INHIBIDOR DE LA PROTEASA LEUCOCITARIA SECRETORA (SLPI)

El inhibidor de la proteasa leucocitaria secretora (SLPI) es una proteína de inmunidad innata que

presenta propiedades antimicrobianas y antiinflamatorias, de cadena

sencilla altamente catiónica con ocho enlaces disulfuro intramoleculares que se encuentran en

altas concentraciones en la saliva.

Descrita por primera vez como un inhibidor de serina proteasas como la elastasa de los neutrófilos,

esta proteína se reconoce cada vez más como una molécula que beneficia al huésped a través de sus

actividades antiproteolíticas, antimicrobianas e inmunomoduladores. Control mediado por SLPI

que protegen al huésped de la inflamación excesiva / desregulada típica de enfermedades

infecciosas, alérgicas y auto inflamatorias y que respaldan las respuestas de curación al afectar la

proliferación celular, la diferenciación y la apoptosis.

Estás células se encuentran en una variedad de superficies de la mucosa. Por ejemplo, vesículas

seminales, próstata, epidídimo y cuello uterino, en células serosas de la parótida y glándulas

salivales submandibulares, en el tracto respiratorio superior, en las glándulas lagrimales, en

glándulas en la base de la lengua y en las células submucosas del esófago. Recientemente, SLPI

se encontró en las células de Paneth en el intestino delgado.

La proteína llamada SLPI fue identificada por el sueco Kjell Ohlsson. Desde el descubrimiento

del VIH, en 1981, el mayor temor ha sido que la enfermedad pudiera transmitirse por la saliva.

Según los científicos, los pocos casos de VIH que han sido transmitidos involucran la saliva

mezclada con sangre y otros casos tienen que ver más con sexo oral que con los besos.
Se cree que SLPI es un regulador inflamatorio con una fuerte capacidad inhibidora dirigida a

proteasas presentes en diversos fluidos corporales. Por lo tanto, SLPI es un potente inhibidor de la

elastasa y catepsina G leucocitaria, y un inhibidor moderado de la tripsina y la quimotripsina.

Es un inhibidor moderado de la elastasa pancreática, y también se sabe que inhibe tanto la actividad

quinasa de los mastocitos como la liberación de histamina de los mastocitos. Se sabe que su

actividad inhibidora de proteinasas está localizada en el segundo dominio COOH-terminal.

Aunque no se ha detectado capacidad inhibitoria en el dominio NH2-terminal, se ha informado

sobre la capacidad antimicrobiana. También se ha informado que SLPI bloquea el virus de la

inmunodeficiencia humana tipo 1 mediante el bloqueo de la síntesis de ADN. SLPI está

probablemente involucrado en la regulación inflamatoria en los intestinos, así como en los tractos

respiratorio y urogenital. En pacientes con colitis ulcerosa, se han encontrado protecciones

pancreáticas activas en las heces.

En la saliva humana ha demostrado que puede bloquear el virus del sida y evitar la

infección de las células humanas. El hallazgo fue hecho en el Instituto Nacional de Investigaciones

Dentales de Bethesda (Estados Unidos). Los científicos encontraron que la proteína no ataca

directamente al VIH, sino que actúa indirectamente, como una especie de barrera que protege

contra la infección del virus a dos tipos de glóbulos blancos: los monocitos y los linfocitos, explicó

la doctora Sharon Wahl.

En un trabajo de laboratorio, los científicos encontraron que cuando agregaban SLPI a los tubos

de ensayo que contenían VIH y glóbulos blancos, los virus no lograban adherirse a la superficie

de las células y por consiguiente no las podían infectar. También encontraron que muy pequeñas

cantidades de SLPI lograban un efecto altamente protector. Hasta el momento se piensa que la

proteína anti-VIH es un protector natural contra las enzimas que destruyen otras proteínas del
organismo humano. La SLPI se encuentra en la mayoría de las membranas mucosas y en la sangre,

pero en muy bajas cantidades.

La fibrosis pulmonar idiopática es una enfermedad progresiva y mortal con opciones de

tratamiento limitadas. Se ha propuesto la activación del factor de crecimiento transformante

mediado por proteasa-β (TGF-β) como un mecanismo patogénico de la fibrosis pulmonar. La

actividad de la proteasa en el pulmón está estrechamente regulada por inhibidores de la proteasa,

particularmente el inhibidor por proteasa leucocitaria secretora (SLPI).

