Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Técnica bioquímica, que surgió en los Años 70 como alternativa para reducir el uso de otras
técnicas toxicas que utilizaban radioactividad.
ÉXITO DE LA TECNICA Luego de MAS DE 40 años mantiene vigencia como procedimiento analítico
de gran sensibilidad y especificidad, sencillo, bajo costo, reproducible, y adaptable a las
características de cualquier laboratorio.
ESTA TECNICA NOS PERMITE cuantificar e identificar (determinar de una manera cuantitativa)
determinadas moléculas: sustancias como proteínas hormonas en distintos tipos de soluciones
(Sangre, orina, extractos de tejidos e incluso en cultivos celulares)
La solución en la que tenemos la molécula problema la vamos a inmovilizar en una superficie (un
sustrato) que contiene poliestireno (placa). Y lo que vamos a hacer es detectarla con otras
moléculas que son específicas de esta molécula problema.
MOLÉCULA PROBLEMA=ANTÍGENO
ANTICUERPOS POLICLONALES= son capaces de reconocer varias estructuras o epitopos dentro del
mismo antígeno.
ELISA DIRECTO
La placa de poliestireno la cubrimos con la solución del antígeno y utilizamos el anticuerpo para
detectarlo. El anticuerpo está unido a una enzima que es la que reacciona ante la presencia de un
sustrato que se adiciona y genera así un color que es evaluado en un espectrofotómetro (por
longitud de onda).
Y comparándolo con una (curva) estándar el color que emite una cantidad de antígeno conocido
se pueden cuantificar los resultados
Es rápido y sencillo
ELISA INDIRECTO
La placa de poliestireno se cubre con una solución de antígeno y se adiciona un 1er anticuerpo que
va a detectar el antígeno de una manera especifica y un 2do anticuerpo que es el que lleva la
enzima. Se añade el sustrato y la enzima desarrollara un color
ELISA SANDWICH
COMPETITIVO
Se tapiza con una cantidad de antígeno conocida y se usa también la cantidad de solución con el
antígeno problema. Por lo cual al añadir el anticuerpo este se va poder unir o al antígeno que esta
adherido a la placa o al antígeno de la muestra. Como posteriormente vamos a lavar, todo el
anticueerpo que se una al antígeno de la muestra será ELIMINADO DE LA PLACA .
Cuanto mas color tenga, es decir cuando mas anticuerpo se halla unido al antígeno conocido,
menor será la cantidad que se unio a la muestra.
Electroforesis 2d
Separación de los diferentes componentes del proteoma por punto isolectrico y masa
99||||||||||||||9||||||||||||||233333331oooooooooooooooooooooooooo