G

Problemas

INTRODUCCION

.
1 Hacer una lista de las sustancias que se producen por fermentación en el país y
de las que se importan, estableciendo cantidades en kg/año y precio en $/kg.
2. Buscar en la literatura el diagrama de flujo para la manufactura de los
siguientes productos: alcohol etílico, ácido cítrico, penicilina y a-amilasa.
3. Hacer una lista de los lugares, en el país, donde se pueden obtener cepas
para fermentación, especificando el número y las especies disponibles.
4. Listar las principales diferencias entre los organismos eucariotes y
procariotes, considerando su posible uso en fermentación. Mencionar algunos
ejemplos de cada uno.

CRECIMIENTO MICROBIANO
5. Un organismo que crece en un medio complejo en cultivo sumergido
aeróbico, fue medido de la siguiente manera:

Tiempo (h) 012345678

Núm. de organismos
x )(). 2 2Q ,35 J2() ÿ ÿ ÿ J81 3,,
mi

Determine el valor de Pnrix y el de Ks ¿Cómo afectaría al resultado el que las

mediciones se hubieran hecho cada 4 horas?
6. Se tiene una bacteria con un tiempo do duplicación mínimo de 1 h
otra con uno de 2 h en las mismas condiciones ambientales. Si inicialmente la

|305|
306 Problemas Problemas 307

relación de concentraciones entre ellas es de 0.1 ¿Cuál será la concentración indique cuál es el tamaño de Inóculo óptimo para maximizar el rendimiento
después de 5 y de 10 h? Especifique sus suposiciones para la solución del del producto. Suponga que la concentración final del organismo es indepen
problema. ¿Cómo afectaría un cambio en el pH? diente del tamaño del inóculo y que es constante: ningún producto se
7. En un cultivo batch, y en un medio complejo (y.gr. jugo de tuna) crece introduce con el inóculo y no hay fase lag.
S. cerevisiae. ¿Es lógico esperar un crecimiento diaúxico? ¿Por qué? ¿Cómo II. ¿Qué modelo cinético para el crecimiento celular y de formación de
se manifiestaría dicho crecimiento en las mediciones de peso seco, número de producto es aplicable a los siguientes datos?
células, densidad óptica y oxígeno disuelto?
8. Si en un cultivo batch (matraz agitado) crece E. coli a 20° y 37°C en Concentración Concentración
un medio compuesto por 1% de glucosa, amoniaco y sales y se obtienen los Tiempo Peso seco sustrato producto
siguientes datos: (h) (g/l) (g/D (unidades/l)
0 0.100 5.0 0
T°C Y(g células/g sustrato) 0.2 0.122 4.96 0.00243
0.4 0.149 4.90 0.00540
20 0.41 0.6 0.181 4.84 0.00901
37 0.26 0.8 0.221 4.76 0.0134
1.0 0.269 4.66 0.0188
1.5 0.441 4.31 0.0379
¿Es acertado concluir que la temperatura afectará siempre el rendimiento 2.0 0.724 3.74 0.0693
de esa manera? En caso de que su respuesta sea negativa, exponga de qué otra 2.5 1.187 2.80 0.121
3.0 1.94 1.27 0.205
manera explica usted el experimento. 3.5 2.54 0 0.330
4.0 2.56 0 0.459
5.0 2.53 0 0.714
CINETICA DE FERMENTACIONES 0.966
6.0 2.51 0
9. Encuentre usted los parámetros cinéticos, tanto de crecimiento como de 7.0 2.48 0 1.22
8.0 2.46 0 1.46
formación de productos, de los siguientes datos experimentales: 9.0 2.43 0 1.71
10.0 2.41 0 1.95
Tiempo Concentración del Biomasa Producto
(h) sustrato (g/l) (g/l) (unidades/ml)
12. La siguiente información se obtuvo en cultivos batch de B. subtilis
0 54.5 0.2 — que crecían en maltosa como sustrato limitante y a-amilasa como el producto
13 52.0 1.1 — deseado :
30 51.0 2.0 —
40 50.2 2.8 750
64 41.0 6.0 1 880
80 32.0 6.3 2 700 Tiempo Biomasa Maltosa a -am ¡lasa
90 27.0 6.32 3 150 (h) (g/l) (g/D (ujl)
110 21.0 5.94 3 800
130 17.2 5.1 4 800 0 0.1 5.00 0
150 15.0 5.2 5 160 0.2 0.122 4.96 0.243
0.4 0.149 4. >2 0.540
0.6 0.181 4.84 0.901
0.8 0.221 4.76 1.34
Utilice varios modelos y en caso de que ninguno de ellos se ajuste, 1.0 0.269 4.66 1.88
proponga uno. 1.5 0.441 4.31 3.79
2.0 0.724 3.74 6.93
10. Suponiendo que el siguiente modelo se ajusta a una fermentación 2.5 1.187 2.80 12.1
particular, 3.0 1.94 1.27 20.5
3.5 2.54 0 33.0
4.0 2.56 0 45.9
dP dx 5.0 2.53 0 71.4
—
dt
= a —
dt
+ px 6.0
7.0
2.51
2.48
0
0
96.6
122.0
8.0 2.46 0 146.0

--
x
1 dP
dt
= a/u + (3
9.0
10.0
2.43
2.41
0
0
171.0
195.0

dP ¿Cuál es el modelo cinético aplicable al crecimiento de las células?

