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Química Biológica
TP 6 ÁCIDOS NUCLEICOS .
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Introducción
Los ácidos nucleicos son polímeros de alto peso molecular cuyas unidades monoméricas son los
nucleótidos unidos por enlaces fosfodiester. Los nucleótidos presentan una pentosa, un grupo
fosfato y una base nitrogenada cuya naturaleza es responsable del código genético. Existe dos
tipos de acidos nucleicos: el acido ribunucleico (RNA) y el acido desoxirribonucleico (DNA) La
principal diferencia entre ambos es la pentosa puede ser ribosa en el caso del RNA o
desoxirribosa en DNA.
Molécula de DNA
Química Biológica 2010
Parte experimental
Objetivos
Actividades
Extracción de DNA
Pelar y rallar una cebolla mediana con rallador o procesador hasta picarla finamente.
Pesar 15 g de cebolla rallada
Adicionar 25 ml de solución de lisis (0,1 % de SDS en 25 mM EDTA pH 8) y esperar 20 min.
Filtrar en gasa y recoger en probeta.
Transferir 4 ml de filtrado a un tubo de ensayo.
Adicionar 8 ml de etanol 95% procurando no mezclar las dos soluciones.
En la interfase observar la formación de una fina hebra.
Retirar la interfase con pipeta Pasteur y separarla en un tubo.
Resuspender en 2 ml de agua destilada y calentar suavemente.
Química Biológica 2010
Caracterización de DNA
Una hidrólisis ácida remueve todas las bases púricas (hidrólisis de uniones N-glicosídicas entre
pentosa y las bases púricas) sin afectar las uniones fosfodiester del esqueleto nucleotídico, por lo
tanto obtenemos como producto ácidos nucleicos sin bases púricas.
Las desoxipentosas debido a la hidrólisis ácida sufren deshidratación dando aldehídos δ-hidroxi-
levulínicos. Estos reaccionan con difenilamina dando un producto de color azul. Así, la reacción
de difenilamina servirá para caracterizar, indirectamente, la presencia de DNA en células de
cebolla.
Actividades
Identificación de la pentosa
La pentosa del DNA y RNA puede evidenciarse por la reacción con orcinol, en este caso la
desoxirribosa. El ácido sulfúrico hidroliza las uniones fosfodiester y N-glicosídicas, liberando
ribosa, bases púricas, pirimidínicas y ácido fosfórico.
La ribosa en medio ácido se deshidrata originando furfural que reacciona con el orcinol dando
un producto verde que demuestra la presencia de RNA.
Pentosas del RNA –HCl cc y calor------- furfural + orcinol ----Cl3Fe---- color VERDE
Test de micronúcleos
Los micronúcleos son pequeños cuerpos de DNA que aparecen cerca del núcleo
principal durante la interfase como resultado de una división celular defectuosa, la que
es el resultado de daños cromosómicos estructurales y numéricos inducidos por agentes
contaminantes químicos y orgánicos. Los micronúcleos se forman durante la transición
metafase-anafase de la mitosis por daños en el huso mitótico, generando fragmentos de
cromosomas retrasados durante la migración y durante la interfase pueden observarse
como pequeñas masas citoplasmáticas de cromatina.
Actividades
Tomar los mejillones y abrirlos realizando un corte en el músculo abductor. Extraer las
branquias y realizar un frotis de la misma. Dejar secar y luego fijar con con Carnoy
(etanol – acético 3:1) y se deja secar nuevamente. Teñir los preparados con Giemsa 4 % y contar
500 células registrando el número de anormalidades.
Actividades complementarias
Química Biológica 2010