Manual para biometría hemática

1.1. FROTIS DE SANGRE PERIFÉRICA

PROPÓSITO: Observación detallada de todos los elementos de la sangre, con el fin de evaluar la
condición hematológica del paciente.

MUESTRA REQUERIDA: Frotis de sangre periférica coloreado con Wright.

PROCEDIMIENTO: Cada técnico debe aprender a observar todos los elementos del frotis mientras
lleva a cabo el recuento diferencial. Debe formar el hábito de verificar los puntos siguientes.

ERITROCITOS:

Tamaño: microcitosis, macrocitosis y normocitos. El grado de variación en tamaño se reduce al

término de anisocitosis.

Forma: esferocitos, codocitos, eliptocitos, megalocitos, drepanocitos, acantocitos, equinocitos etc.

El grado de variación en forma se reduce al término de poiquilocitosis.

Concentración de hemoglobina: Grado importante de hipocromía, e hipercromía aparente,

observar el aumento aparente o evidente de la proporción de glóbulos rojos policromáticos.

Otros hallazgos anormales: La policromatofilia (basófilia difusa), punteado basófilo, anillo de Cabot,
cuerpos de Howell-Joly, eritroblastos, las células parasitadas y la formación de Rouleaux.

LEUCOCITOS: - Observar la madurez de los leucocitos, el número promedio, anormalidades

morfológicas, signos de malignidad, la variante de leucocitos que predominan. - Comparar el
recuento de leucocitos por milímetro cúbico con lo observado en el frotis.

PLAQUETAS: - Observar si se encuentran en cantidades aproximadamente normales (de tres a ocho

plaquetas por cien glóbulos rojos). La disminución de las plaquetas en un frotis puede deberse a la
manera de realizarlo, pero su falta o su disminución considerable, en un frotis bien hecho pueden
hacer sospechar de trombocitopenia. Debe observarse si las plaquetas que se encuentran parecen
normales o existen muchas formas gigantes (macroplaquetas) o notablemente pequeñas

FUENTES DE ERROR:

Observar los elementos celulares en la parte más gruesa del frotis.

Coloración defectuosa del frotis.

Observar el extendido con un objetivo diferente al de inmersión.

Equipo en mal estado.

Aceite de inmersión de mala calidad o en malas condiciones.

Procedimiento para recuento de eritrocitos:
1. Obtener sangre total mediante puncion venosa.
2. con la pipeta automática, se toma 20 µL (0,02mL) de sangre total con anticoagulante, o
sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que contenga 4 mL de solución de Hayem
(aquí se tiene una dilución de 1:200).
3. Agitar el tubo por inversión al menos por 1 min.
4. Con una nueva punta de micropipeta se procede a cargar la cámara de Neubauer
desechando las 5 o 6 primeras gotas de la pipeta
5. Colocar el cubreobjetos sobre la cámara de Neubauer y llenarla, tratando que fluya
libremente por difusión el líquido evitando llenar en exceso o formación de burbujas
6. Dejar en reposo 2 o 3 minutos el Hemacitómetro con el fin de que los eritrocitos sedimenten
7. Localizar la cuadricula de la cámara de Neubauer con el objetivo seco débil (10X); enseguida
enfocar con seco fuerte (40X)
8. El recuento se realizará en los cuadros más pequeños de la cámara, contando los hematíes
localizados en los 4 cuadros de los extremos y en el del centro, haciendo un total de 5
cuadros.
9. Realizar los cálculos para determinar la cantidad de eritrocitos resultantes

Notas.

1. Se recomienda hacer el conteo por duplicado y el valor promedio es el que se utiliza para
realizar todos los cálculos.
2. Las medidas de la cámara de Neubauer son: Profundidad 0.1 mm, Area contada 0.20 mm,
dilución empleada 1:200,

Expresión de resultados

De los 25 cuadrados en que se encuentra subdividido, se cuentan los cuatro angulares y el central,
con un recuento total representativo de 1/5 de milímetro cuadrado. Sobre la base de una dilución
de 200, de un recuento de 1/5 mm2 y una profundidad de 0.1 mm, el cálculo se efectúa como sigue:
Eritrocitos contabilizados X 5 X 200 X 10 = NUMERO DE ERITROCITOS POR mm3 , o bien Eritrocitos
contabilizados X 10,000 = NUMERO DE ERITROCITOS/ mm3
 Ilustración 1 Manera correcta de realizar el
conteo de células en cámara de Neubauer.

Ilustración 2 Distribución de hematocitómetro

Ilustración 3 Ejemplo de cómo hacer los calculos de Eritrocitos

Conteo de Leucocitos

1. Colocar en un tubo de ensaye 100 Microlitros de sangre con EDTA recién extraida
mediante punción venosa (Limpiar la parte externa de la punta de micropipeta con papel
absorbente para recoger el exceso de sangre adherida)
2. Agregar al mismo tubo 1.9 ml de líquido de Turk
3. Mezclar suavemente el tubo por 1 min
4. Cargar la Cámara de Neubauer de igual forma que para el recuento de Eritrocitos
5. Dejar en reposo durante 5 min para que se sedimenten los leucocitos
6. Realizar el conteo con el objetivo de 40x en los 4 cuadros más grandes localizados en las
esquinas de la cámara de Neubauer (enfocar con el objetivo de 10 x y después con el de
40x).
7. Reportar resultados según las formulas mencionadas más adelante

Notas: Ten mucho cuidado de no contar artefactos o burbujas de aires como leucocitos, y
recuerda que para realizar un recuento correcto no debes de contar el mismo leucocito 2 veces.

Expresión de resultados:

Para obtener la cantidad total de leucocitos por mm3 basta multiplicar la cantidad total de
leucocitos por el factor que es este caso es de 50.

Ejemplo

Si se de un paciente se obtuvieron los siguientes resultados

Cuadro A: 24 Recuento total: 99

Cuadro B: 25 Numero de leucocitos por mm3: (99) (50) = 4950 cel/ mm3

Cuadro C: 27

Cuadro D: 23
Recuento de plaquetas

1. Colocar en tubo de ensaye 20 microlitros de sangre con EDTA recién extraida mediante
punción venosa (Limpiar la parte externa de la punta de micropipeta con papel absorbente
para recoger el exceso de sangre adherida)
2. Agregar 1.98 mL de Oxalato de amonio
3. Mezclar bien el tubo varias veces minino 1 minuto.
4. Dispensar con pipeta automática o con capilar la dilución en el borde de la laminilla de la
cámara Neubauer.
5. Colocar la cámara en una caja de petri la cual contiene una torunda humedecida con
agua, para evitar la evaporación, se tapa y se espera de 10 a 20 minutos para que se
depositen bien las plaquetas.
6. Proceder al conteo de las plaquetas en el microscopio con el objetivo 40x y poca luz. -
Contar toda el área central. - Observar las plaquetas como pequeñas partículas de gran
refringencia.

7. Calcular el numero de plaquetas multiplicando el valor total obtenido por 1000 (si se hace
el conteo en todo el recuadro central de la cámara) o por 5000 según sea el caso (se
multiplica por 5000 si el conteo se realiza en los 5 cuadros donde se realiza el conteo de
leucocitos)