—
dt
= tt /jx + /3 x
Determine los parámetro* cinético» y ostcquiométrico» apropiados. ¿Cuál es In

1
308 Problemas Problemas 309

cinética de formación de a-amilasa? Determine los parámetros cinéticos

D S .u o
necesarios. X
(h-1) (gil) (i/D

CULTIVO CONTINUO
. '¡ymk> 0.012
0.022
1.11
1.18
_
0.04
0.035 1.26 0.03
13. Se utiliza un quimiostato para medir las velocidades de mutación y se 0.054 1.33 0.11
obtienen los siguientes datos: 0.077
0.092
1.36
1.37
_
0.16
'
l:
wi-V i 0.114
0.133
1.25
1.21
_
0.29
0.161 0.98 0.89
D = 0.6 h~l Población total = 109/mi 0.172 0.88 1.07
0.205 - - E. S i
Numero de mutantes/ml Tiempo/(h) bikl/i
100 9
200 11 a) Encuentre los parámetros cinéticos de este organismo suponiendo una
300 13 cinética de Monod y una energía de mantenimiento (compare con metabolis¬
mo endógeno).
b) Si ahora se lleva a cabo una alimentación de S0 =5 g/1, ¿cuál será la
productividad máxima del sistema (suponiendo que no haya otro tipo de
limitación)?
Calcule la velocidad de mutación (eventos de mutación/organismo padre-ge-
neración). Suponga que la /j del mutante es igual que la del padre. TRANSFERENCIA DE MASA
14. Si un solo contaminante entra en un quimiostato, existe una probabili¬
dad finita de que salga del fermentador antes de dividirse. Calcule esta 17. Un volumen de agua de 0.21 m3 (densidad = 103 kg/m3, viscosidad
probabilidad para una célula con un td de 2 h en un fermentador que opera a 10 ~3 N seg/m2) se agita en un tanque cilindrico de 0.6 m de diámetro me¬
las siguientes tasas de dilución: 0.2, 0.5, 1.0 y 1.5 h-1 . -«» diante un impulsor de 0.24 m de diámetro. A una velocidad de 5 rps, se encon¬
tró que el impulsor transmitió 720 W de potencia al fluido.
15. Utilizando el modelo de Luedeking y Piret para la formación de
Calcule la velocidad del impulsor para operar un tanque geométricamente
producto dP/dt = aÿtx — /3x derive la ecuación para el estado estacionario que
similar de modo que transmita 2 kW/m3 a 15~m3 de agua. Para el primer
relaciona a concentración del producto a la salida con la concentración celular
tanque, ¿cuál es la velocidad máxima del impulsor si se cuenta con un motor
y la velocidad de dilución. Suponga una cinética tipo Monod. ¿Cuáles son los
de 2 HP?
valores de a y 0 para la producción de ácido láctico en cultivo continuo que
se obtienen de los siguientes datos experimentales?
18. Se proyecta utilizar un tanque cilindrico, al cual se inyecta aire, para
producir levadura. Las condiciones del fermentador son las siguientes:

Diámetro del tanque 4m

Volumen del líquido 125 m3
Flujo de aire 0.5 VVM
D x ácido láctico Presión en el tanque 0.5 atm
(IT1)_ (g/i)_ fg/i) Temperatura 30°C
0.1 8.0 24.0
0.2 8.0 16.0 Con agua y usando un electrodo de oxígeno se obtuvieron los siguientes
0.3 8.0 13.3
0.35 7.95 12.5 datos:
0.39 7.80 11.8

Tiempo (seg) 0 10 20 30 40 50 60
16. A continuación se dan los datos experimentales de cultivo continuo en Tensión de oxígeno
(KN/ma) 5.0 11.1 14.1 15.9 16.8 17.3 17.6
estado estacionario para la producción de biomasa:

i
1_
310 Problemas 311

Calcule el coeficiente de transferencia de masa (suponiendo una respuesta
instantánea del electrodo).
Encuentre la productividad máxima del sistema para la producción de
levadura en cultivo continuo, usando melazas.
19. Diseñe un fermentador piloto de 550 1 para los siguientes requerimien¬
tos:
Viscosidad de 0.01 a 100 cp
Densidad de 50 a 75 lb/ft3
Geometría estándar
20% de pérdida de potencia del motor en sellos, conexiones, etc.
El motor deberá operar de 0 a 300 rpm
Volumen de operación, aproximadamente 70%
Indique las relaciones geométricas y el tamaño del motor eléctrico re¬
querido.
20. En el laboratorio se encontró que el área interfacial en tanques
agitados está gobernada por los siguientes parámetros:
evidencia de que la velocidad de corte del fluido es un parámetro crítico que
influye en la producción del antibiótico. Se intenta duplicar la velocidad de la
punta del impulsor, y para ello existen varias posibilidades; evalúe cada una de
ellas y proponga la mejor.
a) Sin cambiar la potencia, HP, del motor eléctrico instalado, ¿cómo liaría
en ND?
b) ¿Cómo afectaría duplicar N a los otros parámetros del proceso?
c) Si se redujera 25% el tamaño del impulsor, ¿qué le sucedería a N y a la
potencia?
d) Suponiendo que el coeficiente de transferencia de masa está correlacio¬
nado con la potencia por unidad de volumen y que no hay efecto en la
correlación cuando varía ND, ¿que sugeriría usted?
Suposiciones:
1. Flujo turbulento en todos los c&aós
2. Propiedades físicas del fluido constantes
3. Despreciar el efecto de aeración en absorción de potencia
22. Indique usted cuál de las dos siguientes correlaciones usaría para hacer
un diseño de escalamiento:

N0Dj = 0.195 + 0.2 DT/Dj

/ P«A 0 4
kLa ( a ) vs°'5 N°'5 (Calderbank)
a HL = 96 (ND¡ - N0Dj) VW y

/ Pe\0 -7
N0 = velocidad mínima del agitador, rps
N = velocidad del agitador, rps
kLa «Mj Vs0-67 (Fukuda)

