Instituto Politécnico Nacional.

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Grupo: 3FM2 Sección: 3

Integrantes: -Buen Día Buen Día Adriana. –Sanchez Magaña Fernando

Reacciones Enzimáticas De Oxido Reducción (Oxido Reducción II)

Objetivo.
Determinar la actividad de algún enzima que participan en reacciones de Oxido Reducción y
discutir la importancia de los cofactores y el efecto de algunos inhibidores.

Resultados.

1.- Obtención de la deshidrogenasa succinica “SDH” y citocromos oxidasa.

Numero 1 2 3 4 5 6 7
De Tubo

Tiempo
0 Min Tubo con Tubo con Tubo con Tubo con Tubo con Tubo con Tubo con
coloración coloración coloración coloración coloración coloración coloración
azul azul azul azul azul azul azul
2 Min + - + - - - -
4 Min + - + - - - -
6 Min ++ + + - - - +
8 Min ++ + + - - - +
10 Min ++ + ++ - - + ++
15 Min ++++ + ++ - + ++ ++
20 Min +++++ + ++ + + +++ ++++
Tabla 1.1 Resultados obtenidos de la decoloración de los tubos de la
determinación de la actividad de deshidrogenasa succinica
*La presencia de signos más (+) indican el grado en que se decoloro el tubo mientras más signos
indica una mayor decoloración de estos.
 Imagen 1: Coloración de los tubos Imagen 2: Coloración de los tubos con
con deshidrogenasa succínica deshidrogenasa succínica después del
antes del calentamiento calentamiento

2.- Determinación de la actividad del sistema de citocromos y citocromos

oxidasa.
Numero 1 2 3 4 5 6 7 8
de Tubo

Tiempo
0 min Rojo Roja Anaranjado Rosa Morado Lila Café Turbio
Claro
2 min Lila Rosa Anaranjado Lila Morado Lila Café Lila
claro claro
4 min Lila Rosa Amarillo purpura Azul Lila Café Lila
claro claro claro
6 min Purpura Rosa Amarillo Purpura Azul + Lila Café Azul
claro claro + claro claro
8 min Purpura + Rosa Amarillo Purpura Azul ++ Lila Amarillo Azul
claro claro + claro claro
10 min Purpura Rosa Amarillo Purpura Azul ++ Lila Amarillo Azul +
++ claro claro + + claro +

Tabla 1.2 Resultados obtenidos de la determinación de la actividad del sistema de

