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Propagación in vitro de banano, mediante la

utilización de meristemos caulinares
In vitro propagation of banana using cauline meristem

Anabel Tandazo Yaguachi1*, Víctor Hugo Eras Guamán2, Julia Minchala Patiño3, Magaly Yaguana Arévalo3 y Ruth Poma Angamarca3

1
Auxiliar de Laboratorio de Sanidad Vegetal, Universidad Nacional de Loja
2
Docente-Investigador de la Carrera de Ingeniería Forestal, Universidad Nacional de Loja
3
Investigadores del Laboratorio de Micropropagación Vegetal, Universidad Nacional de Loja
*autor para correspondencia: tyaguachi.agr@gmail.com

RESUMEN
La presente investigación corresponde a la propagación
in vitro de banano, mediante la utilización de
meristemos caulinares de guineo clon Cavendish.
Las fases que comprendieron la investigación fueron:
establecimiento, proliferación y enraizamiento. Para la
fase de establecimiento se utilizó como desinfectantes
(peróxido de hidrógeno e hipoclorito de sodio) en
concentraciones de 2,5 y 5 % cada uno y diferentes
soluciones antioxidantes (ácido ascórbico 100mg/l,
ácido cítrico 150 mg/l y jugo de limón 150 ml/l). El
medio de cultivo basal estuvo compuesto por las sales
minerales de Murashige y Skoog, MS (1962) a la mitad
de su concentración. En la fase de proliferación, el medio
de cultivo se suplementó con vitaminas, sacarosa y como
reguladores citocininas KIN (1,3 y 5 mg/l) y 6-BAP (3,
5, 7 mg/l). En la fase de enraizamiento se adicionó al
medio de cultivo ácido indol acético (AIA: 0,3 y 0,5 mg/l)
y carbón activado (1,5 y 3 g/l). Los explantes fueron
incubados en condiciones ambientales controladas de
luz y temperatura. En la fase de establecimiento, los
mejores resultados se obtuvieron al utilizar peróxido
de hidrógeno al 2,5 % como desinfectante y jugo de
limón como antioxidante; mientras que en la fase de
proliferación, la mejor respuesta se observó con la
adición de BAP 3,0 mg/l y en la de enraizamiento, la
mejor respuesta se obtuvo con 0,5 mg AIA + 3,0g/l de
carbón activado.
AbStRAct
This research is for the in vitro propagation of banana
meristems using clone caulinares of Cavendish bananas.
The phases included the investigation were: establishment,
proliferation and rooting. For the establishment phase
was used as disinfectants (hydrogen peroxide and sodium
hypochlorite) in concentrations of 2.5 to 5% each, and
different solutions antioxidants (ascorbic acid 100 mg/l,
citric acid 150 mg/l and 150 lemon juice ml/l). The basal
culture medium consisted of the mineral salts of Murashige
and Skoog (MS) to half of its concentration. In the
proliferation phase, the culture medium was supplemented
with vitamins, sucrose as cytokinins regulators KIN (1.3 and
5 mg/l) and 6-BAP (3, 5, 7 mg/l). In the rooting phase was
added to the culture medium indole acetic acid (IAA: 0.3
and 0.5 mg/l) and activated charcoal (1.5 and 3 g/l). The
explants were incubated under controlled environmental
conditions of light and temperature. In the rooting phase
was added to the culture medium indole acetic acid (IAA:
0.3 and 0.5 mg/l) and activated charcoal (1.5 and 3 g/l). The
explants were incubated under controlled environmental
conditions of light and temperature. In the establishment
phase, the best results were obtained when using hydrogen
peroxide as a disinfectant and 2.5% lemon juice as an
antioxidant; while in the proliferation phase, the best
response was observed with the addition of BAP 3.0 mg/l
rooting in the best response was obtained with 0.5 mg IAA
+ 3.0 g/l of activated charcoal.

Palabras claves: banano, micropropagación, Keywords: banana micro-propagation,

meristemos caulinares, cultivo in vitro. meristem cauline, in vitro culture.