D¡ = diámetro del impulsor, m
Dt = diámetro del tanque, m
Hl = altura del líquido, m
a = área interfacial, m2/m3
Para escalamiento en tanques geométricamente similares se recomienda:
1 . Igual velocidad tangencial en la punta del agitador (tip speed velocity).
2. Igual área interfacial.
3. El escalamiento no se debe hacer con base en P/V constante
Analice los resultados anteriores y señale sus críticas en cuanto a los criterios
propuestos.
a) Si los criterios 1 y 2 son correctos, ¿qué sucedería si hiciese un
escalamiento en volumen de 1 000? (Comparación cuantitativa).
b) Discuta el criterio 2 para escalamiento, apoyándose en su conocimiento
de la teoría de transferencia de masa.
c) ¿Por qué razón las correlaciones encontradas apoyan el criterio 3?
ESCALAMIENTO DE FERMENTACIONES
21. En la producción de antibióticos se emplean organismos miceliales y hay
Analice en su respuesta las diferencias y/o similitudes de ambas. Establezca la
razón por la que utilizaría una en lugar de la otra (la correlación de Michel y
Miller puede ayudarle en su decisión).
23. Se tiene un fermentador que opera en cultivo continuo de 10 1 y se
desea escalar a 1 000 1 y después a 100 000 1. Se han medido las propiedades
del cultivo: Ys, Y0, YK, jimáx, Ks, ke, Ccrít. Se desea anticipar, para cada
escala, los problemas de escalamiento por cambio de escala, considerando a)
kLa constante; b)P/V constante; c) efecto de la aeración, y d) crecimiento en
las paredes.
24. Un tanque de 100 000 1 (volumen total) con un motor de 200 kW
opera a 76 rpm, se desea emplear inicialmente un sustrato cuya viscosidad es
100 000 cP; el motor no es de velocidad variable. ¿Es posible emplearlo?
¿Por qué? ¿Qué cambios pueden sugerirse para que sirva?
METODOS DE ESTERILIZACION DEL MEDIO
DE CULTIVO Y DEL AIRE
25. En la determinación de la curva de sobrevivencia de E. coli con luz
ultravioleta (U.V.) y rayos 7 producidos por Co60, se obtuvieron los siguientes
resultados:
312 Problomas Pmttlfiima 313

k velocidad de muerte térmica (seg 1 )

U.V.
A constante de tipo Arrhenius = 10'6,a (seg ')
c

í N E = energía de activación = 2.83 X 105 (J/gmol)

(seg) (organismo/ml) = constante de los gases = 8.31 (J/gmol" K)
0
10
20
w cn 2.4
r-1

X 10"
1.07 X 107
ír O «o IR T = temperatura absoluta (°K)

28. En un proceso industrial se esteriliza el medio de cultivo por inyección

40 (2.9 - 3.7) 107 de vapor y posterior enfriamiento con agua. Los datos del caso 1 son
70 (2.2- 3.3) 105
100 (7.5 - 9.5) 103 representativos; se han propuesto algunos cambios en el proceso obteniéndose
los datos del caso II. En una autoclave (caso III) se alcanza un nivel de
Rayos y esterilidad adecuado para el mismo medio.
í N
(min) (organismo/ml)
Caso I Caso Ií Caso III
0 (3.7 - 4.4) 10" Tiempo
3.5 (2.1 - 2.4) 101 T (°C) tCQ T(°C)
4.0 (1.6 - 1.9) 107
4.5 (7.3 -
8.9) 106 0 24 28 26
6.0 (2.7 - 4.9) 10* 10 34 36 58
7.0 -
(1.1 1.6) 10* 20 48 48 90
10.0 -
(3.7 4.0) 105 30 64 70 121
40 81 121 121
50 97 121 80
60 103 105 48
70 113 90 30
La fuente de U.V. produce 2.7 X 10s erg/seg y la de rayos 7 4X 108 erg/min. 80 121 78 18
-
¿Cuál de las dos radiaciones es más efectiva?
Para una contaminación de 106 organismos/ml, ¿cuánto tiempo se requeri¬
90
100
110
120
121
114
106
99
68
60
52
47
-
—— V. 8. < .
ría de cada uno de los dos tipos de radiación? 130 92 42 —
26. Un caldo de cultivo de Pseudomonas psicrofílica ha sido contaminado 140
150
84
76
37
34
—-
con el mesófilo Bacillus subíilis (células vegetativas y esporas). Suponga que
hay 109 células/ml de Pseudomonas y 103 células/ml de B. subíilis (cuenta
viable):
a) ¿Qué tipo de curva de inactivación térmica se espera a 55°C y a Haga un análisis de los tres casos e indique qué cambios propondría y las
121°C? razones de los mismos.
b) ¿Qué tipo de curva de inactivación por radiación se puede postular?
PROCESOS DE SEPARACION Y PURIFICACION
c) Se desea cuantificar Pseudomonas por plateamiento.
¿Cómo se aseguraría de que B. subíilis no se incluya en la cuenta de células 29. Se utiliza una centrífuga tubular con un radio de 2.05 in y una altura de
viables? 12 in para separar 2 líquidos con densidades de 62 lb/ft3 y 63.91 lb/ft3 . Para
27. Se desea esterilizar continuamente 500 m3 de un medio que contiene obtener una separación satisfactoria es necesario que el fluido pesado permu
licor de cocimiento de maíz para la producción de gluconato de sodio. Un nezca en la centrífuga 5.5 seg y el ligero 4.0 seg. La relación volumétrica de los
experimento baích con 10 1 de este medio, con rápido calentamiento a la fluidos es 1: 1 . El espesor del líquido pesado es 3/4 in.
temperatura de esterilización de 121°C y un subsecuente enfriamiento rápido a) ¿Cuál es la capacidad de centrífuga, expresada como galones de alimenta
a temperatura ambiente, requirió de 90 seg para alcanzar una probabili¬ ción total/minuto?
dad suficientemente baja de sobrevivencia de un organismo. ¿A qué tempera¬ b) Determine dónde deberán localizarse las dos salidas de la centrífuga.
tura se deberá operar un esterilizador continuo si se desea operar con la misma 30. Se desea aumentar la capacidad de un filtro de vacío rotatorio.
probabilidad de esterilidad en un reactor de flujo tapón con un tiempo de Indique, tan exactamente como le sea posible, el porcentaje de aumento de
residencia de 35 seg y un flujo volumétrico de 0.033 m3/seg? Como base de su capacidad con los siguientes cambios:
cálculo, suponga que los contaminantes son esporas de Bacillus síearoíhenno- a) duplicación de la velocidad de rotación;
philus,cuya velocidad de muerte está dada por: b) duplicación de la concentración de alimentación;
c) duplicación de la caída de presión, y
k= a-e'rt d) duplicación de la distancia del espejo del líquido al fondo del cilindro.
314 Problemas Problomns 311»