La actividad de la proteasa en el pulmón está regulada por varios inhibidores de la proteasa. El

inhibidor de la proteasa leucocitaria secretora (SLPI) es una proteína de 11,7 kDa que contiene un

sitio inhibidor de la proteasa localizado en la leucina en el dominio carboxi terminal. El SLPI es

predominante en células epiteliales y, en ausencia de SLPI, la actividad elastolítica en las heridas

dérmicas y de la mucosa se ha mejorado, dando como resultado un TGF-β activo mejorado,

reparación prolongada de heridas y cicatrización aumentada, lo que sugiere que las proteasas

pueden activar TGF-β y promueve la fibrosis.

La expresión diferencial del inhibidor de la proteasa leucocitaria secretora (SLPI) tiene un impacto

en la progresión tumoral. El SLPI inhibe directamente la elastasa y otras serinas proteasas, y regula

las metaloproteinasas de la matriz.

El aumento de los niveles de SLPI previene las infecciones por el virus del papiloma

humano (VPH) y la metástasis en el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello inducido

por el tabaquismo (HNSCC). Aquí, nos centramos en el papel de SLPI en HNSCC no-HPV, que

investiga el tejido tumoral y la mucosa no neoplásica de los mismos pacientes y de pacientes que

no son HNSCC.
La expresión de genes y proteínas de SLPI y la expresión génica de anexina 2 (un receptor SLPI),

receptor de nicotina (a7AChR) y receptor de hidrocarburo de arilo (AhR) se analizaron en

pacientes HNSCC (20 fumadores, 16 no fumadores). Los resultados de SLPI se correlacionaron

con el estado de VPH de los pacientes. Mucosa no neoplásica de pacientes con HNSCC y mucosa

normal de individuos no HNSCC (18 fumadores; 20 no fumadores) se analizaron para los mismos

parámetros. El tejido del cornete inferior (n = 10) se incubó con nicotina para el análisis de los

mismos genes.

La expresión del gen SLPI en tejido tumoral fue 109.26 6 23.08 veces mayor en fumadores versus

no fumadores. La mucosa no neoplásica de los fumadores también mostró una mayor expresión

del gen SLPI (10.49 6 1.89 veces no HNSCC, 18.02 6 3.93 veces pacientes HNSCC). La expresión

del gen de la anexina 2 también aumentó en los fumadores. Los datos SLPI fueron corroborados

por inmunohistoquímica. La nicotina y el fumar aumentaron la expresión del gen a7AChR y AhR.

Cinco pacientes, que mostraron una expresión baja / baja de SLPI, fueron positivos para HPV16.

Se estableció una correlación significativa entre el tabaquismo y la expresión de SLPI en tumores

y nuestro conocimiento por primera vez en pacientes con HNSCC y no HNSCC. Junto con el

hallazgo de que todos los pacientes con infección por VPH no mostraron / baja la expresión de

SLPI, estos datos respaldan nuestra intrigante hipótesis de que el tabaquismo inducido por aumento

de la SLPI previene las infecciones por VPH.

INHIBIDORES TISULARES DE METALOPROTEINASAS

Los inhibidores tisulares de las metaloproteinasas (TIMP) son reguladores proteicos endógenos de

la familia de las metaloproteinasas de la matriz (MMP), y también de familias tales como las

metaloproteinasas desintegrinas (ADAM y ADAMTS). Por lo tanto, los TIMP tienen un papel

fundamental en la determinación de la influencia de la matriz extracelular, de las moléculas de

adhesión celular y de muchas citocinas, quimiocinas y factores de crecimiento sobre el fenotipo

celular.

Hasta el momento, se han caracterizado cuatro miembros de la familia de inhibidores de tejido de

metaloproteinasas (TIMP), designados como TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3 y TIMP-4.

TIMP-1 y TIMP-2 son capaces de inhibir las actividades de todas las metaloproteinasas de matriz

conocidas (MMP) y, como tales, juegan un papel clave en el mantenimiento del equilibrio entre la

deposición y degradación de la matriz extracelular (ECM) en diferentes procesos fisiológicos. La

degradación acelerada de la MEC se produce en diversos procesos patológicos, que incluyen

inflamación, enfermedades degenerativas crónicas e invasión tumoral. TIMP-1 y TIMP-2 pueden

inhibir el crecimiento tumoral, la invasión y la metástasis en modelos experimentales que se han

asociado con su actividad inhibidora de MMP. Ambos inhibidores muestran una actividad similar

al factor de crecimiento y pueden inhibir la angiogénesis.

