Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Manaus – AM
Setembro/2016
UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS
INSTITUTO DE CIÊNCIAS EXATAS
CURSO DE BACHARELADO EM QUÍMICA
Manaus – AM
Setembro/2016
2
LAEQ – Laboratório de Abertura de Amostras e Ensaios Químicos
3
RESUMO
4
LISTA DE FIGURAS
5
LISTA DE FLUXOGRAMAS
6
SUMÁRIO
1. INTRODUÇÃO .............................................................................................................................. 8
2. OBJETIVOS ................................................................................................................................... 9
2.1. Objetivo Geral ............................................................................................................................. 9
2.2. Objetivos Específicos .................................................................................................................. 9
3. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA ...................................................................................................... 10
3.1. ASPECTOS GERAIS DA FAMÍLIA MORACEAE ................................................................ 10
3.2. O GÊNERO Brosimum Sw. ...................................................................................................... 10
3.3. A ESPÉCIE Brosimum parinarioides ....................................................................................... 11
4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL ........................................................................................ 12
4.1. SUPORTES PARA CROMATOGRAFIA ............................................................................... 12
4.2. REVELADORES ...................................................................................................................... 12
4.3. EQUIPAMENTOS .................................................................................................................... 13
4.4. OUTROS EQUIPAMENTOS ................................................................................................... 13
4.5. MATERIAL BOTÂNICO......................................................................................................... 14
4.5.1. Coleta e Identificação do Material Botânico ......................................................................... 14
4.5.2. Secagem e Moagem .............................................................................................................. 14
4.5.3. Obtenção dos Extratos ........................................................................................................... 14
4.6. ESTUDO FITOQUÍMICO ........................................................................................................ 15
4.6.1. Fracionamento Cromatográfico do Extrato Hexânico........................................................... 15
4.6.2. Estudo Cromatográfico do Grupo de Frações GF06 ............................................................. 16
4.6.3. Estudo Cromatográfico do Grupo de Frações GF07 ............................................................. 17
5. RESULTADOS E DISCUSSÃO .................................................................................................. 19
5.1. IDENTIFICAÇÃO ESTRUTURAL DOS CONSTITUINTES DO EXTRATO HEXÂNICO
DE B. parinarioides .............................................................................................................................. 19
5.1.1. Identificação Estrutural de EHCBP-06.1 .............................................................................. 19
5.1.2. Identificação Estrutural de EHCBP-06.2 .............................................................................. 23
5.1.3. Identificação Estrutural de EHCBP-07.1 .............................................................................. 26
5.1.4. Identificação Estrutural de EHCBP-07.2 .............................................................................. 29
6. CONCLUSÃO .............................................................................................................................. 33
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................................................... 34
7
1. INTRODUÇÃO
8
2. OBJETIVOS
9
3. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA
10
FIGURA 2: Estrutura química do 3-β-acetoxi-olean-12-eno-28-al e do β-sitosterol
11
4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Solventes: Para cromatografia foram utilizados solventes das marcas Tedia, Nuclear,
Qhemis e Vetec.
4.2. REVELADORES
12
4.3. EQUIPAMENTOS
13
4.5. MATERIAL BOTÂNICO
14
Cascas de Brosimum parinarioides
(650,0 g)
15
EHCBP
(5,0 g)
TABELA 1: Relação entre grupos de frações/substâncias isoladas do extrato hexânico das cascas de Brosimum
parinarioides
Grupo
Grupo de Massa Substâncias Massa Substâncias
Frações de Frações
Frações (mg) Isoladas (mg) Isoladas
Frações
01 1–15 25,6 09 66–77 237,3
02 3–25 55,2 10 78–88 265,5
03 26–31 125,5 11 89 193,2
04 32–37 196,6 12 90–108 135,3
05 38–49 215,7 13 109–115 751,8
EHCBP-06.1 14
06 50–54 67,7 116–123 297,3
EHCBP-06.2
EHCBP-07.1 15
07 55–64 587,1 124–164 195,0
EHCBP-07.2
08 65 12,3
O grupo de frações GF06 (67,7 mg) foi submetido à CCDP utilizando como eluente
uma mistura binária de CHCl3:AcOEt [95:05] com duas eluições, resultando em duas (2)
frações (FLUXOGRAMA 3). A frações codificadas como EHCBP-06.1 (2,6 mg) e EHCBP-
06.2 (30,4 mg) apresentaram-se como sólidos brancos amorfos. A análise por CCD da fração
16
EHCBP-06.1 evidenciou um spot intenso de coloração azul, enquanto a análise por CCD da
fração EHCBP-06.2 evidenciou um spot de coloração verde quando reveladas com solução de
anisaldeído. Posteriormente foram submetidas às análises espectroscópicas e espectrométrica.
GF06
(67,7 mg)
- CCDP
- CHCl3:AcOEt [95:05]
- Duas Eluições
EHCBP-06.1 EHCBP-06.2
(2,5 mg) (30,4 mg)
O grupo de frações GF07 (587,1 mg) foi submetido à CCDP utilizando como eluente
uma mistura binária de CHCl3:AcOEt [95:05] com duas eluições, resultando em duas (2)
frações (FLUXOGRAMA 4). A frações codificadas como EHCBP-07.1 (187,6 mg) e
EHCBP-07.2 (7,2 mg) apresentaram-se como sólidos brancos amorfos. A análise por CCD da
fração EHCBP-07.1 evidenciou um único spot intenso de coloração azul, enquanto a análise
por CCD da fração EHCBP-07.2 evidenciou um spot intenso de coloração azul quando
reveladas com solução de anisaldeído. Posteriormente foram submetidas às análises
espectroscópicas e espectrométrica.