31. Un filtro de hoja con 20 ft2 de superficie dio los siguientes resultados Suponiendo que el coeficiente de transferencia de masa es igual para la
a 50 psi: transferencia de 02 y CH„, estime:
a) la velocidad mínima del agitador a que se debe operar el fermentador, y
Tiempo
b) el flujo volumétrico de C1I4 y aire que debe ser mantenido.
Volumen
(minutos) filtrado (ft3) 34. Se quiere diseñar una planta que opera en forma continua para la
producción de levadura de pan. La capacidad diaria será de 5 000 kg de
15 100
30 163 levadura seca. Utilizando valores razonables para los diversos parámetros di;
45 213 diseño estime:
60 235 a) requerimientos diarios de melazas, amoniaco y ácido fosfórico;
90 258
b) tamaño del fermentador;
c) especificaciones del compresor de aire;
Se encontró que antes de la filtración el lodo tenía 5 Ib de sólido/ 100 Ib de d) especificaciones del motor de agitación;
líquido. Las densidades de los sólidos y de los líquidos son 78.5 lb/ft3 y 62.4 e) requerimientos de vapor, y
lb/ft3 respectivamente. La viscosidad del caldo es 2 cP. La pasta es de tipo f) gasto de agua (temperatura 18°C).
incompresible. 35. Se ha informado de numerosos sustratos para la producción de
a) Determine la resistencia específica de la pasta y la longitud equivalente biomasa; se indica, sin embargo, que cada proceso es diferente y que tanto el
de tela de filtro. organismo como las condiciones en que crece deben ser investigadas en forma
32. Cuál es la capacidad en galones/min de una centrífuga que opera en las particular. Considerando que se desea producir biomasa, ¿qué sustrato escoge¬
siguientes condiciones: ría usted para iniciar el estudio a nivel de planta piloto? ¿Qué cantidades de
Diámetro del rotor 24 in metano, metanol, etanol, n-parafinas, melazas, almidón, jugo del maguey y
Espesor de la capa líquida 3 in ácido acético se producen anualmente en el país? ¿Cuáles son sus precios de
Altura del rotor 16 in venta? ¿Qué ventajas técnico-económicas podría usted señalar para el sustrato
Velocidad 1 000 rpm de su elección? ¿Considera que su respuesta es general, o varía de acuerdo
Gravedad específica del líquido 1.3 con el país y la situación económica? Cite algunos ejemplos.
Gravedad específica del sólido 1.6 36. Se ha sugerido recientemente el uso de etanol como sustrato para l;i
Viscosidad del líquido 3 cP producción de biomasa. Se le llama a usted como asesor y se le plantea el
Tamaño de partícula 30 ¡i siguiente problema: se tienen melazas y por medio de fermentación alcohólica
se puede producir etanol, que será utilizado posteriormente para producir
PROTEINA UNICELULAR. ASPECTOS GENERALES biomasa. ¿Qué le parece la idea? ¿Aconsejaría que se realizase el proyecto7
33. Se ha aislado una bacteria que utiliza metano como fuente de carbono. Independientemente de su respuesta, indique por qué. Para el caso hipotético
Se propone usar un fermentador de 3 litros de volumen líquido en cultivo continuo señalado, ¿cuál sería el rendimiento Ys que se obtendría aproximadamente?
(I) - 0.2 h"1 y x = 10 g/1) para la producción de biomasa. Los resultados ¿Cómo se podría mejorar la proposición? ¿Qué otras opciones existen?
preliminares indican:
PROTEINA MICROBIANA A PARTIR DE LA CAÑA DE
YCh4 =0.3 g células/g CH4,Yq = 0.4 g célula/g 02 AZUCAR Y DE SUS SUBPRODUCTOS
Se lia estimado que las actividades críticas del metano y de oxígeno disueltos 37. Utilizando los datos de Saeman presentados en la tabla 10.5 y suponiendo
son: que se pudiesen aplicar al bagazo de caña (tabla 4), calcule usted cuál sería la
Actividad crítica para metano 0.05 atm cantidad de azúcares que se produciría para cada kg de bagazo que se
Actividad crítica para oxígeno 0.02 atm introdujese en un reactor que opera a 19°C, 1.2% de ácido sulfúrico y con un
HI fermentador se airea a 1.5 VVM con aire (20.9% 02, 79.1% N2) que se tiempo de residencia de 3 min. ¿Qué haría usted con el bagazo que no se hidro-
mezcla con metano puro. El coeficiente de transferencia para el fermentador a liza? ¿Recircularlo al tanque? ¿Por qué?
1.5 VVM es: 38. La figura 10.8 presenta los resultados obtenidos por Dunlap et al., al
tratar el bagazo con álcali: ¿Por qué tienen las curvas esa forma? ¿Cuál sería
N(rpm) kLa(h~l) la condición óptima, considerando que un gramo de sosa es 100 veces más
caro que un gramo de bagazo? Haga algunos comentarios sobre lo que
400 200 significa, técnica y prácticamente, tener que someter los recursos celulósicos a
500 350
700 900 un pretratamiento.
1100 2500 39. Se han efectuado estudios en planta piloto con el objeto de podei
316 Problemas Prnhlomns 317

diseñar una planta que produzca 10 000 ton/año de biomasa (C. utilis Ys = S Productividad
q x SQ- S
0.5). Para ello se emplea bagazo de caña (70% celulosa), que será hidrolizado (gf¡ (h V (n/1) (K/l) (K/I-It) y-
con celulasa de T. viride, producida por un sistema de cultivo continuo de dos
tanques en serie. Después la enzima es preconcentrada e inyectada a un tanque 24 0.096 9.4 18.0 0.91 0.25 0.59
de hidrólisis continua de donde pasa finalmente al fermentador. Con tanques 25 0.105 4.4 12.0 0.47 0.52 0.34
de 400 1 se obtuvieron los siguientes datos: 5 0.20 0.871 * 0.162 * *
10 0.0532 6.24 * 0.512 * *
* No reportado.