citocromos y citocromo oxidasa
Imagen 3. Tubos al inicio de la reacción
del sistema de citocromos.
Discusión de resultados.
La enzima Succionatodeshidrogensa
“SDH” (Numero de enzima 1.3.99.1) es
una oxidoreductasa que cataliza la
reacción de conversión del succinato a
fumarato (imagen 5) obteniendo de esta
manera FAD reducido.(1) Lo que se
realizó durante la práctica es determinar
la actividad de la SDH por medio de la
decoloración de una serie de tubos que
contenían en su mayoría Succinato de
sodio el cual actua como sustrato, azul
de metileno un indicar, manolato de
sodio un inhibidor competitivo para la
enzima SDH y por ultimo SDH-CIT la
cual es la enzima.
Se realizó una serie de 7 tubos en el cual
la cantidad o ausencia de uno de los
reactivos o sustancias mencionadas
anteriormente nos proporcionan cierta
información para poder comprender la
actividad oxido reductora de esta
enzima.
Tubo 1. Este tubo cuenta con la ausencia
del manolato de sodio el cual como ya se
mencionó actúa como inhibidor de dicha
enzima, y esta al no estar presente por
ende la decoloración del tubo se lleva a
cabo de una manera rápida oh dicha de
Imagen 3: Coloración de los tubos con
citocromo y citocromo oxidasa después del
calentamiento
otra manera espontánea.
Tubo 2 en este tubo tiene ausencia de la
enzima por lo cual no hay reacción que
se lleve a cabo quiero decir con esto no
tendría que haber un cambio de color, sin
embargo existe una decoloración tal vez
no muy significativa pero la hay esto se
puede deber a que al incluir un reactivo
en el tubo, se me mezclaron las pipeta
utilizadas y a su vez esto pudo
contaminar nuestro tubo.
Tubo 3. No hay presencia ni de sustrato
succinato de sodio ni del inhibidor
manolato de sodio por ende de igual
Imagen 5. Reacc
manera la decoloración es mínima, esto
se debe ya que en la enzima puede
existir una pequeña fracción del sustrato
ocasionando de esta manera una
reacción pero de una manera muy
insignificantica debido a que la presencia
del sustrato no está al 100% presente.
Tubo 4. En este tubo existe la presencia
del manolato de sodio en una cantidad
mayor que la de los tubos 5,6 y7 con
esto quiere decir que si hay una reacción
que se lleve a cabo pero la decoloración
del tubo es más lenta. Ya que si
recordamos el manolato tiene la función
de inhibidor.
Tubo 5 y 6. Si existe una decoloración en
el tubo lo que nos indica que si hay
reacción a pesar de que se le añadió
inhibidor pero cabe mencionar que la
concentración que se le añadió a esta es
menor a la del tubo 4.
Tubo 7. La reacción se lleva a cabo de
una manera rápida debido a que existe
una concentración alta del sustrato y
pesar de que existe la presencia de un
inhibidor pero en pequeña cantidad y el
sustrato en mayor este desplaza dal
inhibidor provocando que dicha reacción
se lleve a cabo de una manera normal.
Con respecto a la citrocromo oxidasa
esta cabe mencionar que es una enzima
de tipo oxidoreductasa que cataliza el
último paso de la cadena de transporte
electrónico. (2)
Los reactivos que conteniala serie de 7
tubos fueron KCN el cual actúa como un
inhibidor irreversible. α- naftol y la SDH-
CIT la cual actua como enzima.
Tubo 1. Se observó una coloración
purpura ya que contenía el citocromo
oxidado y p-feniléndiamina, por lo que
reaccionaron formándose p-
feniléndimina.
Tubo 2. No hay reacción que se lleve a
cabo ya que no hay presencia de enzima
por ende la coloración que existe es rosa
durante todo el tiempo de calentamiento
y ese color rosa se lo otorga la P-
fenialdiamina
Tubo 3. Existe un cambio de color del
tubo del que inicialmente se tenia el cual
era anaranjado a un amarillo tenue lo
ideal serial que no existiera un cambio de
color tan significativo debido aque el
inhibidor el KCN esta presente.
Tubo 4. Al no contener p-feniléndiamina
no se llevó a cabo la reacción y el tubo
fungió como control negativo
Tubo 5. En dicho tubo existe un cambio
de color significativo de morado a azul
debido a que en dicho tubo hay
presencia de sustrato y enzima la cual
provoca que la reacción se lleve a cabo.
Tubo 6 y 8. No hubo reacción debido a
que ambos carecían de enzima SDH-CIT
por ende el cambio de coloración en
dichos tubos no es significativo y si existe
cambio de coloración es debido la
presencia de P- fenilendiamina.
Tubo 7. Se obtuvo una coloración
producto de la mezcla de coloraciones
del extracto y de la p-feniléndiamina, no
hubo reacción porque contenía el
inhibidor.
Conclusión.
Elaborada ya dicha práctica podemos
llegar a la conclusión de que La actividad
enzimática es afectada por la presencia o
ausencia de diferentes elementos, entre
los que se encuentran el sustrato, el
cofactor e inhibidores.
Se pudo visualizar la actividad
enzimática gracias a la presencia del
indicador, en caso de la SDH, azul de
metileno, el cual se reduce debido a los
equivalentes reductores producidos en la
reacción catalizada por esas enzimas.
Bibliografía.
1.- Vejar I. (2005) “Practicas de
Bioquímica descriptiva” Textos
Académicos. Universidad de Sonora.
Mexico.
2.- Stryer L. (2008) “Bioquímica” Editorial
Reverte. Mexico. España.