TIMP-1 también ha sido implicado en la esteroidogénesis gonadal y como un factor de elongación

celular.

TIMP-3 es el único miembro de la familia TIMP que se encuentra exclusivamente en la matriz

extracelular (ECM). Se regula en una moda dependiente del ciclo celular en ciertos tipos de células

y puede servir como un marcador para la diferenciación terminal.

El TIMP descubierto más recientemente, TIMP-4, puede funcionar de una manera específica de

tejido en la hemostasia de matriz extracelular.

Los TIMP humanos comprenden de 184 a 194 aminoácidos que forman un dominio N y un

dominio C que están estabilizados por seis enlaces disulfuro. Los TIMPs son aproximadamente

40% idénticas y tienen capacidades superpuestas para inhibir MMPs individuales. Su dominio

amnio-terminal es el dominio inhibitorio y se une al sitio activo de las MMP. Las MMP no forman

enlaces covalentes con los TIMP.

Los TIMP muestran expresión específica del tejido, constitutiva o inducible, que está

regulada a nivel transcripcional por diversas citoquinas y factores de crecimiento. TIMP1 se

expresa ampliamente en muchos tejidos de mamíferos, especialmente en los órganos

reproductores. En el sistema nervioso central, la expresión de TIMP1 está restringida a regiones

de plasticidad neuronal persistente, como el hipocampo, el bulbo olfatorio y el cerebelo. TIMP2

se expresa constitutivamente en la mayoría de los tejidos, pero no es inducible por factores de

crecimiento comunes. TIMP3 se expresa en muchos tejidos y se encuentra a menudo como una

proteína de matriz significativa en las membranas basales del ojo y el riñón. La distribución tisular

relativamente restringida de TIMP4 (en el corazón, riñón, ovario, páncreas, colon, testículos,

cerebro y tejido adiposo) sugiere que desempeña un papel en las funciones fisiológicas específicas

del tejido.

La inhibición mediada por TIMP de la actividad de MMP es un determinante importante de la

función celular, pero el concepto de regulación TIMP independiente del comportamiento celular

ahora está respaldado por la identificación de socios de unión celular específicos para miembros

de la familia TIMP y eventos de señalización específicos que involucran estas proteínas. Se ha

demostrado que los mecanismos de señalización celular mediados por TIMP1 y TIMP2
promueven la proliferación celular, aunque los eventos mediados por el receptor que están

implicados no se conocen bien. TIMP1 tiene efectos antiapoptóticos en algunos tipos de células,

posiblemente actuando potenciando las actividades de supervivencia y los factores de

diferenciación en una red de señalización mediada por la tetraspanina CD63 y por adhesión focal

quinasa, fosfoinositida 3-quinasa y ERK. TIMP2 se une a la integrina α3β1, lo que lleva a la

detención del crecimiento de la fase. TIMP3 tiene actividades conflictivas según el tipo de

celda. En algunas células, parece promover el desarrollo de un fenotipo transformado: TIMP3

promueve la apoptosis en varias líneas de células tumorales y en células de músculo liso, pero esto

parece implicar la modulación de actividades de metaloproteinasas, pero otros TIMP intervienen

directamente en las vías de señalización que conducen a la regulación del crecimiento, la apoptosis

y otras actividades. Las concentraciones de TIMP1 están aumentadas en pacientes con cáncer,

particularmente en aquellos con carcinoma de mama o colorrectal, y este aumento se asocia

negativamente con el resultado del paciente. Los estudios han demostrado la utilidad clínica de

TIMP1 como biomarcador y factor de pronóstico independiente en cáncer de mama, colorrectal y

varios cánceres hematológicos. Ha habido una conciencia creciente de la actividad de los TIMP

como moduladores de la fisiología y la patología del sistema nervioso. Varios polimorfismos de

todos Los genes TIMP se han asociado con la predisposición a muchos cánceres diferentes. La

función de los TIMP en los organismos inferiores no está tan bien dilucidada y podría proporcionar

información fascinante sobre los papeles de las metaloproteasas en el desarrollo.