Recepción: 20 de Octubre de 2014

Aceptación: 07 de Noviembre de 2014

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INtRodUccIóN
El cultivo de banano posee una gran importancia económica
significativa para la actividad agroalimentaria del país,
constituyéndose en un componente básico en la dieta de gran
parte de la población, siendo una de las pocas actividades que
proporcionan a las familias campesinas ingresos regulares
durante todo el año (Martínez et al., 2004).
El banano se caracteriza por la dificultad de
reproducirse a través de la vía sexual, por lo que se
hace necesario emplear otras técnicas que permitan su
propagación. El cultivo de tejidos vegetales in vitro ha
sido considerado como una técnica alternativa para la
propagación masiva de plantas y una de las más utilizadas
en la propagación de especies que tienen dificultades en
su propagación, con ella se logra aumentar la cantidad de
material vegetal, obteniendo un gran número de plántulas
en espacios reducidos, a partir de un solo explante
(meristemo), consiguiendo que este material esté libre de
enfermedades, y reduciendo los costos de producción.
Por lo antes mencionado, la investigación se
realizó utilizando las técnicas de cultivo in vitro de tejidos
vegetales en la propagación de meristemos caulinares
de guineo clon Cavendish, a partir de cormos que se
obtuvieron en plantaciones de huertos familiares del cantón
Paltas, parroquia Lauro Guerrero. El objetivo principal de
la investigación fue el de generar una metodología para fase
de desinfección e implantación de meristemos caulinares
de banano; así como establecer los balances hormonales
adecuados para las fases de proliferación y enraizamiento.
MEtodoLoGÍA
La investigación se desarrolló en el Laboratorio de
Micropropagación Vegetal del Área Agropecuaria y
de Recursos Naturales Renovables de la Universidad
Nacional de Loja, Ecuador. El material vegetal estuvo
conformado por cormos de banano clon Cavendish,
colectados en la parroquia Lauro Guerrero, cantón Paltas,
provincia de Loja, Ecuador.
Fase I. Establecimiento.
El objetivo de esta fase fue probar diferentes métodos para la
desinfección y control de la oxidación fenólica de meristemos
caulinares de banano, durante la fase de establecimiento
utilizando como desinfectantes peróxido de hidrógeno e
hipoclorito de sodio, ambos en concentraciones de 2,5 y 5 %,
por un tiempo de 10 y 5 minutos respectivamente. El medio
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ISSN: 1390-3683
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de cultivo basal estuvo compuesto por las sales de Murashige
y Skoog, MS (1962) a la mitad de su concentración. La
evaluación se realizó a los 5, 10, 15 y 30 días, mediante
observación directa y se registró las siguientes variables:
porcentaje de contaminación, porcentaje de oxidación
fenólica y porcentaje de sobrevivencia. En esta fase se aplicó
un diseño experimental en bloques al azar (DBA), con 12
tratamientos, 3 unidades experimentales y 3 repeticiones
cada uno.
Fase II. Proliferación.
El objetivo de esta fase fue establecer el balance hormonal
adecuado para la proliferación de meristemos caulinares
de banano, estableciendo los siguientes tratamientos: T1=
1mg/l de KIN; T2= 3mg/l de KIN; T3= 3 mg/l de KIN; T4=
3mg/l de BAP; T5= 5 mg/l de BAP; y, T6= 7mg/l de BAP.
El medio basal en estado sólido, estuvo compuesto por las
sales MS+ vitaminas y sacarosa. La evaluación se realizó
a los 45 días, evaluando el número de días a la brotación,
número de brotes, número de hojas y número de raíces. Se
aplicó un diseño experimental de bloques al azar (DBA), con
6 tratamientos y 3 repeticiones cada uno, cada repetición
estuvo compuesta por 9 unidades experimentales.
Fase III: Enraizamiento
El objetivo de esta fase fue determinar las mejores
concentraciones hormonales del medio de cultivo, para
lograr el enraizamiento de vitroplantas de banano, para
ello se utilizó AIA (ácido indol acético) + C.A (carbón
activado), conformando los siguientes tratamientos:
T1= 0,3 mg/l de AIA + 1,5g/l de C.A; T2= 0,3 mg/l de
AIA+3,0g/l de C.A; T3= 0,5 mg/l de AIA+1,5g/l de C.A;
y, T4= 0,5 mg/l de AIA+ 3,0 g/l de C.A. La evaluación
se realizó a los 30 días. Las variables evaluadas fueron:
porcentaje de sobrevivencia, altura de las plántulas,
presencia de raíz, longitud de raíz, número de raíces por
vitroplanta y número de hojas por vitroplanta.
Se aplicó un diseño experimental completamente
al azar, con 4 tratamientos y 3 repeticiones cada uno, dando
un total de nueve unidades experimentales por tratamiento.
RESULtAdoS
En la Fase I de establecimiento, los mejores resultados se
obtuvieron en los tratamientos T2, T3, T5, T6, en donde se
utilizó peróxido de hidrógeno en concentraciones de 2,5
y 5 %, los cuales no presentaron contaminación durante
todo el ensayo (Figura 1).
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Figura 1. Porcentaje promedio de contaminación de los tratamientos evaluados a los treinta días, durante la fase de establecimiento.
Loja, Noviembre – 2013.

