UNT

-FACULTAD: CIENCIAS
AGROPECUARIAS
-ESCUELA: INGENÍERIA
AGROINDUSTRIAL
-CURSO: BIOQÍIMICA
-TÍTULO: DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD
AMILOLITICA DE LA ALFA AMILASA
-ALUMNOS: RODRIGUEZ INFANTES VICTOR
HUGO
PINEDO TANTARAICO HERSON
-N° MESA: 05
-DOCENTE: CASTRO MALABRIGO VICTOR
-AÑO:

2018
 CONTENIDO
Introducción…………………..……pag (3-4)
Objetivos……………………………pag (5)
Materiales-Reactivos………………pag (5)
Procedimiento…………………….pag (6-7)
Resultados- Discusiones……………pag (8-9)
Conclusiones……………………………pag (10)
Referencias Bibliográficas………….. pag (11)
 INTRODUCCIÓN
Enzima, cualquiera de las numerosas sustancias
orgánicas especializadas compuestas por polímeros
de aminoácidos, que actúan como catalizadores en
el metabolismo de los seres vivos. Con su acción, regulan
la velocidad de muchas reacciones químicas implicadas en
este proceso, estas aceleran la aproximación de una
reacción a su equilibrio, sin cambiar la posición de ese
equilibrio. El nombre de enzima, que fue propuesto en 1867
por el fisiólogo alemán Wilhelm Kühne (1837-1900), deriva
de la frase griega en zyme, que significa 'en fermento'. En
la actualidad los tipos de enzimas identificados son más de
700.

Las enzimas se clasifican en varias categorías: hidrolíticas,

oxidantes y reductoras, dependiendo del tipo de reacción
que controlen. Las enzimas hidrolíticas aceleran las
reacciones en las que una sustancia se rompe en
componentes más simples por reacción con moléculas de
agua. Las enzimas oxidativas, conocidas como oxidasas,
aceleran las reacciones de oxidación, y las reductoras las
reacciones de reducción en las que se libera oxígeno.
Otras enzimas catalizan otros tipos de reacciones. (2)

Las reacciones catalizadas por enzimas (reacciones

enzimáticas) son de 10³ a 10⁷ más rápidas que
las reacciones correspondientes no catalizadas. Por otra
parte, la cinética de las reacciones enzimáticas difiere de
las reacciones inorgánicas simples. Cada enzima es
específica de forma selectiva para la sustancia sobre la que
causa la reacción, y es más eficaz a una temperatura
determinada. Aunque un aumento de la temperatura puede
acelerar una reacción, las enzimas son inestables cuando
se calientan. Muchas enzimas precisan para su función la
presencia de un ión o una molécula que recibe el nombre
de cofactor. (1)
La eficiencia de las enzimas no solo ahorra energía para la
célula viva, sino también evita la formación de
subproductos del metabolismo potencialmente Tóxicos. Las
reacciones enzimáticas pueden estar medidas controlando
el sustrato no transformado o determinando los productos
formados después de un tiempo determinados después de
un tiempo determinado de incubación en condiciones
específicas de pH, temperatura, etc. (1)
 OBJETIVOS

1.- Determinar la actividad enzimática de la alfa amilasa,

tomando como sustrato al almidón.
2.-Evaluar el sustrato residual, usando el reactivo indicado.
3.- Distinguir los productos de la reacción enzimática.

MATERIALES-REACTIVOS

. 6 tubos de ensayo 13 x 100mm

. 1 gradilla
. 1 piseta
. 2 pipetas de 5 ml
. 2 pipetas de 5 ml
. 1 pipeta de 10ml
. Agua destilada

. Solución de almidón al 1% pH
6,9
. Solución de NaCl 0,1 M y HCl
0,05 N
. Solución yodada
. Reactivo de Benedict
cuantitativo
. Solución de alfa amilasa 1%
 PROCEDIMIENTO

SISTEMAS DE INCUBACIÓN:
1.- Marcamos con; (1A-2A) nuestros 2 primeros tubos y
colocamos respectivamente: solución de almidón bufferado
al 1% (5ml_5ml), cloruro de sodio 0.1M (1ml_1ml) y agua
destilada (4ml_3ml).
2.-Las agregamos con las pipetas 5ml, 2ml y 10 ml
respectivamente.
3.-Colocar ambos sistemas de reacción en baño maría a
37°C por 5 minutos.
4.-Agregamos al tubo “2A” alfa amilasa.
5.-Por ultimo sometemos a los dos tubos a incubación,
37°C por 15 minutos.
EVALUACIÓN DEL SUSTRATO RESIDUAL:
1.- Marcamos (1B_2B) nuestros 2 segundos tubos y
colocamos respectivamente: HCL 0.05N (5ml_5ml).
2.-Del tubo 1A y 2A transferimos 0.5ml y 0.5ml a nuestros
tubos 1B y 2B.
3.-Agregamos solución yodada “IK y IO₄K “(0.5ml_0.5mL)
4.-Mezclamos uniformemente, los contenidos de los
sistemas de reacción.
 RESULTADOS – DISCUSIONES

-En los Sistemas de

incubación, notamos
nuestros tubos de
ensayo 1A y 2A un color
trasparente.

-En la evaluación del sustrato

residual, luego de transferir
de los tubos 1Ay 2A a los tubos
1B y 2B notamos el cambio de
color de los tubos (1B_2B) color
negruzco y ámbar
respectivamente hubo
transformación del producto a
sustrato.
Luego de analizar los resultados pudimos decir que La α-
amilasa (alfa-amilasa) es una enzima que cataliza
la hidrólisis de los enlaces alfa-glucosídicos, de los
polisacáridos alfa glucosídicos de alto peso molecular , en
este caso el almidón , y cada reacción tiene una obtención
de productos que en esta ocasión pudieron ser glucosa,
maltosa y dextrina, esto lo evaluamos gracias al cambio
de color que se dio en los tubos (1B Y 2B), este cambio de
color es gracias a que usamos la solución yodada como un
indicador, si es de color negruzco es porque los enlaces
del producto no se han roto y mantiene su estructura inicial
(no hubo hidrolisis); pero si es amarrillo es gracias a que la
solución yodada pudo pasar sin ningún problema por la
estructura interna del producto , en otras palabras por la
degradación del almidón (hubo hidrolisis).
En este experimento hemos utilizado esta fórmula,
correspondiente a una reacción enzimática:

E+S = E/S →E+P

La cual es de importancia cumplirla para la óptima
producción, siguiendo ciertas condiciones para su
realización, tales como: pH optimo 6.9, T°=37C
 CONCLUSIONES

1.-Nuestros tubos 1A y 2A nos sirvieron como base para

hacer reaccionar nuestros tubos 1B y 2B, y así notamos la
presencia de enzimas.

2. Al agregar determinadas cantidades de los tubos 1A y

2A a nuestros tubos 1B y 2B notamos el cambio de color
a negro y ámbar, gracias a ello determinamos que hubo
contacto de todo el producto que fue transformado en
enzima sustrato, ya que en el tubo 1B no hubo presencia
de glucosa y en 2B si hubo glucosa.
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

(1) Horton, R.; Moran, I, Ochs, R; Rawn. D. y Gray

Serimgeour. 1993.Bioquímica. Editorial Prentice Hall.
México.

(2) Bohinski, Robert. 1991.Bioquímica. 5°Edición. Editorial

Addison – Wesley Iberoamericana. Argentina.