INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Sistemas de Control de Calidad

Práctica 2. Verificación y evaluación del uso y

funcionamiento de instrumentos de medición
volumétrica

Profesores:
M. en C. Aura Patricia Hernández Olicón
QBP Cinthya Salimah Martínez Reyes
QBP Alejandro Landín Caudillo

Grupo: 5QV1 Sección: 3

Introducción
Las micropipetas son dispositivos que se utilizan para medir o dispensar pequeños
volúmenes de líquido de un recipiente a otro con gran exactitud. Sin embargo, su uso no
está exento de errores, que pueden ser ocasionados debido a que las micropipetas se
encuentran descalibradas o por falta de habilidad del operario.
El error aleatorio, también conocido como imprecisión, es una medida de la variación de
valores medidos individualmente. La imprecisión es muy pequeña cuando existe solo una
mínima variación entre las medidas repetidas. Para conseguir una imprecisión
despreciable, es necesario no solo que los equipos utilizados sean precisos, sino que
también haya un procedimiento adecuado, limpieza y experiencia práctica. El error
sistemático también conocido como inexactitud, es una medida de la desviación entre el
valor medido y el valor nominal. Una menor inexactitud se aprecia cuando la desviación
entre el valor medido y el valor nominal es pequeña. La exactitud de un sistema de
dispensación se puede comprobar mediante un método gravimétrico (método de
referencia) o un método fotométrico (método de rutina).

Objetivos
- Identificar los errores al utilizar la micropipeta.
- Comparar el método de rutina con el método de referencia.
-

Fundamento
El método gravimétrico consiste en determinar la masa del líquido que puede contener o
entregar a una medida volumétrica o aforo o punto de referencia específico de un
recipiente volumétrico. Se utiliza como medio de transferencia el agua (ρ=1) y se requiere
una balanza que tenga una buena repetibilidad.
El método fotométrico se basa en la utilización de soluciones que presenten una relación
lineal entre la absorbancia y la concentración (ley de Beer-Lambert-Bouguer). Se pueden
utilizar distintas soluciones como la de dicromato de potasio al 8% en agua destilada.
Además, se requiere utilizar un estándar relativo para calcular el volumen que mide
realmente la micropipeta.
 Métodos
INICIO
Método fotométrico
Dicromato de potasio para espectrofotómetros
que pueden leer entre 492 y 510 nm.
En 5 tubos de 10 x 75 mm realizar diluciones
de 1:20 utilizando solución de dicromato de
potasio al 8% con la micropipeta a verificar.
Mezclar por inversión cubriendo
los tubos con papel parafilm.
Ajustar espectrofotómetro a cero con agua
destilada a λ 500 nm y determinar
absorbencia de cada tubo, así como para el
estándar relativo.
Calcular CV y %E con las
absorbancias obtenidas.
FIN
INICIO
Método gravimétrico
Utilizar micropipeta a verificar y seleccionar
valor nominal (VNP) que desee analizar.
Limpiar punta con agua destilada pipeteando
el volumen ajustado al menos 3 o 4 veces.
Aspirar volumen seleccionado, manteniendo
la pipeta vertical de acuerdo con lo descrito
en la sección de manejo de micropipetas.
Tarar la balanza con un recipiente y expulsar el
volumen seleccionado sobre el contenedor.
Leer el peso en mg y repetir operación
al menos 5 veces.
Anotar sus resultados. Utilizar una balanza con
legibilidad de 0.001 mg.
Obtener el promedio de sus datos y calcule el
CV, el %E y el volumen.
FIN
Resultados
Bitácora de resultados Fecha: 12/09/2018
Verificación, evaluación del uso y funcionamiento de instrumentos de medición
volumétrica.
Datos de la micropipeta
Instrumento: Micropipeta (mide volúmenes pequeños) Tipo de ajuste:
Marca: Volumen de la micropipeta: 20-200 µL
Unidades: microlitros (µL) Número de serie:
Número de micropipeta (codificación propia del usuario): 10 SCC
Límites de error:
Tabla 1. Errores máximos permitidos (ISO 8655-2)

Condiciones físicas de la micropipeta: en buen estado.