Mediante el análisis estadístico se estableció y desinfectados previamente con peróxido de hidrógeno,

que en las dos concentraciones de peróxido de hidrógeno
(2,5 y 5 %), utilizadas durante el proceso de desinfección
tuvieron un efecto significativo sobre los explantes, ya que
no se evidenció contaminación al finalizar el ensayo que
fue a los 30 días.
La oxidación fenólica con el análisis de varianza
de los resultados obtenidos, se pudo determinar que los
explantes con el tratamiento T6 (jugo de limón 150ml/l)
resultó ser el mejor estadísticamente, mostrando el
porcentaje más bajo de oxidación fenólica 2,78 ±2,78 %;
no así en los tratamientos en los que se utilizó hipoclorito
de sodio como desinfectante, el tratamiento T11 también
compuesto por jugo de limón y el tratamiento T8 formado
por ácido ascórbico (100mg/l) + ácido cítrico (150mg/l) +
jugo de limón (150ml/l) presentaron los porcentajes más
altos de oxidación 61,11 ±5,55 % respectivamente (Figura 2).

Figura 2. Porcentaje promedio de oxidación fenólica de explantes de banano, evaluados a los treinta días, durante la fase de
establecimiento. Loja, Noviembre – 2013.

En la Fase de proliferación la mayor tasa de MS + 7mg/l de BAP con 1,33 brotes por explante. La menor
proliferación se evidenció en el medio de cultivo que proliferación se presentó en los medios de cultivo que
contenía las sales MS + 3mg/l de BAP, con un promedio de contenían Kinetina, en donde los promedios no alcanzaron
2,56 brotes por explante, seguido por el medio de cultivo un brote por explante (Cuadro 1).

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Cuadro 1. Efecto de las citocininas (KIN, 6-BAP), en diferentes concentraciones en la fase de proliferación de meristemos caulinares de
banano, a los 45 días de evaluación.

Días a la Brotes por Hojas por Raíces por %

Tratamientos (mg/l)
brotación explante explante explante contaminación
T1 KIN 1 5,00 ±2,01 a 0,56 ±0,17 a 0,00 ±0,00 a 0,00 ±0,00 a 22,2
KIN. 0,00 ±0,00 a 0,00 ±0,00 a 22,2
T1 KIN 3 12,67 ±2,26 ab 0,89 ±0,11 a
(mg/l)
T3 KIN 5 16,38 ±5,70 ab 0,63 ±0,18 a 0,00 ±0,00 a 0,33 ±2,36 a 0,0

T4 BAP 3 23,67 ±2,50 b 2,56 ±0,17 b 0,67 ±0,87 a 1,22 ±0,54 a 0,0
6-BAP 0,00 ±0,00 a 0,00 ±0,00 a 0,0
T5 BAP 5 19,11 ±4,53 ab 0,78 ±0,15 a
(mg/l)
T6 BAP 7 14,89 ±3,37 ab 1,33 ±0,33 a 0,67 ±0,87 a 1,78 ±0,76 b 0,0

