DETERMINACIÓN Y EXTRACCIÓN DEL ADN

Montañez Mora, Emerson Montañez (1005062578); Mantilla Rodríguez, Duvan Gustavo

(1094281203); Florez Sánchez, Yerlin (1049395207); García Acevedo, Dayron Ricardo
(1007414421)

Departamento de Agronomía, Facultad de Ciencias Agrarias, Programa Ingeniería Agronómica,

Universidad de Pamplona

Resumen: El ADN es una biomolécula constituida por cuatro nucleótidos que forman dos
cadenas anti paralelas dispuestas en forma de doble hélice organizadas en unas estructuras
complejas conocidas como cromosomas. En esta práctica se llevó a cabo la extracción de
ADN en una muestra de banano (M. paradisiaca), utilizando una solución de extracción
acuosa con cloruro de sodio, bicarbonato de sodio y detergente líquido. Al final de la práctica
se observó que gracias al procedimiento realizado, el ADN de la muestra tratada precipitó,
haciéndose visible en una solución constituida por tres fases.

Palabras clave: ADN, extracción, ruptura celular, banano, lisado.

ABSTRACT: DNA is a biomolecule, which has four nucleotides, which form two anti-
parallel chains arranged in a double helix arranged in complex structures known as
chromosomes. In this lab report, we shown the DNA extraction was carried out in a sample
of banana (M. paradisiaca), using an aqueous extraction solution with sodium chloride,
sodium bicarbonate and liquid detergent. At the end of this practice, we observed that thanks
to the procedure performed, the DNA of the treated sample became visible in a solution
constituted by three phases.

Keywords: DNA, extraction, cell disruption, banana, lysate

1. Introducción

El ADN es una biomolécula formada por
dos cadenas de poli nucleótidos unidas por
puentes de hidrogeno. Los nucleótidos que
presenta son: timina, adenina, guanina y
citosina; las cuales forman los genes, que
de acuerdo a la secuencia de orden que se
encuentra determinan las características
biológicas de todo ser vivo. Además, esta
molécula de vida está constituida de un
azúcar de desoxirribosa y un grupo fosfato.
La mayoría de los organismos están
formados por millones de células, el ADN
esta presentes en todas las células de estos
seres vivos. En las células procariotas el
ADN se encuentra disperso en el
citoplasma. Y por el contrario en las
células eucariotas está ubicado dentro de
un núcleo, donde está asociado con
proteínas y el ARN.
ADN al ser una molécula larga puede en
conjunto ser visualizada y además al estar
en todas las células de todos los
organismos, puede ser extraído con
facilidad de cualquier tejido, para ello se
requiere un procedimiento por medio de