Cálculo y tratamiento de los datos
- Datos obtenidos a partir del método fotométrico
Verificación de la precisión
Reactivo utilizado: Dicromato de potasio Longitud de onda seleccionada: 500 nm
Solución con la que se hizo las diluciones: Agua destilada
Espectrofotómetro utilizado:
Ajuste del espectrofotómetro con: Agua destilada
Método de pipeteo:
Datos obtenidos
Número de tubo Absorbancia
1 0.303
2 0.243
3 0.252
4 0.290
5 0.319
Forma y cálculo de la media y del coeficiente de variación:
𝜎
𝐶𝑉 = ∗ 100%
𝜇
Donde:
σ = Desviación estándar
μ = Media aritmética de la población
0.0293
𝐶𝑉 = ∗ 100%
0.2814

Absorbancia promedio: 0.2814 Media obtenida: 0.2814

Desviación estándar: 0.0293 Coeficiente de variación: 10.14 %
¿Qué representa el coeficiente de variación? La precisión de un método analítico.
¿Hay imprecisión? Sí.

Verificación de la exactitud
Reactivo con el que se realizó el estándar relativo: Dicromato de potasio
Material de vidrio para el estándar relativo: matraz aforado de 500 mL
Volumen preparado: 500 mL Longitud de onda seleccionada: 500nm
Absorbancia del estándar relativo: 0.253
Volumen nominal de la micropipeta (VNP) (µL): 20
Fórmula para calcular el volumen de la micropipeta
𝐴 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑥 𝑉𝑁𝑃
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑞𝑢𝑒 𝑚𝑖𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑝𝑖𝑝𝑒𝑡𝑎 𝑒𝑛 µL =
𝐴 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜
Donde:
A promedio = valor obtenido durante la verificación de la precisión.
VNP = valor nominal de la micropipeta.
A del estándar relativo = absorbencia de dicho estándar.

0.2814 𝑥 20 µL
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑞𝑢𝑒 𝑚𝑖𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑝𝑖𝑝𝑒𝑡𝑎 𝑒𝑛 µL =
0.253

Volumen que mide la micropipeta (µL): 22.24 µL

Verificación de la exactitud
Fórmula y cálculos para calcular el % error:
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑜𝑏𝑠𝑒𝑟𝑣𝑎𝑑𝑜 − 𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙
% 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑥 100
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙

Donde:
Valor observado = volumen de la micropipeta, determinado con la primera fórmula.
Valor esperado = valor nominal de la micropipeta.
22.24 − 20
% 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑥 100
20
% Error calculado: 11.2 %
 Volumen de la Volumen Volumen que mide % de error
micropipeta (µL) seleccionado (VNP) la micropipeta (µL)
(µL)
20-200 20 22.24 11.2

Observaciones y puntos críticos identificados en el procedimiento

 Profundidad de inmersión errónea de la punta.
 Ángulo de pipeteo incorrecto
Acciones correctivas
 Sumergir la punta en función de su tamaño: de 1 a 2 mm en las pipetas de
microvolumen y hasta 3 o 6 mm en las pipetas de gran volumen.
 El ángulo de inmersión de la punta de la pipeta en la muestra debería ser lo más
vertical posible y no debería desviarse más de 20 grados del ángulo vertical.

Datos obtenidos por el método gravimétrico

- Datos de la balanza
Instrumento: Balanza analítica Tipo de ajuste:
Marca: Número de serie:
Unidades: miligramos (mg) Decimales:
Número: Codificación propia del usuario:
Condiciones físicas de la balanza:

Calibración del instrumento: Recipiente utilizado:

Método de pesos utilizado: Peso del recipiente (w1):
Temperatura de control: Método de pipeteo:
Datos obtenidos por el método gravimétrico
No. mg
1 0.0885
2 0.0896
3 0.0852
4 0.0842
5 0.0876
Volumen total: 500 µL Media de los datos obtenida: 0.0886 mg
Desviación estándar: 2.022x10-3 Coeficiente de variación: 2.28%
% Error: -11.1% Factor “Z”: 1.0040 mL/g
Fórmula y cálculos para obtener el volumen real de la micropipeta:
𝑉 =X∗𝑍
Donde:
V = volumen medio
X = promedio de los pesos
Z = Factor Z (25°C = 1.0040 mL/g)
Sustitución de datos:
𝑉 = 0.0886 g ∗ 1.0040 𝑚𝐿/𝑔
𝑉 = 0.0889 𝑚𝐿
Conversión a µL:
Tomando en cuenta que 1 mL = 1000 µL

𝑉 = 0.0889 mL ∗ 1000 µL/𝑚𝐿

𝑉 = 88.9 µL

Volumen real de la micropipeta (µL): 88.9 µL

Observaciones y puntos críticos identificados en el procedimiento
 Ángulo de pipeteo incorrecto.
 Profundidad de inmersión.
Acciones correctivas
 El ángulo de pipeteo debe ser lo más vertical posible.
 Sumergir la punta en función de su tamaño: de 1 a 2 mm en las pipetas de
microvolumen y hasta 3 o 6 mm en las pipetas de gran volumen.
 Micropipeta Método fotométrico Método gravimétrico
Vol. de la micropipeta (µL) 20-200 20-200
Vol. seleccionado (VNP) 20 100
(µL)
Vol. que mide la
22.24 88.9
micropipeta (µL)
% de error 11.2 -11.1
Método primario para la determinación de volumen y verificación de los instrumentos:
- Método gravimétrico
Verificación de la micropipeta:
Observaciones generales:

Recomendaciones para el uso de la micropipeta:

Discusión
Los valores normales de coeficiente de variación y % de error establecidos por la ISO
8655 (ver Tabla 1) son indicativos de precisión y exactitud respectivamente. Para
considerar que los resultados obtenidos en la práctica se deben a que la micropipeta está
descalibrada, estos deben ser iguales o cercanos a los establecidos por la norma. Si son
demasiado elevados se interpretan como errores cometidos por parte del operario, hecho
que se ve reflejado en mi caso, el cual se respalda con los puntos críticos encontrados:
- Profundidad de inmersión errónea de la punta
La correcta profundidad de inmersión de la punta puede mejorar la exactitud en hasta un
5%. Si la punta se sumerge demasiado, el volumen de gas de la punta se comprime y
provoca que se aspire demasiado líquido. En cambio, si se sumerge poco, al aspirar el
líquido su nivel en el recipiente descenderá lo que provocará que la punta quede fuera
de este y el volumen sea menor al requerido.
El % de error obtenido en el método gravimétrico al ser negativo (-11.1%), se dice que es
un error por defecto, es decir, cuando se ha establecido un determinado volumen de
muestra (100 µL) pero se registra una cantidad menor a la indicada (88.9 µL).
- Ángulo de pipeteo incorrecto
El ángulo de inmersión de la punta de la pipeta en la muestra debería ser lo más vertical
posible y no debería desviarse más de 20 grados del ángulo vertical. Un ángulo más
horizontal provoca que se introduzca demasiado líquido en la punta, lo que conlleva
aspiraciones inexactas. Esto se ve relacionado con el %E obtenido en el método
fotométrico (11.2%). Al ser un error positivo se habla de un error por exceso. Este hace
referencia a cuando se establece una determinada cantidad (20 µL), pero se registra una
mayor a la indicada (22.24 µL).
Otros aspectos que pudieron haber influido son:
- Fallo de enjuague previo
La dosificación del líquido de una pipeta deja un recubrimiento del líquido en la punta, lo
que provoca que el volumen expulsado sea ligeramente inferior de lo que debería ser.
Enjuagar previamente una nueva punta un par de veces, como mínimo, con el líquido que
se va a usar, servirá para acondicionar el interior de la punta.
- Ritmo irregular en el pipeteo
Es recomendado tener un ritmo constante en el pipeteo entre muestras. Se debe evitar ir
deprisa o realizar operaciones rápidas, y mantener el ritmo para cada paso del ciclo de
pipeteo.
Con respecto a los métodos gravimétrico y fotométrico, ambos permiten determinar la
exactitud y precisión del analista. Ningún resultado obtenido está dentro de lo establecido
por la norma. Además, son evidentes las fallas cometidas en la técnica de pipeteo, por lo
que podemos afirmar que el analista carece de precisión y exactitud.

