UNIVERSIDAD METROPOLITANA DE CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
MÉTODOS INSTRUMENTALES DE ANÁLISIS

Laboratorio N°1
“Determinación de concentración de
colorantes Azul brillante y
Tartrazina en bebida energética
Powerade®”

Autor: Dominique Adam Vega

Fecha de realización: 23/08/2018 – 30/08/2018

Fecha de entrega: 17/09/2018

Profesor: Dr. Carlos Garrido Leiva

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MÉTODOS INSTRUMENTALES DE ANÁLISIS

Objetivo general:
- Determinar las concentraciones de los colorantes Azul brillante y Tartrazina en
bebida energética “Powerade” mediante la ley de Lambert-Beer
Objetivos específicos:
- Cuantificar con un espectrofotómetro la muestra
- Obtener longitudes de onda máximas mediante la cuantificación de las soluciones
patrones de colorantes
- Preparar una solución stock o solución madre con estándar de los colorantes
- Preparar set de concentraciones para la posterior realización de la curva de calibración
- Realizar curvas de calibración a partir de la cuantificación del set de concentraciones
en las longitudes de onda máximas.
- Utilizar la ecuación de Lambert-Beer para obtener las concentraciones de ambos
colorantes en la muestra.
Materiales y métodos
Materiales Reactivos

Matraz de aforo 10 mL (2) Tartrazina

Tubos de 10 mL (10) Azul brillante

Espectrofotómetro UV2600 Powerade

Celda de cuarzo (1 cm) Agua purificada de alta pureza

Balanza analítica

Micropipeta y puntas
Tabla 1:Materiales y reactivos utilizados en el laboratorio
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Procedimiento:
- Medición
o Se calibró el espectrofotómetro con el blanco, en este caso, fue agua
purificada de alta pureza.
o Se midió la muestra directamente sin diluir, en el espectrofotómetro para
conocer las longitudes de onda aproximadas de cada colorante.
o Se escogió del set de concentraciones la muestra de 1 x 10-5 mol/L para medir
las longitudes de onda a las cuales se trabajaría para aplicar la ley de Lambert-
Beer.
o Una vez obtenidas las longitudes de onda a trabajar, se midió la muestra a
ambas longitudes.
- Curva de calibración
o Se prepararon dos soluciones madre con estándar de los colorantes Azul
brillante y Tartrazina a una concentración de 6,31 x 10-4mol/L y 4,86 x 10-4
mol/L respectivamente.
o A partir de la solución madre, se preparó un set de concentraciones, diluyendo
el valor correspondiente para cada una y así utilizarlas para la curva de
calibración.
o Una vez conocida las longitudes de onda a trabajar, se procedió a medir cada
una de las muestras del set de concentraciones a ambas longitudes, por lo
tanto, se realizaron dos mediciones para el Azul brillante y dos mediciones
para la Tartrazina.
o Teniendo los valores de cada medición, se procedió a realizar la curva de
calibración con el software Microsoft Excel.
- Cálculos posteriores
o Teniendo los valores de cada pendiente, se aplicó la fórmula de Lambert-Beer
para obtener la concentración de cada sustancia en la muestra.
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Resultados y discusión
1. Cuantificación de la muestra y las soluciones patrón.
- La primera medición se le realizó a la muestra, sin diluir, para tener una visión
panorámica de ambos colorantes, lo que nos entrega la siguiente gráfica:

Gráfica 1: Espectro de absorción muestra (Powerade®)

En la gráfica podemos observar dos grandes peack, uno a 414 nm y otro a 629 nm, lo cual
nos indica la presencia de ambos colorantes, sin embargo, no nos entrega mayor información,
puesto que ambos están en una mezcla no se sabe a qué colorante pertenece cada longitud de
onda, pero nos hace dilucidar a qué longitudes se trabajará aproximadamente para la
realización de las curvas de calibración.
- La siguiente medición se realizó con la solución patrón de cada colorante a una
concentración de 1 x 10-5 mol/L, lo que nos entregó las siguientes gráficas:
630

427

Gráfica 2: Espectro de absorción Tartrazina Gráfica 3: Espectro de absorción Azul Brillante