Datos expresados como promedio ± error típico. Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0,05)

En la fase de proliferación se trabajó con
explantes asépticos provenientes de la fase de
establecimiento; sin embargo, a pesar de ello se pudo
observar presencia de contaminación, que alcanzó el 22,2
% en los tratamientos T1 y T2, lo cual pudo haber estado
asociado a la presencia de microorganismos endógenos
que pudieron haber permanecido en forma latente en
el interior de los tejidos, apareciendo nuevamente en
presencia de un nuevo medio de cultivo.
Durante esta fase se probaron diferentes
concentraciones de kinetina (1, 3 y 5 mg/l) y 6–BAP, (3, 5 y
7 mg/l) al medio de cultivo, la respuesta de los explantes a
las diferentes concentraciones de kinetina en las diferentes
variables evaluadas no fue significativa estadísticamente;
pues no se alcanzó ningún brote por explante, en el número
de hojas y raíces el resultado fue de cero en ambos casos,
En contraste a esto, los explantes en los que se
adicionó 6-BAP al medio de cultivo, los resultados fueron
diferentes, los cuales mostraron diferencias significativas
al nivel del 5 % para las diferentes variables evaluadas; así
al incorporar 3 mg/l de 6-BAP, se obtuvo el mayor número
de brotes por explante, que alcanzaron un promedio de
2,56 ±0,17, seguido del T6 en el que se incorporó 7 mg/l
de BAP, obteniendo 1,33 ±0,33 brotes por explante. Estas
concentraciones también favorecieron el número de hojas que
tuvo como promedio 0,67 ±0,87 en ambos casos. El número
de raíces se vio beneficiado por la concentración de 7 mg/l
de 6-BAP, obteniendo un promedio de 1,78 ±0,76 raíces por
explante, seguido del T4 con 1,22 ±0,54 raíces por explante.
En lo que refiere a enraizamiento, el mejor
tratamiento resultó el medio de cultivo al que se adicionó
0,5 mg/l de AIA + 3 mg/l de carbón activado, donde se
obtuvo el mayor número de raíces (6,22), mayor número
de hojas (2,77) y mayor altura de la vitroplanta (2,34 cm)
(Cuadro 2). Para la longitud de raíces, no se obtuvo diferencias
estadísticas significativas entre los tratamientos ensayados.

Cuadro 2. Efecto de auxinas (AIA) y carbón activado en diferentes concentraciones en la fase de enraizamiento de vitroplantas de
banano, a los 30 días de evaluación.

Número de Longitud Altura de la Hojas por %

Tratamientos (mg/l) % Raíz
raíces de raíces vitroplanta vitroplanta Sob.
T1 0,3+1,5 0,55±0,44 a 0,25±0,16 a 0,37±0,16 a 0,22±0,22 a 57,4 22,2
AIA+C.A T2 0,3+3,0 3,88±1,11 ab 1,9±0,73 a 1,77±0,48 ab 1,55±0,81 b 88,8 88,8

(mg/l) T3 0,5+1,5 3,44±1,04 ab 2,27±0,76 a 1,37±0,25 ab 1,44±0,68 b 100 100

T4 0,5+3,0 6,22±1,92 b 1,91±0,91 a 2,34±0,84 b 2,77±1,01 b 88,8 88,8
Datos expresados como promedio ± error típico. Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0,05)

Basándose en los resultados obtenidos durante la
fase de enraizamiento, se pudo determinar que existieron
dos tratamientos que mostraron diferencias en las
diferentes variables evaluadas. El T1, en el que se adicionó
0,3 mg/l de AIA + 1,5 de carbón activado al medio de
cultivo, mostró ser el menos eficaz durante esta fase, ya
que presentó los promedios más bajos y estadísticamente
diferentes en todas las variables que se evaluó como fueron:
número de raíces (0,55 ±0,44); longitud de raíces (0,25
±0,16 cm); altura de la vitroplanta (0,37 ±0,16), y número
de hojas (0,22 ±0,22); además, presentó el porcentaje más
bajo de sobrevivencia (57,14%) y la presencia de raíz en los
explantes solo alcanzó el 22,2 %.
A su vez, el T4 (0,5 mg/l de AIA + 3 g/l de carbón
activado), resultó ser el mejor estadísticamente en las
variables número de raíces 6,22 (a) y altura de la vitroplanta
2,34 cm (b); y, aunque en las variables longitud de raíces
y número de hojas, el análisis de varianza indicó que no

