UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS

FACULTAD DE CIENCIAS Y EDUCACIÓN

LICENCIATURA EN QUÍMICA
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL
Javier A. Cuadrado 1, Sebastian Avellaneda 2, Yeison E. Ariza 3, Alexandra . Bello 4

INFORME PRACTICA 4. CURVA DE CALIBRACIÓN

RESUMEN:
Haciendo uso, de una curva de calibración de concentraciones conocidas utilizando un color
verde de alimentos, se intenta determinar la concentración de ese colorante en una muestra
problema desconocida; que con ayudas analíticas y gráficas (Ley de Beer, curva de
ringbom, ecuación de la recta) logramos determinar una concentración de 80 ppm
aproximadamente, entre un rango de confianza que nos brinda la curva de ringbom.

Palabras clave: curva de calibración, ley de Beer-Lambert, determinar concentración,

colorante.

ABSTRACT:
By making use of a calibration curve of known concentrations using a green food color, an
attempt is made to determine the concentration of that dye in an unknown test sample; that
with analytical and graphical aids (Beer's Law, ringbom curve, straight-line equation) we
were able to determine a concentration of 80 ppm, between a range of confidence that gives
us the ringbom curve.

Keywords: Calibration curve, Beer-Lambert law, determine concentration, colorant.

OBJETIVO:
Cuantificar un colorante alimenticio en
una muestra problema por medio de la
espectrofotometría ultravioleta-visible.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
● Realizar un barrido espectral del
colorante verde menta, iniciando
con una concentración de 500
ppm hasta 100 ppm
● Analizar las absorbancias con
ayuda de las curvas de calibración
y la curva de ringbom
● Determinar la concentración
desconocida del colorante.
INTRODUCCIÓN:
CURVAS DE CALIBRACIÓN EN LOS
MÉTODOS ANALÍTICOS:
Un procedimiento analítico muy utilizado
en análisis cuantitativo es el llamado de
calibración que implica la construcción de
una “curva de calibración”. Una curva de
calibración es la representación gráfica de
una señal que se mide en función de la
concentración de un analito. La
calibración incluye la selección de un
modelo para estimar los parámetros que
permitan determinar la linealidad de esa
curva. y, en consecuencia, la capacidad
de un método analítico para obtener
resultados que sean directamente
proporcionales a la concentración de un
compuesto en una muestra, dentro de un
determinado intervalo de trabajo. En el
procedimiento se compara una propiedad
del analito con la de estándares de
concentración conocida del mismo analito
(o de algún otro con propiedades muy
similares a éste). Para realizar la
comparación se requiere utilizar métodos
y equipos apropiados para la resolución
del problema de acuerdo al analito que se
desee determinar. (dosal, 2008)
La etapa de calibración analítica se
realiza mediante un modelo de línea recta
que consiste en encontrar la recta de
calibrado que mejor ajuste a una serie de
“n” puntos experimentales, donde cada
punto se encuentra definido por una
variable “x” (variable independiente,
generalmente concentración del analito de
interés) y una variable “y” (variable
dependiente, generalmente respuesta
instrumental). La recta de calibrado se
encuentra definida por una ordenada al
origen (b) y una pendiente (m), mediante
la ecuación y = mx + b. (dosal, 2008)
Por tener una buena exactitud y
confiabilidad estadística, el método más
empleado para encontrar los parámetros
de la curva de calibrado es el método de
los mínimos cuadrados Este método
busca la recta del calibrado que haga que
la suma de los cuadrados de las
distancias verticales entre cada punto
experimental y la recta de calibrado sea
mínima o tienda a cero. A la distancia
vertical entre cada punto experimental y la
recta de calibrado se le conoce como
residual. En forma gráfica se representa
como:
De acuerdo a este método, las
expresiones matemáticas para calcular la
pendiente (m) y la ordenada al origen (b),
así como el coeficiente de determinación
(r2 ) son:
En la práctica para construir la curva de
calibración se utilizan disoluciones que
contienen concentraciones conocidas de
analito, llamadas disoluciones patrón o
estándar. Los estándares o disoluciones
patrón para construir la recta de calibrado
deben ser preparadas en forma
independiente, a partir de una o varias
soluciones madre; el número de puntos a
escoger dependerá del uso que se dé a la
recta de calibrado. Si bien con dos puntos
se puede construir una curva,
estadísticamente se requieren por los
menos tres para que la curva sea
confiable; este número se suele aplicar a
métodos de rutina perfectamente
establecidos y validados (proceso por el
cual se demuestra, por estudios de
laboratorio, que la capacidad del método
satisface los requisitos para la aplicación
analítica deseada). (dosal, 2008)
Sin embargo, si el método está en una
etapa de desarrollo, el número de puntos
mínimo será de cinco o seis para que la
variabilidad sea mínima y el intervalo
lineal sea suficiente. Hay que considerar
que un aumento en el número de puntos
experimentales implica mayor fiabilidad en
la recta de calibrado. La verificación del
comportamiento de un analito mediante
una curva de calibración requiere un
mínimo de cinco puntos para un intervalo
de confianza del 95 % y de ocho puntos
para uno del 99 %. (dosal, 2008)
MATERIALES:
● espátula
● agitador
 ● vidrio de reloj
● 10 tubos de ensayo
● matraces aforados 100 ml - 10 ml
● gradilla
● frasco lavador
● cubetas plasticas de 1cm
● pipetas de 1ml - 10 ml
EQUIPOS:
● spectronic 20 baush y lomb
● spectronic 20+ milton roy
● uv-visible safas monaco
● uv-1800 shimadzu
REACTIVOS:
● agua destilada
● colorante verde menta
ajustaron numéricamente los datos
obtenidos por medio de una
regresión lineal
7. se registra la absorbancia de la
muestra problema compararla y
observar si está en el rango de la
curva de calibración ya hecha
8. se calcula la concentración de la
muestra problema en molaridad a
través de la interpolación en la
gráfica, la ecuación de la recta, y
la ecuación de la ley de beer
9. se calcula el error de la
concentración obtenida a partir de
la muestra problema .
RESULTADOS:

METODOLOGÍA:

1. se preparo una solucion stock de

100ml con una concentracion de
500 ppm del colorante verde
menta
2. se usan los datos de la práctica Tabla #1 de ABS
anterior sobre la curva de ringbom
para establecer las condiciones de
análisis
3. se calculó la absorbancia molar
del patrón, se realizaron los Curva calibración de ABS:
respectivos cálculos para preparar
8 diluciones que presentaron
absorbancia entre 0.1 y 0.8 en el
equipo safas mónaco
4. se prepararon 8 diluciones con un
volumen final de 10 ml a partir de
la solución stock de 500 ppm del
colorante
5. se calibro el espectrofotómetro
safas mónaco a la longitud de
onda de máxima absorción la cual Gráfica #1 primera medición.

es de 629 nm según la curva Ecuación de la recta:

espectral, se registra la
absorbancia de cada dilución
6. se grafica en una hoja milimetrada
la curva de calibración
(concentración Vs absorbancia) se
 TABULACIÓN Y GRÁFICAS DE RINGBOM:

Gráfica #2 segunda medición.

Tabla #2 tabla de ringbom.
Ecuación de la recta 2:

Gráfica #4 Curva de ringbom.

Intervalo de lectura confiable.

concentración ppm: (147,9) --- (299,9)
(Transmitancia;ABS)= (0,71 ; 0,19) --- (0,54 ;
0.28)
Promedio de ambas rectas:
ANÁLISIS DE RESULTADOS:

● Las gráficas realizadas en esta

práctica, se han desviado un poco
una de la otra, como lo muestra
los gráficos 1 y 2, esto puede
deberse a una descalibración del
equipo utilizado, también incluido
factores externos como la luz, que
Gráfica #3 promedio.
sería un gran interferente en la
Ecuación de la recta promedio: determinación de la absorbancia,
mas si embargo la variación entre
 los resultados no es muy alta, y
trabajando con la curva promedio
de las dos mediciones, es posible
trabajar con una linealidad del
97%, la cual es alta, de este modo
quedamos con un porcentaje de
error de 3 % aproximadamente.
● Esta linealidad nos permite hacer
un estimado, y generar una
ecuación de la recta, que nos
permite predecir cualquier punto
de la recta, conociendo una de sus
variables.
● En el análisis espectroscópico se
presentan errores en las
mediciones principalmente, debido
a errores sistemáticos, que son
por el equipo, pero se pueden
manejar por porcentajes de error.
● El generar la curva de ringbom, se
hace una herramienta útil, para
observar físicamente, donde
podemos tener cierta confianza
para tomar los datos, pero algo
curioso en esta curva con los que
obtuvimos, es que a pesar de que
solo son cuatro puntos los que
están siendo cruzados por la
línea, los puntos que no están en
la línea no se alejan mucho de su
periferia, esto quiere decir que los
análisis que se hagan fuera del
rango de la linea, tambien son
validos y se pueden tener en
cuenta para la veracidad confiable
de los datos que se están
obteniendo; es decir que según la
curva que se realizó, los datos
obtenidos son relaes y se podrían
verificar.
● si ubicamos la concentración que
deducimos con su respectiva
absorbancia, la imagen sería
contínua hacia la linealidad, así:
donde el primer punto, es aquel de la
muestra problema,el cual obedece a la
linealidad que plantea la ecuación de la
recta, dándonos un veredicto de confianza
de haber realizado bien el procedimiento.
CONCLUSIONES:
● La absorbancia,y transmitancia,
vistas como propiedades, son
directamente proporcionales, a la
concentración en la cual este el
analito.
● La proporcionalidad entre la
propiedad y la concentración
permite predecir, fácilmente,
concentraciones de los analitos
cuyas soluciones sean
desconocidas.
● Para poder observar de manera,
bien marcada la semi-ese que
forma en la curva de ringbom, se
es necesario, adquirir más datos
de concentraciones mayores, y
menores en su defecto.
● Se logra determinar la
concentración desconocida del
colorante verde menta obteniendo
el resultado de 80,375 ppm.
● Por medio de la curva de
calibración y haciendo un buen
uso de la ecuación de la recta, se
logra encontrar variables como el
epsilon y la concentración del
analito valorado.
BIBLIOGRAFÍA:
● Harris Daniel C. “Análisis Químico
Cuantitativo”, 2ª edición. Editorial
Reverte, España 2001.
● Miller James N., Miller Jane C.
“Estadística y Quimiometría para
Química Analítica”, 4ª edición,
Editorial Prentice Hall, España
2002.
● Danzer Klaus, Currie Lloyd A.
“Guidelines for calibration in
analytical chemistry Part I.
Fundamentals and single
component calibration”, IUPAC
Pure & Appl. Chem, Vol.70, No.4,
pp.993-1014, 1998.
● Alcántara Pineda A. Rodríguez R.
“Guía de validación de Métodos
Analíticos”, Editada por el Colegio
Nacional de Químicos
Farmacéuticos Biólogos México,
A. C.,