Producción de celulasa de T. viride (30°C, pH 9.8)

¿A qué se debe la baja eficiencia de utilización de bagazo?
Fermentador de crecimiento Fermentador de producción ¿Qué medidas tomaría para mejorar el proceso?
ae enzima
¿Cuál es el programa de investigación y desarrollo que sugeriría para el
I) X S D Actividad enzimática fermentador de 400 1 con objeto de optimizar el proceso?
(h "V (g/D (g/l) (h-1) (unidades/ml)
0.10 5.0 0.1
TECNOLOGIA ENZIMAT1CA
0.0125 2.4
0.15 5.0 0.1 0.015 2.05
0.20 4.6 0.1 0.0185 2.6 41. La penicilina G puede convertirse al ácido 6-aminopeniciliánico por la
0.25 3.4 2.0 0.02 2.54 enzima penicilina amidasa. Con los siguientes datos derive una ecuación que
0.27 3.0 3.8 0.025 1.44 describa la conversión en el estado estacionario y calcule después las conversio¬
nes para las condiciones dadas.
Hidrólisis de bagazo de caña con celulasa de T. viride ¿Qué ventajas o desventajas produce cambiar la velocidad de flujo? ¿Sería
(50°C, pH 4.8, S0 = 100 g/l) deseable alterar la KM aparente de la enzima inmovilizada utilizando para ello
un soporte catiónico o aniónico?

Actividad enzimática % de hidrólisis en diferentes tiempos Condiciones experimentales del reactor

(unidades/ml) 20 h 30 h 40 h
de la penicilina amidasa
1.0 39.14 50.21 57.60 inmovilizada 6 X 10"3 M
2.72 64.98 75.32 81.97 Volumen del reactor 101
3.25 73.11 81.97 88.61
4.26 77.54 Velocidad de flujo 200 1/h
85.66 90.83
4.41 81.97 89.35 94.52 Carga de enzima 3.5 X 104 unidades/1
Actividad específica 300 unidades/mg
Penicilina alimentada 8 g/1
Unidades de la enzima p Mol de penicilina
En todos los casos las unidades/ml equivalen a mg de azúcares producidos/ml hidrolizada por
de cultivo-hora. minuto
Calcule las dimensiones que deberán tener los cuatro tanques para poder
producir la biomasa estipulada. Haga además el balance de materia para todo 42. Desea usted analizar el potencial del uso de enzimas en detergentes.
el sistema. Considere que todos los tanques serán agitados según la siguiente Como consultor de una compañía interesada, exponga usted desde el punto de
relación: H/DT = 3, y calcule la potencia requerida. vista de la ingeniería bioquímica, la microbiología aplicada y la enzimología
¿Qué experimentos haría usted antes de iniciar la construcción de una aplicada a lo siguiente:
planta industrial? a) características deseables de la enzima (Le. modo de acción, método de
¿Cómo podría mejorarse la producción de enzima y la hidrólisis enzimá- utilización, etc.);
tica? b) métodos de producción de la enzima (Le. producción, recuperación,
Indique claramente las suposiciones que haga y el fundamento de sus etc.), y
cálculos. c) uso futuro de estas enzimas-detergentes (¿Existen otras enzimas que se
40. En un fermentador de 400 1 crece una bacteria que utiliza bagazo de pudieran utilizar en lugar de las que actualmente se emplean? Diga cuáles.)
caña. Se opera el cultivo de forma continua y se obtienen los siguientes datos: 43. Una columna con aminoacilasa inmovilizada en DEAE-Sefadcx se pone
Con los resultados experimentales diseñe una planta de operación continua en una columna de 2.5 X 45 cm2 (220 ml de volumen) y se compara con un
que produzca 1 000 ton/año de bacteria (peso seco). reactor de lote que utiliza enzima nativa. Con base en los siguientes datos,
¿Qué problemas espera usted encontrar al escalar? diga usted cuál sería el mejor sistema para producir 120 kg de metionina/año.
318 ProhlonuH 310

¿Cuáles pueden ser las causas de las diferencias entre ambos tipos de opera¬ Medio A Medio II
ción? Componente (i/0 (k/D
Harina do soy» 33 30
Aceite do soya 0 3
Malta 10
Metionina obtenida (kg) Dextrosa 50
Almidón 25
Tiempo de Enzimas Manteca de coco 1 1
operación * usadas* Proceso en Proceso en Sales
columna batch
0.01 0.01
(días) (unidades)

30 1 221 5.13 0.82

60 488 5.13 0.33
90 488 5.13 0.33 ¿Cuál es la función que desempeña cada componente?
46. Un fermentador con las siguientes características: transferencia de
* Igual para ambos sistemas.
oxígeno = 500 mAf/l-h; eliminación de calor= 12 000 cal/l-h, se usa partí
una fermentación que utiliza metanol. ¿Cuál es la máxima productividad en
continuo y en batch? ¿Se puede cambiar por metano sin que disminuya la
44. La siguiente tabla presenta los datos obtenidos al adsorber una enzima
productividad? ¿Cuál es la velocidad de dilución máxima en que opera l)con
A en DEAE-Sefadex en una columna; después se midió su actividad en dife¬
metanol y 2) con metano? Especifique todas las suposiciones necesarias paru
rentes condiciones.
la solución del problema.
47. Suponiendo que un organismo contiene:
C 45%
Hidrólisis del sustrato" H 8%
Actividad de O 30%
Cantidad* Adsorción y que todo el sustrato es convertido a células, C02 y agua, calcule los gramos
de enzima de la la enzima
carga enzima SV = 4 SK = 5 SV = 6.7 en la columna de 02 requerido para hacer crecer 100 g de células en los siguientes sustratos
MM/h) % % % % nMfh*** con los siguientes rendimientos:
1 500 100 65 53 43 2 953 glucosa 45% 35%
3 000 100 90 78 67 4 040 etanol 40% 70%
4 500 88 87 76 63 3 799
80 86 74 65 3 920 hexadecano 80% 100%
6 000
7 500 71 85 70 62 3 739 48. Un fermentador que opera en forma continua con etanol, Ks := 0.5,
9 000 64 87 69 61 3 678 D = 0.4 h-1, x = 20 g/1, T = 30°C, produce biomasa. Se desea cambiar el
A 9 mi de una columna de DEAE-Sefadex se le pasaron de 15a 450 ml (1 500 - 9 000)
sustrato a hexadecano y operar en las mismas condiciones. El gasto de agua de
*
mM/1 de una solución de enzima, con un flujo de 45 ml/h a 25°C enfriamiento está a su máximo. ¿Se puede hacer el cambio de sustrato sin
** SV = 1/tiempo de residencia. afectar la productividad? ¿Cuál es la capacidad de transferencia de oxígeno
*** La actividad de la columna se expresó a un SV de 6.7.
requerida en cada caso?