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existía diferencias significativas entre tratamientos, si se
pudo apreciar que este tratamiento (T4) se mantuvo como
uno de los mejores con 1,91 cm para la variable longitud de
raíces y 2,77 hojas promedio por vitroplanta. Finalmente,
en esta fase se evaluó el porcentaje de sobrevivencia, en la
cual el promedio más bajo se obtuvo en el T1 con el 57,14 %,
mientras que los demás tratamientos mostraron porcentajes
satisfactorios entre el 88,8 al 100 %.
dIScUSIóN
El desinfectante utilizado inhibió el crecimiento de
microorganismos infecciosos como bacterias y hongos
exógenos, lo que a su vez permitió obtener una mayor
cantidad de material vegetal en el establecimiento de
los explantes, estos resultados son similares con los
obtenidos por Guerrero (2000), quien logró disminuir la
contaminación en explantes de banano, en un 3 % al utilizar
peróxido de hidrógeno durante esta fase. García (2008) y
Saritama (2012), también recomiendan el uso de peróxido
de hidrógeno para desinfectar semillas, obteniendo bajos
niveles de contaminación, pero en concentraciones bajas,
ya que las altas concentraciones (>20 %), podrían provocar
quemaduras en los tejidos expuestos. Por tal razón durante
la investigación se trabajó con concentraciones bajas (2,5 y
5 %) y con el tamaño del explante de tres centímetros, para
evitar la muerte del meristemo por quemaduras debidas a la
presencia del peróxido de hidrógeno.
Entre uno de los factores que influenció en el
porcentaje de oxidación fenólica de los explantes, estuvo
la concentración del desinfectante utilizado durante el
proceso de desinfección; los tratamientos en los que se
utilizó hipoclorito de sodio relativamente mostraron
porcentajes altos de contaminación y oxidación fenólica;
lo contrario se observó en los tratamientos en los que se
empleó peróxido de hidrógeno, en donde la contaminación
fue nula, así también la oxidación fenólica se mantuvo en
un rango moderado, estos resultados coinciden con los
obtenidos por Paliz (2012) quien observó que durante
la fase de establecimiento de ápices de chirimoya, la
frecuencia de explantes contaminados disminuyó con el
aumento de la concentración de cloro, pero la frecuencia de
explantes oxidados aumentaba conforme se incrementaban
las concentraciones de cloro evaluadas.
Por otra parte, al incubar los explantes en cajas
negras, se oscureció el ambiente, con lo cual se pudo observar
que la oxidación fenólica disminuyó considerablemente, esto
se debe a que las enzimas involucradas en la biosíntesis y la
oxidación de fenoles se incrementan con la luz (Paliz, 2012),
por lo cual ha sido usada por varios autores en el cultivo
de tejidos in vitro, debido a su efectividad y accesibilidad
económica. La adición de antioxidantes al medio de cultivo,
fue un aliado efectivo en la disminución de los fenoles
durante el establecimiento de los explantes de guineo.
En la fase de proliferación los resultados obtenidos
son similares a Guerrero y Ramírez (2000) quienes al
utilizar diferentes combinaciones de Kinetina + AIA, no
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evidenciaron presencia de hojas, brotes, ni raíces, por lo que
para este caso se puede evidenciar que el uso de la Kinetina
en la fase de proliferación de banano, no es recomendable.
El 6-BAP incorporado al medio de cultivo, favoreció
la brotación, así como el número de hojas y raíces durante
la fase de proliferación. Estos resultados preliminarmente
permiten establecer que el 6–BAP, es la citocinina que
mejores resultados brinda durante esta fase, lo que se
corrobora con los estudios realizados por Hoyos (2008),
quien utilizando concentraciones similares de 6-BAP logró
obtener en promedio entre 5 y 5,25 brotes por explante en