1
un protocolo de purificación de ADN
desde una muestra celular se compone de
tres pasos: ruptura o lisis celular,
solubilizacion del ADN y precipitación de
las proteínas y los restos celulares
presentes en lisiado que implica.
La ruptura celular se realiza empleando
detergentes que disuelven los lípidos en la
membrana celular y nuclear, liberando el
contenido de la célula.
Las proteínas asociadas al ADN se
desnaturalizan y se separan de este por
acción del detergente. El lisado celular
obtenido contiene ADN, restos
moleculares (principalmente ARN,
carbohidratos y proteínas) y celulares.
Finalmente, la separación del lisado
celular se realiza utilizando alcohol etílico,
el cual precipita el ADN, favoreciendo la
separación sencilla desde los otros
componentes del lisado.
Con unos pocos y simples productos
químicos del hogar y algunos elementos
comunes de la cocina o laboratorio, es
relativamente fácil extraer el ADN de
materiales biológicos, como por ejemplo
una fruta. La extracción del ADN consiste
en triturar y moler para aumentar la
superficie de exposición de la muestra,
agregar productos químicos para romper
las paredes celulares y liberar las
moléculas de ADN y por último seguir
ciertos pasos para separar el ADN de otros
materiales celulares. Los bananos son
Preparación del licuado:
Se tomó un banano y se cortó en pequeños
trozos, llevando posteriormente estos a la
licuadora con 100 mL de agua destilada.
La mezcla se licuó con pulsos de 10
buenas frutas para la extracción del ADN
ya que son suaves y fáciles de moler.
2. PARTE EXPERIMENTAL
2.1 Materiales y métodos
Se emplearon los siguientes equipos y
materiales: balanza de tres brazos (Ohaus
Adventure), licuadora (Oster) y los
siguientes reactivos: agua destilada, hielo,
solución de etanol 70 %v/v, cloruro de
sodio (NaCl), bicarbonato de sodio
(NaHCO3), papel filtro grande, jabón
líquido y un banano (M. paradisiaca)
obtenido en la plaza de mercado de la
ciudad de Pamplona
2.2 Procedimiento
Preparación de solución de extracción:
Se pesaron 1,5 gramos de cloruro de sodio
y 5,0 gramos de bicarbonato de sodio
haciendo uso de la balanza de tres brazos
(ver figura 1). Posteriormente, se
disolvieron los dos sólidos en 150ml de
agua y se adicionaron 5mL de jabón
líquido. Por último, se mezcló la solución
resultante, enfriando en un baño de hielo.
Figura 1. Balanza analítica
segundos de duración cada uno, con
recesos de 30 segundos entre cada pulso,
hasta obtener un licuado completo (ver
figura 2).
2
 aproximada (en molaridad), de los
componentes empleados para la
preparación de la solución de extracción.

 Cloruro de sodio

Peso molecular:
Figura 2. Licuado de la muestra de Na: 22.989 g/mol
banano Cl: 35.442 g/mol
NaCl: 58.442 g/mol
Una vez terminado el proceso de licuado,
se agregó la solución de extracción fría Molaridad:
preparada anteriormente en una relación (𝑔 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝑝𝑢𝑟𝑜) 1.5𝑔𝑟
(𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟) 58.442𝑔⋰𝑚𝑜𝑙
2:1 (solución: licuado) y se prosiguió a 𝑀= = =
𝐿𝑖𝑡𝑟𝑜𝑠 𝑠⁄𝑛 0.155𝐿
licuar nuevamente. Después del siguiente 0,166M
licuado se realizó el filtrado (ver figura 3)
del cual se tomó un volumen de 2 mL, los
cuales se transfirieron a un tubo de ensayo  Bicarbonato de sodio
que contenía 4mL de solución de etanol
70%v/v (ver figura 4). Peso molecular
Na: 22.989 g/mol
H: 1.0097 g/mol
C: 12.011 g/mol
O (3): 15.999(3) = 47.997 g/mol
NaHCO3= 84.0049 g/mol

Molaridad:
(𝑔 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝑝𝑢𝑟𝑜) 5𝑔𝑟
(𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟) 84.0049𝑔⋰𝑚𝑜𝑙
Figura 3. Filtrado de la mezcla obtenida 𝑀= = =
𝐿𝑖𝑡𝑟𝑜𝑠 𝑠⁄𝑛 0.155𝐿
0,384 M

Al mezclar con el alcohol el licuado

realizado, al cabo de unos segundos, se
observó la presencia de tres capas
diferenciadas. La capa superior
corresponde al alcohol, mientras que en la
Figura 4. ADN capa inferior se encuentran los restos
2. Resultados y Análisis celulares del banano y los otros
componentes de la solución empleada. En
2.1 Cálculos: la interface se observa una especie de
“hilos” o “partículas en suspensión”
A continuación se exponen los cálculos blancas rodeadas de burbujas; las cuales
para determinar la concentración corresponden teóricamente al ADN.