17
GF07
(587,1 mg)
- CCDP
- CHCl3:AcOEt [95:05]
- Duas Eluições
EHCBP-07.1 EHCBP-07.2
(187,1 mg) (7,2 mg)
18
5. RESULTADOS E DISCUSSÃO
A fração EHCBP-06.1 (2,6 mg) apresentou-se como um sólido amorfo branco, que
ao ser revelado com vanilina sulfúrica exibiu um spot de coloração azul intenso, característico
de terpenos e, um spot de coloração escura acima do spot anterior, que pode ser atribuído à
presença de impureza.
Pela análise do espectro de RMN de 1H (500 MHz, CDCℓ3) (FIGURA 1) observou-
se características de mistura de triterpenos.
A análise do espectro possibilitou a visualização da região de hidrogênios alílicos na
região entre δ 4,20-3,20 característicos de triterpenos pentacíclicos com instauração no C-12
(MATHÉ & CULIOLI, 2004) (FIGURA 3).
19
7.2602
4.1702
4.1635
4.1562
4.1485
4.1291
4.1148
4.1006
4.0641
4.0506
4.0371
3.9557
3.7440
3.7301
3.7160
3.7020
3.4912
2.5112
2.5066
2.4916
2.4579
2.4429
2.4342
2.4194
2.4005
2.3912
2.3763
2.3611
2.2998
2.2848
2.2696
2.1704
0.8939
0.8803
0.8661
0.0692
0.0000
10.0 5.0 0.0
ppm (f1)
FIGURA 3: Espectro de RMN de H (500 MHz, CDCℓ3) de EHCBP-06.1
1
20
FIGURA 4: Cromatograma da fração EHCBP-06.1
Assim, pela análise dos espectros de massas obtidos para EHCBP-06.1 e a consulta
às bibliotecas de espectros disponíveis no equipamento (NIST, Wiley 229.LIB), visualizou-se
uma mistura de triterpenos, com picos majoritários de IS 84% para o pico 8 e IS 86 % para o
pico 6 (FIGURA 5).
21
a)
b)
c)
d)
b)
a) b)
23
A partir da análise do espectro de RMN de 1H foi possível a visualização da região
de hidrogênios alílicos na região entre δ 5,50-5,00 e um grande número de sinais intensos na
região de δ 0,72-2,86, atribuídos aos hidrogênios metílicos, metilênicos e metínicos que
caracterizam o esqueleto esteroidal (FIGURA 6) (NASCIMENTO, 2014).
7.2598
5.3763
5.3734
5.3714
5.3656
5.3627
5.3503
5.3420
5.3406
5.3372
5.1326
5.1248
5.1114
2.1701
2.0656
2.0535
2.0416
1.6786
1.6073
1.5974
1.5586
1.3015
1.2542
0.8939
0.8907
0.8804
0.8701
0.8670
0.8469
0.8429
0.8295
0.8082
0.6792
0.0000
10.0 5.0 0.0
ppm (f1)
FIGURA 8: Espectro de RMN de 1H (500 MHz, CDCℓ3) de EHCBP-06.2
24
Através da análise por CG-EM foi possível verificar a presença de triterpenos
visualizados no espectro de RMN de 1H. A análise do perfil mostrou a presença de um (1)
componente majoritário na mistura, com tempo de retenção de 47,721 minutos e área de
100% (FIGURA 9).
a)
b)
25
FIGURA 11: Proposta de Fragmentação de EHCBP-06.2
26
nas massas de fragmentação, não sendo possível correlaciona-lo com as substâncias indicadas
na biblioteca do CG-EM.
7.2611
5.2500
5.2430
5.1884
5.1812
5.1742
5.1258
5.1184
5.0984
4.5320
4.5234
4.5184
4.5105
4.5087
4.5022
4.4908
4.4864
2.0520
2.0470
1.6837
1.6051
1.1306
1.0667
1.0107
0.9790
0.9688
0.9641
0.9332
0.8753
0.8663
0.8555
0.8508
0.0000
10.0 5.0 0.0
ppm (f1)
FIGURA 13: Espectro de RMN de H (500 MHz, CDCℓ3) de EHCBP-07.1
1
27
FIGURA 14: Cromatograma da fração EHCBP-07.1
a)
b)
c)
5.2501
5.2426
5.1332
5.1254
5.1104
5.0977
5.0877
5.0845
4.5334
4.5249
4.5173
4.5108
4.5076
4.5026
4.4935
4.4914
4.4847
2.1696
2.0524
2.0471
2.0411
1.6834
1.6786
1.6057
1.2541
0.9743
0.9327
0.8733
0.8676
0.8503
0.8031
0.7993
0.0000
29
de dez (10) componentes na mistura, sendo três (3) componentes majoritários, o componente
com tempo de retenção de 47,085 minutos e área de 47,15% (pico 7), o componente com
tempo de retenção de 47,666 minutos e área de 27,29% (pico 9) e o componente com tempo
de retenção de 46,054 minutos e área de 19,66 % (pico 3).
30
a)
b)
c)
d)
e)
f)
31
FIGURA 19: Proposta de fragmentação para os picos 7 e 3
a) b)
32
6. CONCLUSÃO
33
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
CORREA, P. M. Dicionário das plantas úteis do Brasil e das exóticas cultivadas. Rio de
Janeiro, Imprensa nacional, 1978.
MATTA, A. Flora Médica Brasiliense. 3ª. Edição revista. Manaus: Editora Valer,
2003, 356 p.
MATTA, A. Flora Médica Brasiliense. 3ª. Edição revista. Manaus: Editora Valer,
34
2003, 356 p.
35