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Tartrazina: Se puede inferir de la gráfica 2, que el colorante tartrazina absorbe entre las
longitudes de onda 200 a 430 nm aproximadamente, teniendo dos peack, a 258 nm y 426 nm.
Debido a esto se debe escoger la longitud de onda máxima para trabajar en la posterior curva
de calibración. Por lo tanto, en este caso sería la de 427 nm.
Azul brillante: Se puede inferir de la gráfica 3, que el colorante Azul brillante tiene un
espectro de absorción mucho más amplio que la tartrazina, lo cual comprende desde los 200
a 700 nm aproximadamente, teniendo tres peack, a 306 nm, 409 nm y 630 nm. Teniendo esto
en cuenta, se debe escoger la longitud de onda máxima para trabajar en la posterior curva de
calibración. Por lo tanto, en este caso sería la de 630 nm.
Cabe mencionar que los peack más altos mostrados en ambos espectros de absorción, se
asemejan mucho al primer alcance en la medición de la muestra (414 nm y 629 nm), lo que
nos deja en claro a qué colorante corresponde cada uno.
Una vez que se escogieron las longitudes de onda (λ) máximas a trabajar, se midió la muestra
a ambas longitudes, lo cual nos entregó el siguiente resultado:
λ/ nm Absorbancia
630 0,418
427 0,399
Tabla 2: Absorbancia de la muestra en ambas longitudes de onda

Curva de calibración
Como primera instancia, antes de la cuantificación, se prepararon las soluciones madre de
ambos colorantes a una concentración de 4,87x10-4 mol/L para la tartrazina y 6,31x10-4 mol/L
para el Azul brillante. Luego a partir de cada una, se preparó el set de concentraciones para
cada una, diluyendo la solución stock utilizando la siguiente ecuación:
𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2 Ecuación 1: Dilución

Siendo C1 y V1 la concentración y volumen inicial y C2 y V2 la concentración y volumen

final.
N° Concentración/ mol*L-1
1 1 x 10-4
2 1 x 10-5
3 5 x 10-5
4 1 x 10-6
5 1 x 10-7 Tabla 3: Set de concentraciones preparadas

El set de concentraciones fue igual para ambos colorantes.

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Una vez que se obtuvo el set de concentraciones se procedió a realizar la cuantificación de

cada muestra a las longitudes de onda máximas (427 nm y 630 nm) cuantificadas previamente
con el patrón de cada solución:
- Azul brillante 630 nm:
Concentración/ Absorbancia
mol*L-1
1 x 10-7 0,024
1 x 10-6 0,135
1 x 10-5 1,208
5 x 10-5 3,895
Tabla 4: Absorbancias para 630 nm del set de concentraciones de Azul brillante

No se completó el set de concentraciones, puesto que los dos últimos valores de absorbancia
(1,208 y 3,895) se alejan bastante del promedio.
- Azul brillante 427 nm:
Concentración/ Absorbancia
mol*L-1
1 x 10-7 0,009
1 x 10-6 0,014
1 x 10-5 0,067
5 x 10-5 0,211
1 x 10-4 0,413
6,31 x 10-4 2,610
Tabla 5: Absorbancias para 420 nm del set de concentraciones de Azul Brillante

Se tomó en cuenta la solución stock, puesto que la absorbancia de la concentración n°5 seguía
en el rango.
- Tartrazina 630 nm:
Concentración/ Absorbancia
mol*L-1
1 x 10-7 0,018
1 x 10-6 0,020
1 x 10-5 0,026
5 x 10-5 0,027
1 x 10-4 0,027
Tabla 6: Absorbancias para 630 nm del set de concentraciones de Tartrazina
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Se pueden observar unos bajos valores de absorbancia, esto se debe a que el rango de
absorción de la tartrazina, tal como se mencionó antes, es entre los 200 y 430 nm, por lo que,
a 630 nm no podría absorber.
- Tartrazina 427 nm:
Concentración/ Absorbancia
mol*L-1
1 x 10-7 0,008
1 x 10-6 0,034
1 x 10-5 0,250
5 x 10-5 1,136
1 x 10-4 2,305
Tabla 7: Absorbancias para 420 nm del set de concentraciones de Tartrazina

El siguiente paso fue obtener las curvas de calibración a partir de las tablas 3, 4, 5 y 6
realizando una regresión lineal y así poder obtener la pendiente.
- Azul brillante:

Curva de calibración Azul Brillante

0,5
0,4 y = 3984,9x + 0,0144
Absorbancia

0,3
0,2 y = 123333x + 0,0117
0,1
0
0,0,E+00 2,0,E-05 4,0,E-05 6,0,E-05 8,0,E-05 1,0,E-04 1,2,E-04
Concentración/ mol x L-1