CINETICA ENZIMATICA
Una columna de 9 ml que opera a SV = 6.0, ¿qué cantidad de enzima
cargaría? ¿Cuál sería el porcentaje de absorción, hidrólisis y actividad de la
columna?
49. Determine Vm¿x y KM para la siguiente cinética.
Si la columna fuese de 90 mi (con similitud geométrica y SV de 4), ¿qué
datos esperaría usted obtener?
S V observada
mM mtA/min
BALANCE DE MATERIA Y ENERGIA EN FERMENTACION 0.25 0.18
0.333 0.30
45. Se utiliza el siguiente medio para una fermentación aeróbica. Como se 0.50 0.35
desea hacer algunos cambios en su composición es necesario calcular el 1.0 0.48
rendimiento de sustrato, de oxígeno y de desprendimiento de calor. ¿Cuál será 2.0 0.80
4.0 0.82
la concentración de biomasa máxima? ¿Cuál es el elemento limitante?
320 Problemas Problnmaa 321

50. Indique usted el tipo de inhibición que hay en la siguiente cinética y (íasto = 10 0001/h
calcule los valores de KM y K¡: DBO = 1 g/|
ÿnáx = °-2h"'
ks =35 mg/l
P/min
Se cuenta con dos tanques para el pretratamiento de las aguas. Uno de ellos tiene
A 40 mM del
inhibidor un volumen de 10 000 1 y el otro de 40 000 1. Suponiendo que ambos tanques
mM sin inhibidor
tienen un mezclado ideal, determine:
1.5 0.21 0.08 a) el orden óptimo de colocación de los tanques en serie;
2.0 0.25 0.10
3.0 0.28 0.12 b) la concentración de salida de los dos tanques en serie, y
4.0 0.33 0.13 c) la mejor decisión para la industria si la operación y el mantenimiento de
8.0 0.44 0.16 los tanques es de $ 100/1 000 1-día y la autoridad local cobra a razón de
16.0 0.40 0.18
$ 30/kg BOD que se descargue.
54. En un tanque de tratamiento de aguas de 100 000 I se lleva a cabo una
prueba de transferencia de oxígeno. Los resultados obtenidos aparecen en la
5 1 . Una enzima tiene un KM de 6.3 X 10"5 M. Si Vma-X de la solución es 20 siguiente tabla:
/iA//I-min, ¿qué velocidad se observará en la presencia de 2 X 10 M sustrato
y 5 X 10"4 M de: a) un inhibidor competitivo, b) un inhibidor no competitivo,
y c) un inhibidor anticompetitivo. En los tres casos K, es 3 X 10 M. ¿Qué Concentración promedio de 02 disuelto (mg/l)
grado de inhibición hay en los tres casos?
52. La D-serina dehidratasa de N. crassa requiere fosfato de piridoxal como Flujo de aire (l/min.)
coenzima. La enzima cataliza la reacción: Tiempo
(min.) 1500 3 000 5 000 7000
ch2oh.chnh2 .cooh -»ÿ CH3CO.COOH + nh3 0 0 0 0 0
1 0.71 1.36 1.83 2.11
Los datos siguientes fueron obtenidos en un experimento para determinar la 2
3
1.36
1.94
2Al
3.38
3.22
4.26
3.62
4.71
curva de saturación de la enzima en fosfato de piridoxal: 4 2.47 4.13 5.05 5.50
5 2.95 4.74 5.65 6.06
6 3.38 5.24 6.10 6.46
7 3.78 5.65 6.44 6.76
Concentración 8 4.13 5.99 6.70 6.46
Moles de ácido 9
pirúvico formado de fosfato de 4.45 6.26 6.90 7.12
piridoxal X 10* M 10 4.74 6.48 7.04 7.22
en 20 minutos
0.150 0.20
0.200 0.40
0.275 0.85
0.315 1.25 Siendo el aire distribuido sólo por difusores, determine:
0.340 1.70 a) el valor de kLa, y su ecuación empírica. Compare el valor de p con el
0.350 2.00 obtenido en tanques de fermentación;
0.360 8.00
b) determine la eficiencia de transferencia de oxígeno en cada caso ( 20" C
760mm Hg);
c) explique la relación entre kLa y la eficiencia de transferencia de oxí¬
Determine la constante de Michaels-Menten para la enzima D-serina dehidra- geno; analice las implicaciones económicas, y
tada con respecto al fosfato de piridoxal. d) exponga brevemente los valores relativos de k¡ a y su significado desde
el punto de vista de diseño.
TRATAMIENTO DE AGUAS POR METODOS BIOLOGICOS 55. Una planta de lodos activados opera con 1111 flujo de I06 l/lir n un
tanque de tratamiento de 10' I de volumen. La concentración de los coin-
53. Una pequeña industria produce agua con un DBO de 1 g/1. Las aufori- puestos orgánicos contaminantes os de I 000 mg/l. Todos los compuestos
dades locales van a tratar el agua y cobrarán con base en la descarga de orgánicos contaminan les son oxidados durante el tratamiento, lil efluente del
DBO/día. Las características del agua son: lialamienlo entra ¡1 un lauque de asentamiento mezclado donde los lodos
322 Problamos 1 Problemas 323

