MeOH).

Fracciones Fracciones
TDF Sistema eluyente TDNF Sistema eluyente
1-7 Hx 100% 1-10 Hx 100%
8-22 Hx-AcOEt (9:1) 11-37 Hx-AcOEt (9:1)
23-28 Hx-AcOEt (8:2) 38-44 Hx-AcOEt (8:2)
29-35 Hx-AcOEt (7:3) 45-54 Hx-AcOEt (7:3)
55-60 Hx-AcOEt (6:4)
36-45 Hx-AcOEt (1:1) 61-67 Hx-AcOEt (1:1)
68-79 AcOEt-Hx (7:3)
46-54 AcOEt 100% 80-89 AcOEt 100%
55-60 AcOEt-MeOH (9:1) 90-95 AcOEt-MeOH (9:1)
61-65 AcOEt-MeOH (8:2) 96-101 AcOEt-MeOH (8:2)
66-71 AcOEt-MeOH (7:3) 102-107 AcOEt-MeOH (7:3)
108-117 AcOEt-MeOH (6:4)
72-75 AcOEt-MeOH (1:1) 118-123 AcOEt-MeOH (1:1)
76-79 MeOH-AcOEt (7:3) 124-128 MeOH-AcOEt (7:3)
80-83 MeOH 100% 129-132 MeOH 100%

Tabla 3. Citotoxicidad en líneas células de cáncer humano. Líneas celulares: Sistema nervioso central (U251), próstata (PC-3),
leucemia (K562), colon (HCT-15), mama (MCF-7) y pulmón (SKLU). Concentración de muestras 50 g/ml: TDF (T. diffusa
fermentada) y TDNF ((T. diffusa no fermentada); extractos de Metanol (Me), acetato de etilo (Ac) y hexano (Hx).

Muestra U251 PC-3 K562 HCT-15 MCF-7 SKLU-1

TDFMe 7.16 13.9 53.88 sa sa sa

TDNFMe 3.9 6.2 47.30 sa sa sa

TDFAc 35.9 44.8 86.53 sa 38.59 18.08

TDNFAc 55.44 71.40 88.94 49.51 66.85 61.34

TDFHx 16.19 28.86 60.49 sa 29.3 13.64

TDNFHx 7.75 19.62 49.77 sa 22.68 15.84

La fotoquímica de T. diffusa no es reciente ya que los
productos a base de “damina” fueron fabricados por
primera vez en 1874 por Estados Unidos como un
producto afrodisíaco debido a su composición química
(Zhao y col., 2007). A pesar de existir un gran numero
de estudios de esta especie que confirman sus efectos
purgante, estimulante, astringente, diurética,
expectorante reportados por Jonson (1999), no hay
mucha información acerca de su acción citotóxica en
esta especie, por lo que, los tres extractos obtenidos en
el proceso de extracción fueron empleados para conocer
la actividad citotóxica de T. diffusa sobre células de
cáncer en humano (tabla 3), donde se aprecia que no
existe una gran diferencia entre los extractos de metanol
de la TDF y la TDNF para las primeras tres líneas
celulares, pero para el cáncer de colon, mama y pulmón

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no existe actividad citotóxica. Por otra parte, los
extractos de acetato de etilo presentan las mejores
actividades citotóxicas contra todas las líneas celulares
y en los extractos hexanicos no hay diferencias
significativas en cada una de las líneas celulares y el
cáncer de colon no hay actividad. Los tres extractos
empleados presentaron una mayor citotoxicidad sobre
leucemia (K562). Es importante mencionar que el
proceso de fermentación al que fue sometida la T.
diffusa aportó un mayor efecto citotóxico cuando se
emplearon sobre las líneas celulares los extractos de
metanol y hexano; por el contrario los extractos de
acetato de etilo obtenidos de la planta no fermentada
fueron mejores para este propósito.
CONCLUSIONES
El proceso que lleva hasta la aplicación de nuevas
técnicas biotecnológicas como lo es la fermentación, la
cual, permita darle a esta especie un nuevo enfoque que
incremente los recursos y aplicaciones de esta especie.
Ya que existen muchas aplicaciones que científicamente
no podrían comprobarse; el arduo trabajo que muchos
investigadores han puesto sobre esta planta, ha
permitido conocer poco a poco la composición,
aplicaciones e incluso factores que pudieran causar
algún efecto tóxico. Por lo que este trabajo confirma
que los extractos de T. diffusa tienen un efecto
citotóxico sobre algunas líneas celulares de cáncer de
mama, próstata, pulmón, colon, sistema nervioso central
y leucemia. Y que cuando esta especie esa sometida a
fermentación tienen un mejor citotóxico cuando son
extraídos con solventes de baja (hexano) y alta
polaridad (metanol).
REFERENCIAS
Aguilar, C.N., Augur, C., Favela-Torres, E., Viniegra-
González, G. 2000. Production of tannase by
2013 Volumen 5, No 9
Aspergillus niger Aa-20 in submerged and solid
state fermentations: influence of glucose and tannic
acid, J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 26 (5), 296–302.
Hocking GM. 1955. A Dictionary of Terms in
Pharmacognosy and Other Divisions of Economic
Botany. Springfield, IL, Charles C. Thomas, p. 234.
Johnson T. 1999. CRC ethnobotany desk reference. Boca
Raton (FL)7 CRC Press. pp. 855.
Lewis, J.A. and Starkey, R.L. (1969). Decomposition of
tannins by some soil microorganisms. Soil Sci. 107:
235-241.
Mercado y col., 2007.
Monks, A., Scudiero, D., Skehan, P., Shoemaker, R., Paull,
K., Vistica, D., Hose, C., Langley, J., Cronise, P.,
VaigroWolff, A., Gray-Goodrich, M., Campbell,
H., Mayo, J., Boyd, M., 1991. Feasibility of a high-
flux anticancer drug screen using a diverse panel of
cultured human tumor cell lines. Journal of the
National Cancer Institute 83, 757–766.
Parfitt K (1999): Martindale, the Complete Drug Reference,
32nd ed. London, Pharmaceutical Press, p. 1570.
Suresh Kumar and Anupam Sharma. 2006. Apigenin: The
Anxiolytic Constituent of Turnera aphrodisiaca
Pharmaceutical Biology. 44: 2, 84–90
Jianping Zhao, Rahul S. Pawar, Zulfiqar Ali, and Ikhlas
A. Khan. (2007). Phytochemical Investigation of
Turnera diffusa. J. Nat. Prod. 70, 289-292
Suseela, RG., and Nandy, SC. (1985). Decomposition of
tannic acid and gallic acid by Penicillium
chrysogenum. Leather Sci. 32: 278-280.