banano; y, con otros autores quienes al incorporar BAP al
medio de cultivo obtuvieron en promedio entre 3,63 a 4,23
brotes de banano, utilizando concentraciones similares.
Trabajos similares realizados en el CATIE, concuerdan que
durante la fase de proliferación la presencia de citoquininas
es imprescindible, por lo que recomiendan utilizar las
concentraciones de BAP, entre 3 a 5 mg/l.
El tratamiento de enraizamiento T4 (0,5 mg/l
de AIA + 3 g/l de carbón activado) registro los mejores
resultados en cuanto a longitud de raíz, esto concuerda
con lo obtenido por Gutiérrez (1996) quien utilizando
combinaciones de 0,5 mg/l de AIA+ 0g/l de carbón
activado; y, 0,5 mg/l de AIA + 2g/l de carbón activado,
obtuvo vitroplantas de banano con alturas de 5,1 y 4,8 cm
respectivamente.
Se conoce que el pino es una especie que presenta
varias dificultades al momento de emitir raíces; sin
embargo, Dumas y Monteuuis (1995), utilizaron diferentes
concentraciones de carbón activado en sus ensayos lograron
inducir el enraizamiento de las mismas, por lo que recomiendan
su uso durante la fase de enraizamiento de plántulas in vitro.
Los resultados de sobrevivencia según Lozano
(2011) indican que los bajos porcentajes obtenidos podrían
estar asociados a la escasa adaptabilidad de los explantes a
las nuevas concentraciones hormonales, ocasionando en los
mismos un estrés ambiental y la posterior muerte del explante.
coNcLUSIoNES
Durante la fase de establecimiento, los porcentajes más bajos
de contaminación se observaron en los tratamientos en los
que se utilizó peróxido de hidrógeno como desinfectante, en
concentraciones de 2,5 y 5 %, por un tiempo de exposición
de 10 y 5 minutos respectivamente. La reducción del
tamaño del explante caulinar de guineo, durante la fase
de establecimiento contribuyó notablemente a reducir el
porcentaje de contaminación. Para el control de la oxidación
fenólica, el porcentaje más bajos de oxidación se presentó en
el tratamiento en donde se empleó jugo de limón (150 mg/l)
como antioxidante. En la fase de proliferación, la adición al
medio de cultivo MS de 3 mg/l de 6-BAP presentó la mayor
tasa de brotación, con un promedio de 2,56 brotes por
explante. Para la fase de enraizamiento, el medio de cultivo
MS, suplementado con 0,5 mg/l de AIA y 3 g/l de carbón
activado, brindó los mejores resultados en cuanto a número
de raíces, número de hojas y altura de la vitroplanta.
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Tandazo et al. 2014; Propagación in vitro de banano, mediante la utilización de meristemos caulinares.
AGRAdEcIMIENtoS
A la Universidad Nacional de Loja, a través del
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Vol.4 Diciembre 2014
ISSN: 1390-3683
pp. 119-124
Bosques latitud cero. Número 4. Diciembre 2014 pp. 124-124
Laboratorio de Micropropagación Vegetal, por el apoyo
financiero y técnico brindado para la ejecución de la
presente investigación.
a la obtención de Ingeniería en Biotecnología. Escuela
Politécnica del Ejército. Departamento de Ciencias de la
Vida. Carrera de Ingeniería en Biotecnología. Sangolqui –
Ecuador.
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Paliz, K. 2012. Desarrollo de un protocolo de
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a la obtención de Ingeniería en Biotecnología. Escuela
Politecnica del Ejército. Departamento de Ciencias de la
Vida. Carrera de Ingeniería en Biotecnología. Sangolqui –
Ecuador.
Saritama, A. 2012. Establecimiento de un protocolo para
la germinación in vitro e inducción a callo embriogénico
de cedro (Cedrela montana), a partir de embriones
zigoticos. Tesis de grado previa a la obtención de Ingeniería
en Biotecnología. Escuela Politécnica del Ejército.
Departamento de Ciencias de la Vida. Carrera de Ingeniería
en Biotecnología. Sangolqui – Ecuador.