activados son floculados para su recirculación. Teóricamente el sobrenadante CONSUMO DE ENERGIA POR AGITACION Y AERACION EN
no contiene microorganismos. SISTEMAS DE FERMENTACION
Las condiciones de operación reales son:
57. Un fermentador de 30 000 1 (volumen de operación 20 000 1) se empica
Flujo al tanque de tratamiento 10® 1/h para la producción de levadura. El sistema tiene dos impulsores, y la relación
Concentración de células floculadas altura/diámetro del tanque es 2. Se usan turbinas de seis aspas planas con
para recirculación 10 000 mg/1
105 1/h. relaciones éstandar. Los agitadores operan a 50, 70 y 85 rpm y las velocidades
Flujo de recirculación
de aeración son 200 y 300 m3/h .
a) Calcule la potencia (sin aeración) requerida a diferentes velocidades de
La porción de células que flocula pero no se recircula se descarga para su
agitación. Exprese su respuesta en HP/1 000 galones, y diga cuál es el tamaño
eliminación. Suponga que en las condiciones presentes la velocidad de creci¬
de motor requerido.
miento de los lodos activados esté en su valor máximo;
b) Calcule la potencia con aeración usando la correlación del número de
a) determine la velocidad máxima de crecimiento;
b) ¿cuál es la concentración celular en el tanque? , y
aeración, Na, así" como la de Michel y Miller. ¿Cuál puede ser una causa de las
c) ¿cuál es el flujo (en masa) de los lodos activados para su eliminación? diferencias?
58. En un tanque de geometría estándar (H/D = 1 ; un agitador de seis
Introduciendo oxígeno en la misma planta se pueden flocular lodos a una
concentración de 40 000 mg/1. Suponiendo que se puede mantener la velo¬ aspas planas; etc.) con un volumen de 20 000 1 se obtuvieron los siguientes
cidad de crecimiento máxima con la misma recirculación, determine: resultados:
d) el aumento de flujo que puede manejar el tanque de tratamiento, y
e) la nueva concentración celular en el tanque.
Datos adicionales: Velocidad Velocidad de Flujo di-
La concentración de contaminante es constante: 1 000 mg/1. El rendi¬ del impulsor absorción de O 2 Potencia medida aire
miento del contaminante es de 80% del de levadura.
(rpm) (mM/l-h) (kW-h/kg levadura) (m'/h)
56. Las aguas de una industria orgánica van a ser tratadas por el método 50 16.7 0.475 200
de lodos, para lo cual se hicieron algunos experimentos en un reactor con un 70 19.4 0.615 200
85 23.7 0.572 200
volumen de operación de 1 litro. 50 21.8 0.528 320
70 26.3 0.589 320
85 27.8 0.615 320
85 39.0 0.610 600
Experi¬
mento
(mgSo
} DBO )
\ / s \ /[ * \)
mg DBO I mg SSLM t
/ SVI \
(mi)
(Q°A ( F*x>\
1(mgOj SSLM
mg

(Nútn) V < / \ < / \ / / N \gSSLM) \ l-día I\ día

La concentración de 02 disuelto fue esencialmente O cuando se midieron las
1 800 100 1 200 10 250 1 320 960 velocidades de absorción de oxígeno. La concentración de saturación de
2 750 50 1 500 15 175 975 600 oxígeno disuelto a 0.21 atm de presión parcial fue de 7.2 mg 02/l-h.
3 750 30 1 000 40 80 440 200
4 750 20 1 000 50 110 350 150 a) Usando los datos anteriores encuentre una correlación para el kL a en
h"1 y la potencia por unidad de volumen (HP/1 000 galones), y la velocidad
superficial (ft/h).
El diseño del tanque de lodos activados se hace con base en: b) ¿Cómo compara la potencia consumida experimentalmente con la
Flujo de agua contaminada F = 8 360 m3/día calculada?
Concentración de materia orgánica 59. Las propiedades Teológicas de un caldo de fermentación fueron me¬
en el agua contaminada S0 = 85 mg DBO/l didas con un viscosímetro Brookfield. Los siguientes datos se obtuvieron a las
Concentración de materia orgánica 114 horas de la fermentación de ácido giberélico con tres diferentes tamaños
en el agua de salida S = 30 mg DBO/l
Concentración de lodos activados de cilindro, A, B y C:
en el tanque de aeración X= 3 000 mg SSLM/1
Velocidad de corte, A (seg ) 949.6 491.2 627.8 475 318
¿Cuál es el volumen necesario del tanque de aeración? Esfuerzo de corte (g/cm seg2) 49.6 43.2 37.3 31.6 28
¿Flujo de los lodos de recirculación y del exceso formado? Velocidad de corte, B (seg"' ) 327.7 273.6 216.6 163.9 108.7
¿Cuál es la velocidad de consumo de 02 y el coeficiente de transferencia Esfuerzo de corte (g/cm segJ) 27.7 26.5 24.1 20.9 17.0
de ()2 , necesario para el tanque de aeración? Velocidad de corte, C (seg 1 )
"
203.8 170.2 139.7 101.9 68.23
¿Cuál es el valor de Ys y de m en el sistema? Esfuerzo de corte (g/cm seg1 ) 26.0 20.7 18.7 17.0 15.3
 Y
324 Problemas Prob/omus 32b