Las metaloproteinasas (MMPs) son una familia de enzimas proteolíticas capaces de procesar o

degradar proteínas de la matriz extracelular. Los inhibidores tisulares de metaloproteinasas

(TIMPs) son inhibidores específicos de las MMPs que participan en el control local de su actividad.

En el cartílago normal existe bajo recambio de las moléculas de la matriz extracelular. Existe un
delicado balance entre la síntesis y degradación de los componentes del cartílago articular. Este

balance se pierde en enfermedades degenerativas como la osteoartritis en dónde participan algunas

MMPs tales como las gelatinasas, estromelisinas y colagenasas. El proceso de recambio de la

matriz extracelular (MEC) está involucrado en la morfogénesis, embriogénesis, reproducción,

reabsorción y remodelación de tejidos. En el recambio tisular normal y alterado, que incluye en

este último caso a procesos inflamatorios y tumorales, participan enzimas del tipo de las

metaloproteinasas de matriz (MMPs) que pertenecen una familia de endoproteinasas secretadas en

forma de zimógeno, cuya activación se produce por proteolisis parcial, con pérdida de un péptido.

También se activan por cambios conformacionales provocados por otras proteinasas o por

compuestos organomercuriales y son inactivadas por una familia de inhibidores tisulares

específicos (TIMPs), que se unen al sitio activo a través de interacciones no covalentes. Hasta la

fecha en vertebrados se han identificado cuatro TIMPs (TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3 y TIMP-4) los

cuales se unen a las MMPs con una estequiometria 1:1 y su expresión es regulada durante el

desarrollo y la remodelación de tejido. Una producción excesiva o inapropiada de MMPs puede

contribuir en la patogénesis de varios procesos degradativos de los tejidos, que incluyen a la

osteoartritis (OA) y otras enfermedades altamente prevalentes tales como: esclerosis múltiple,

pérdida de dientes, progresión y metástasis tumoral, enfermedad obstructiva crónica. También se

incluyen enfermedades cardiovasculares, como la arterioesclerosis y la formación de aneurismas.

La actividad catalítica de las MMPs es controlada por los inhibidores tisulares de

metaloproteinasas de la matriz (TIMPs). En condiciones patológicas se pierde el equilibrio

existente entre MMPs con respecto a la de TIMPs, este desequilibrio es evidente en enfermedades

orales como la caries dental, gingivitis, periodontitis, cáncer oral y degradación del tejido pulpar.

Aunque son diversos los enfoques terapéuticos de cada patología, el estudio y análisis a nivel
computacional de las MMPs y de los TIMPs ofrece una nueva área para el desarrollo de novedosas

alternativas terapéuticas encaminadas a la inhibición de MMPs involucradas en las patologías

orales mencionadas.

Las MMPs son detectables con alta frecuencia en las células, tejidos y líquidos intersticiales

implicados en una amplia variedad de funciones biológicas, en estado de salud y en condiciones

patológicas. A nivel oral, la expresión de estas proteínas puede cuantificarse en diferentes fluidos

como la saliva, el fluido gingival crevicular (FGC) o muestras de enjuagues bucales y algunos

tejidos como la encía, mucosa y dentina. Son consideradas como posibles biomarcadores, los

cambios cuantitativos de estas enzimas pueden reflejar el estado de salud oral de un sujeto y

emplearse no solo en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades orales sino también como

indicadores del proceso de adhesión de diferentes biomateriales dentales.

La importancia de los inhibidores de proteasas, que impiden la progresión de los tumores

malignos, ha sido apreciada por la propia naturaleza al dotar a los organismos de una amplia batería

de inhibidores endógenos. Existen inhibidores específicos de las distintas subfamilias de proteasas:

serpinas, que bloquean la actividad de las serín-proteasas; cistatinas, que actuan sobre las cisteín-

proteasas, o los TIMP, inhibidores hísticos de metaloproteasas. Se ha observado que la adición de

TIMP a cultivos de células de melanoma o fibrosarcoma bloquea la capacidad invasiva de estas

células, tanto en sistemas in vitro como in vivo. Y se ha demostrado que la sobreexpresión de estos

inhibidores en fibroblastos transformados con el oncogén ras, reduce la velocidad de crecimiento

de los tumores e inhibe su capacidad invasiva. La supresión de la expresión del TIMP-1 en

fibroblastos murinos, mediante el empleo de ARN anti-sentido, confiere a estas células

propiedades invasivas, tumorigénicas y metastásicas.

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