λ 630 nm λ 427 nm Lineal (λ 630 nm) Lineal (λ 427 nm)

Gráfica 4: Curvas de calibración Azul brillante

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- Tartrazina:

Curva de calibración Tartrazina

0,3 y = 24264x + 0,0076
0,25
Absorbancia

0,2
0,15
0,1 y = 71,5x + 0,0213
0,05
0
0,0,E+00 2,0,E-05 4,0,E-05 6,0,E-05 8,0,E-05 1,0,E-04 1,2,E-04
Concentración/ mol x L-1

λ 630 nm λ 427 nm Lineal (λ 630 nm) Lineal (λ 427 nm)

Gráfica 5: Curvas de calibración Tartrazina

Cabe mencionar que las curvas se realizaron con aquellos valores comprendidos entre 0 y 1,
pues los demás salían del promedio y no se consideraron.
Las gráficas nos entregan los siguientes valores de pendiente:
λ / nm Colorante Pendiente
630 Azul Brillante 123333
Tartrazina 71,5
427 Azul Brillante 3984,9
Tartrazina 24264
Tabla 8: Valores de las pendientes producto de la regresión lineal

2. Cálculos de concentración:
Una vez que ya se realizaron todas las cuantizaciones y finalmente pudimos obtener la
pendiente, debemos analizar los datos y relacionarlos entre sí. La forma para ello, nos la dice
la ley de aditividad de Lambert-Beer, la cual nos indica que, a cualquier longitud de onda, la
absorbancia total de una mezcla es igual a la suma de las absorbancias de cada compuesto de
la mezcla para la longitud de onda seleccionada. Esta ley se cumple, siempre y cuando, no
existan interacciones o interferencias a cada analito. (Sierra , Pérez, Gómez, & Morante ,
2010)
La ecuación de la ley de Lambert-Beer es:
𝐴=𝜀×ℓ×𝐶 Ecuación 2: Ley de Lambert-Beer

Siendo: A la absorbancia, ε la absortividad, ℓ longitud de la celda y C la concentración.

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Y la ley de aditividad:
𝐴𝑚𝑒𝑧𝑐𝑙𝑎 = 𝐴1 + 𝐴2 Ecuación 3: Ley de Aditividad

Teniendo en cuenta la ley de aditividad nos quedaría con nuestras muestras siendo un sistema
de ecuaciones:
Ecuación 4: Sistema
𝐴630 𝑛𝑚 = 𝜀 × ℓ × 𝐶𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑏𝑟𝑖𝑙𝑙𝑎𝑛𝑡𝑒 (𝑋) + 𝜀 × ℓ × 𝐶𝑡𝑎𝑟𝑡𝑟𝑎𝑧𝑖𝑛𝑎 (𝑌) de ecuaciones
𝐴427 𝑛𝑚 = 𝜀 × ℓ × 𝐶𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑏𝑟𝑖𝑙𝑙𝑎𝑛𝑡𝑒 (𝑋) + 𝜀 × ℓ × 𝐶𝑡𝑎𝑟𝑡𝑟𝑎𝑧𝑖𝑛𝑎 (𝑌) aplicando ley de
aditividad
Siendo: A la Absorción, ε la absortividad (cm M ), ℓ la longitud de la celda (cm), en nuestro
-1 -1

caso 1 cm y C la concentración (mol/L) de azul y tartrazina respectivamente.