Determine el tipo de fluido y los parámetros del modelo de potencia. Tiempo Oxigeno
60. Un fermentador de tipo air-lift se llena con agua hasta una profundidad 11&~ d¡suelto
de 35 m, antes de ser aireado. El aire se suministra a través de burbujeadores (ppm)
con orificios. La fracción que se absorbe es pequeña y el aire sale a 1.5 atm 0 5.2
de presión. La operación se efectúa a 30°C y la velocidad del aire es de 5.5 10 5.2
20 5.2
irt/min (a 1.5 atm y 30° C). La caída de presión a través de los orificios es de
í2 psi. Calcule la potencia del compresor considerando una eficiencia total de
30
40
5.2
4.7
Se cortó el uirc
CtrfL
- —
jfóv-'
65%.- Exprese el P/V del sistema en HP/1 000 galones y kW/1 000 1. 50 4.2
\ ii \
60
70
80
90
3.7
3.1
2.6
2.0
YS *
Vv
100 1.5
DETERMINACION EXPERIMENTAL DE LA TRANSFERENCIA
110 0.9 Se reinició la aeración
120 2.8
DE OXIGENO EN UNA FERMENTACION 130 3.8 n Vi
140 4.2 ÿ -é lili
61. En un fermentador de 5 litros se hizo la prueba del sulfito para deter¬ 150 4.4
160 4.5
minar el kLa. El experimento se realizó en las siguientes condiciones:

Encuentre usted: k, a, Qo2x> y Cg*

Temperatura del aire 29°C
Temperatura del agua del fermentador 30°C 63. Se carga un fermentador de 500 1 con un medio de cultivo y se
Flujo de aire 1 VVM empieza a introducir aire; la temperatura es de 30°C y el pH de 5. Para
Volumen de líquido 3 litros determinar el kLa se emplea la técnica de eliminación de gas con nitrógeno. Se
Velocidad de agitación 300 rpm obtuvieron los siguientes resultados.
Normalidad del tiosulfato
usado en la titulación 0.5 N

Tiempo Oxigeno
Las muestras se tomaron cada 5 minutos, y se obtuvieron los siguientes (segundos) disuelto
(ppm)
resultados:
0 3.7
20 3.7
30 3.7
40 3.7
Volumen de Volumen de 50 3.7
Muestra muestras tiosulfato usado 60 3.7 Se corta aire e introduce N,
num. (mi) (mi) 70 3.2
80 1.8
1 5 21 90 0.8
2 5 20.7 100 0.15 Se introduce aire
3 5 20.35 110 1.7
4 5 20 120 2.41
5 5 19.7 130 2.9
6 5 19.3 140 3.2
7 5 19.0 150 3.3
8 5 18.7 160 3.41
9 5 18.7 170 3.52
10 5 18.7 180 3.59
190 3.61

¿Cuál es el valor de kLa? ¿Cuál es el k( a?

62. Usando un electrodo de oxígeno disuelto en un fermentador con 64. Usando el método del balance de U2 en un fermenladór de 9 litros, u
levadura, se obtuvieron los siguientes resultados con la técnica dinámica: 29°C que opera n 120 rpm se obtuvieron los siguientes datos para 0.5 VVM.

L
326 Problemas

'"•¡t 4f
Tiempo Oxigeno disüelto en el aire de salida
fermentación (ppm) (%)
0 t 21
1 5-90 20.95
2 5.85 20.90
3 5.70 20.85
4 5.42 20.70
5 5.00 20.55
6
7
4.40
3.72
20.40
20.10
Indice analítico
8
9
2.80
1.65
. . ' 19.60
18.90
10 1.28 18.50
11 1.35 18.70
12 1.92 19.30

Determine el valor de kLa.

METODOS DE INMOVILIZACION ENZIMATICA

65. Haga usted una revisión bibliográfica de los diferentes soportes que han
sido utilizados para la inmovilización de la glucosa isomerasa. Indique sus
características físicas (tamaño de poro, densidad, etc.) y químicas (solubilidad,
grupo reactivo, etc.) y proponga el que usaría usted.
66. Investigue cuáles son los métodos de inmovilización más usados cuando
A Antibióticos, 22, 133
se piensa montar columnas de escala industrial. ¿Cuáles son los criterios que se Area interfacial, 82
deben seguir en estos casos? Acido Arilsulfatasa, 199
67. Si se pudiera sintetizar un soporte "ideal", ¿qué características pediría cítrico, 36 Arrhenius, ecuación, 34, 234
usted, tanto físicas como químicas? De los soportes que conoce, ¿tiene glutámico, 1 11 Asparaginasa, 214
nucleico, 135, 136 Aspergillus, 32, 165
alguno esas características? ¿Cuál? A. niger, 34, 83, 159
orgánico, 22, 133
68. Para una reacción del tipo: Atrapamiento, técnica, 196
Acilasa, 23, 196
Actividad celulolítica, 190 Autocatálisis, 65
Adsorción, 196
Aeración, 59 B
consumo de energía, 269 Bacillus cereus, 124
número de, 275 B. lincheniformis, 24, 1 24
se desea inmovilizar ambas enzimas en un soporte no poroso, por unión Aerobacter aerogenes, 34, 61, 65, 67, 69, B. megaterium, 120, 124
72, 124 B. mycoides, 120, 124
covalente. Ambas enzimas se distribuyen uniformemente y la reacción se A. cloacae, 36 B. natto, 120
puede considerar de primer orden. Agentes B. stearothermophilus, 120
El soporte tiene carga positiva, el reactivo A, negativa, y el B positiva. floculantes, 134 B. sub t¡lis, 94, 118, 120, 124
¿Cuáles serán los cambios de KM aparente? ¿Qué perfil de pH se obtendrá? mutagénicos, 59 B. thermoacidurans, 1 20
químicos, 176 Bagazo, en la producción de SCP, I 79
¿Cómo afectará la velocidad de agitación a la velocidad de reacción? Agitación, 59 Bafies, 87. 89
consumo de energía, 269-279 Bernoulli, teorema de, 277
Aislamiento, técnicas, 20 Biomasa (ver prote¡na microbiana)
Alcaligenes, 164 Calor húmedo, en la esterilización. 1 16
Alcalino-fosfatasa, 199 Calor seco, en la esterilización, 1 16
Alcoholes, 22
Amilasa 23. 201
.
Candida 32, 165
C. intermedia, 94
Aminoácidos, 22, 133 C lipolytica, 158
1,-aminoacidacilasa, 201 C. tropicalis, 158
-aminoácido oxidasa, 199, 214
Aminogruma, 157
.
C milis 34. 37. 83, 94, 105, 158, 178,
191

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