Conclusiones
- Hay imprecisión e inexactitud del analista.
- El método gravimétrico es más rápido y mucho más fácil de llevar a cabo
comparado con el método fotométrico.

Preguntas extra
1. ¿Cuáles son las cifras significativas y su redondeo de acuerdo con la NOM-Z-59-
1986?

2. Hoja de datos de seguridad del dicromato de potasio

Fórmula: K2Cr2O7
El dicromato de potasio es un sólido cristalino naranja-rojizo, soluble en agua. A diferencia
del dicromato de sodio, no es higroscópico. Sus cristales son triclínicos pinacoidales.
Reacciona violentamente con ácido sulfúrico y acetona o hidracida. Con hidroxilamina,
reacciona explosivamente y con etilenglicol a 100 °C, la reacción es exotérmica.
Riesgos a la salud:
El principal problema de este producto es su capacidad para corroer e irritar piel, ojos,
membranas mucosas y tracto respiratorio, así como hígado y riñones, por lo que es
peligroso inhalado, ingerido o por contacto con la piel.
Se ha informado de efectos tóxicos de este producto sobre los sistemas circulatorio y
nervioso central, pulmones, corazón, riñones y tracto gastrointestinal de conejos
expuestos a concentraciones crónicas.
En general, los síntomas de intoxicación por exposición a este compuesto son: sensación
de quemadura, tos, respiraciones cortas, dolor de cabeza, náusea, vómito. Además,
puede presentarse erosión y decoloración de los dientes, nefritis e inflamación y
ulceración del tracto gastrointestinal.
3. Breve resumen de la ISO 8655
La ISO 8655:2002 fue escrita específicamente para definir los requisitos necesarios para
producir calibraciones precisas y confiables de pipetas de pistón y otros equipos de
medición estrechamente relacionados. Detalla los métodos requeridos, las condiciones
de prueba, el equipo de prueba, los requisitos de informes e incluye los requisitos para
informar los valores de incertidumbre de medición requeridos.
Los puntos principales de la ISO 8655:2002 se centran en:
1.Utilizar la balanza adecuada
2.Minimizar efecto de la evaporación
3.Condiciones ambientales

Bibliografía
- Guisande-González C., (2006). Tratamiento de datos. Ediciones Díaz de Santos.
España. pp. 25.
- León-Huaca C., (s.f.). Condiciones de Funcionamiento Anómalas en los
Instrumentos Volumétricos Operados con Pistón. Disponible en:
“http://www.inacal.gob.pe/inacal/files/metrologia/EVENTOS/SIMPOSIOS/2016/Pr
esentaciones/Condiciones_Funcionamiento_Anomalos_en_Instrumentos_Volumt
ricos_Operaos_con_Piston_-_Camilo_Len.pdf” (Consulta: 09/2018).
- n/a., (s.f.). Pipetas, Disponible en:
“http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/cd29/laboratorio/cap16.pdf” (Consulta:
09/2018).
- SEGOB, (1986). Norma Oficial de Metrología NOM-Z-59-1986. Valores Numéricos
- Guía para el Redondeo e Interpretación de Valores Límites. Disponible en:
“http://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=4796765&fecha=16/06/1986”
(Consulta: 09/2018).
http://www.imh.eus/es/comunicacion/dokumentazio-irekia/manuales/proyecto-medicion-
tridimensional-en-fabricacion-mecanica-con-equipos-portables/tolerancias-
dimensionales tipos de ajuste