Este sistema de ecuaciones se realiza con el objetivo de conocer la concentración de cada
uno de los colorantes en la muestra, al realizar el reemplazo nos queda:
0,418 = 123333 × 1 × 𝐶𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑏𝑟𝑖𝑙𝑙𝑎𝑛𝑡𝑒 (𝑋) + 0 × 1 × 𝐶𝑡𝑎𝑟𝑡𝑟𝑎𝑧𝑖𝑛𝑎 (𝑌)
0,399 = 3984,9 × 1 × 𝐶𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑏𝑟𝑖𝑙𝑙𝑎𝑛𝑡𝑒 (𝑋) + 24264 × 1 × 𝐶𝑡𝑎𝑟𝑡𝑟𝑎𝑧𝑖𝑛𝑎 (𝑌)
- Cabe mencionar que debido al hecho de que la tartrazina no absorba en longitudes de
onda superior a los 430 nm, al realizar la curva de calibración el valor de la pendiente
o en este caso el valor de la absortividad, se aproxima a 0.
Como el ε de la tartrazina es cero, el valor de la concentración de azul brillante es directa:
0,418
𝐶𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑏𝑟𝑖𝑙𝑙𝑎𝑛𝑡𝑒 =
1 × 123333
𝐶𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑏𝑟𝑖𝑙𝑙𝑎𝑛𝑡𝑒 = 3,39 × 10−6 𝑀
Luego este valor se reemplaza en la segunda ecuación:
0,399 = × 1 × 3,39 × 10−6 + 24264 × 1 × 𝐶𝑡𝑎𝑟𝑡𝑟𝑎𝑧𝑖𝑛𝑎 (𝑌)
0,399 − (3984,9 × 1 × 3,39 × 10−6 )
𝐶𝑇𝑎𝑟𝑡𝑟𝑎𝑧𝑖𝑛𝑎 =
24264
𝐶𝑇𝑎𝑟𝑡𝑟𝑎𝑧𝑖𝑛𝑎 = 1,59 × 10−5 𝑀
Ya teniendo las concentraciones, se calcula la cantidad en masa de cada compuesto en la
muestra, con las siguientes ecuaciones:
𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 (𝑚𝑜𝑙) Ecuación 5: Calculo de concentración
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 (𝐿)
𝑀𝑎𝑠𝑎 (𝑔)
𝐶𝑎𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 (𝑚𝑜𝑙) = 𝑔 Ecuación 6: Calculo de cantidad de
𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑚𝑜𝑙𝑎𝑟 ( )
𝑚𝑜𝑙 sustancia (n)
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- Azul brillante
𝑛 = 3,39 × 10−6 𝑀 × 0,6 𝐿
𝑛 = 2,03 × 10−6 𝑚𝑜𝑙
𝑔
𝑚 = 2,03 × 10−6 𝑚𝑜𝑙 × 792,85
𝑚𝑜𝑙
𝑚 = 1,61 × 10−3 𝑔 = 1,61 𝑚𝑔
- Tartrazina
𝑛 = 1,59 × 10−5 𝑀 × 0,6 𝐿
𝑛 = 9,53 × 10−6 𝑚𝑜𝑙
𝑔
𝑚 = 9,53 × 10−6 𝑚𝑜𝑙 × 534,36
𝑚𝑜𝑙
𝑚 = 5,09 × 10−3 𝑔 = 5,09 𝑚𝑔

Las concentraciones obtenidas son valores muy pequeños de concentración, siendo en su

mayoría tartrazina, pues el azul brillante tiene una gran tinción. Sin embargo, a pesar de que
los valores parecen ser pequeños, se podrían considerar altos, teniendo en cuenta el alto nivel
de toxicidad presentada por los compuestos, además de considerar que son derivados del
petróleo. Al calcular la cantidad en masa, nos da como resultado más de 1 mg de cada
colorante, en sólo 600 mL de la bebida energética. En Chile no existe una reglamentación
que impida el excesivo uso de este tipo de colorantes, incluso no se tienen en una categoría
de alta toxicidad.

Conclusiones
- Se logró el objetivo principal sobre la determinación de la concentración de cada
colorante en una muestra de bebida energética, además se relacionó el alto valor de
estos con el alto nivel de toxicidad presentada por ambos colorantes.
- Con respecto a los objetivos específicos, se lograron todos a cabalidad, teniendo en
consideración que en las curvas de calibración se descartaron aquellos datos que
salían de la media, además de determinar como valor 0 la absortividad de la tartrazina
en longitudes de onda superiores al rango de absorbancia. Con respecto a la aplicación
de la ley de Lambert-Beer no existieron problemas, pues los datos obtenidos para
trabajar, se trataron de manera previa a la introducción en la formula.
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Referencias
Sierra , I., Pérez, D., Gómez, S., & Morante , S. (2010). Análisis instrumental . Oleiros,
España: Gesbiblo.
https://www.aditivos-alimentarios.com/2016/01/E133.html (visitado: 16/09/2018 a las
20:30hr)
https://www.aditivos-alimentarios.com/2016/01/E102.html (visitado: 16/09/2018 a las
20:40hr)
https://www.leychile.cl/Consulta/m/norma_plana?org=&idNorma=13068
(visitado: 16/09/2018 a las 21:00 hr)