3

El ADN se encuentra unido y compacto al
interior del núcleo de las células eucariotas
y está rodeado de proteínas; por lo cual,
para aislarlo y observarlo se hace
necesario desnaturalizar las proteínas,
deshacer la membrana plasmática y la
envoltura nuclear. Por ello es vital seguir
el orden del procedimiento expuesto
anteriormente, pues este cumple las
funciones citadas.
La trituración del banano se llevó a cabo
para incrementar el área superficial,
haciendo que la membrana del mismo sea
más fácil de disolver y permitiendo una
absorción más efectiva de la solución que
se añadió.
Las membranas de las células están
formadas por dos capas de lípidos con
proteínas transmembrana a través de estas.
El detergente por otra parte, se empleó
para ayudar con la ruptura de la bicapa de
fosfolípidos de las membranas plasmáticas
y la envoltura nuclear, pues el detergente
deshace las uniones que mantienen la
membrana junta, descomponiendo los
lípidos de esta. Cuando el detergente se
puso en contacto con los lípidos, éstos se
separaron de la membrana rompiéndola.
Es necesario resaltar que la estructura de
los lípidos es similar a la del detergente y
eso hace que se combinen, formando una
burbuja de detergente y lípidos.
La homogeneización continua y el uso del
baño en frío son de vital importancia en el
proceso, pues con ellas se consigue que el
proceso de extracción se lleve a cabo en la
totalidad de la muestra aumentando el
contacto entre las soluciones
(homogeneización) y ayuda a mantener el
ADN intacto durante la extracción (baño
en frío), pues el enfriamiento de la
solución ayuda a prevenir la
desnaturalización que podría destruir el
ADN.
Por otra parte, el proceso de filtrado
permitió separar los restos de los tejidos
del plátano y de las células que se habían
“roto” en los pasos anteriores, debido a
que ese material no es de interés en esta
práctica y por el contrario no permitiría
que se observara claramente la obtención
del ADN que es el objetivo de la misma.
Al filtrar la solución, esta parte quedó
retenida en el papel filtro (restos más
pequeños) y se tomó para continuar el
filtrado o líquido obtenido en este proceso,
pues es el que contenía el ADN libre de la
membrana nuclear.
Normalmente el ADN es soluble en agua y
sustancias polares como el alcohol, pues
los grupos fosfatos exteriores del esqueleto
proveen cargas negativas que pueden
formar fuentes de hidrogeno, por esta
razón el ADN no sería visible en una
solución acuosa; sin embargo su
solubilidad disminuye al adicionar cloruro
de sodio (NaCl) a la solución, pues el NaCl
es un electrolito que se disocia en la
solución acuosa y el sodio (Na+) neutraliza
la carga negativa de los grupos fosfatos, lo
cual causa que al disminuir su solubilidad
precipite y sea visible. Debido a que el
alcohol es menos denso que el extracto, se
observó en la capa superior obtenida al
final de la práctica. La adición de sal en
soluciones acuosas, es común en diversos
procesos de extracción y se conoce como
efecto salting-out.
Conclusiones:
4
 5. dna_extraction_lab.html
Gracias a la práctica de laboratorio se 6. http://leadersk.tripod.com/
comprobó que es posible extraer ADN de 7. http://www.biologyjunction.com/e
forma sencilla, en el laboratorio, xtracting_dna.htm
empleando reactivos como detergente
líquido; adicionalmente, se comprobó la
presencia de ADN en las células de un
banano.

Para poder aislar el ADN de una célula

vegetal, primero es necesario romper la
pared celular, luego la membrana
plasmática y finalmente la carioteca,
obteniendo el ADN disperso en los restos
de la célula. Adicionalmente es necesario
emplear reactivos que disminuyan su
solubilidad en agua para poder precipitar
el mismo y hacerlo visible en el extracto
obtenido.

3. Referencias Bibliográficas

1. http://learn.genetics.utah.edu/cont
ent/labs/extraction/
2. http://learn.genetics.utah.edu/cont
ent/labs/extraction/howto/
3. http://www.scientificamerican.co
m/article/find-the-dna-in-a-
banana-bring-sciencehome/
4. http://www.funsci.com/fun3_en/d
na/dnaen.htm
http://classic.sidwell.edu/us/scienc
e/vlb5/Labs/DNA_Extraction_Lab
/