CODIGO: P-SA-123

FECHA DE
PROCEDIMIENTO TÉCNICO PARA PRUEBA NO 21/11/2016
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TREPONEMICA SIFILIS – METODO VDRL Y RPR
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PROCEDIMIENTO TÉCNICO PARA PRUEBA NO TREPONEMICA

SIFILIS – METODO VDRL Y RPR CARBON

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

REFERENTE DE LABORATORIO SECRETARIO DE SALUD REPRESENTANTE DE LA DIRECCIÓN
REPRESENTANTE DE CALIDAD
DIRECTOR (S) TECNICO (S)
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1. OBJETIVO

Establecer la metodología para el diagnóstico serológico de sífilis mediante la

realización de pruebas no treponémicas (VDRL y RPR) en suero.

2. ALCANCE

Este procedimiento se realiza a muestras de instituciones públicas y privadas que

realizan el diagnóstico de Sífilis con el fin de realizar la vigilancia por medio de la
evaluación externa del desempeño indirecta.

Además se reciben sueros de pacientes procedentes de los Laboratorios Públicos y

privados de los diferentes Municipios del Meta, como apoyo en la lectura para la
emisión de un resultado final.

3. DEFINICIONES

 Pruebas Treponèmicas: pruebas que usan el Treponema pallidum o

componentes de este como antígeno.
 Pruebas no Treponemicas: pruebas realizadas con antígeno de naturaleza
lipidico que miden anticuerpos tipo Ig G e IgM formados por el huésped como
reacción a lipoproteínas y cardiolipinas consecuencia del daño celular producido.
 VDRL: (Venereal Disease Research Laboratory) es una suspensión alcohólica
que contiene cantidades estandarizadas de cardiolipina, lecitina y colesterol.
 USR: Unheated Serum Reagin. Prueba no treponémica mas estabilizada con la
cual no hay necesidad de inactivar la muestra, ni de prepararse diariamente el
antígeno.
 RPR: (Rapad Plasma Reagin) suspensión estabilizada que contiene cardiolipina,
lecitina y colesterol. a la cual se le ha adicionado partículas de carbón.
 Floculación: El proceso mediante el cual las partículas finas son forzadas a
agruparse en floculos, estos floculos pueden tender a flotar en la superficie.
 Reaginas: anticuerpo inducido por alergeno del tipo IgE que se asemejan a los
mastocitos y que se producen en el asma y fiebre del heno. En las reacciones
antígeno-anticuerpo desencadena la liberación de histamina y de otros
mediadores por degranulacion de los polinucleares que provocan síntomas
atópicos
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 Cardiolipinas: Son fosfolípidos presentes principalmente en las membranas

mitocondriales internas y en las membranas plasmáticas bacterianas; se
emplean en pruebas no treponémicas para el diagnóstico de sífilis

4. RESPONSABILIDAD

Este procedimiento debe ser realizado por un Profesional de Laboratorio (Bacteriólogo)

previamente entrenado, sin hacer ningún cambio que no esté debidamente
documentado y autorizado

5. GENERALIDADES

La sífilis es una enfermedad venérea causada por el Treponema pallidum, que invade
las mucosas intactas o la piel en áreas de abrasiones. El contacto sexual es la forma
más común de transmisión.
La detección y tratamiento de la enfermedad en sus estadios tempranos es fundamental
a fin de evitar complicaciones graves como la sífilis cardiovascular, neurosífilis y sífilis
congénita. El diagnóstico de esta enfermedad sufre carencia de un método para cultivar
el microorganismo en medios de laboratorio y la dificultad para detectarlo en estadios
de la enfermedad en los que no se observan lesiones epidérmicas. Sin embargo, desde
el comienzo de la infección aparecen en el suero del individuo infectado ciertas
sustancias nominadas “reaginas”, que reaccionan con antígenos de cardiolipina, lecitina
y colesterol. Estas reaginas junto a los signos clínicos son por lo tanto los
procedimientos más rápidos y útiles disponibles para diagnóstico de sífilis.

La evolución clínica de la sífilis se divide en tres fases. La fase inicial o sífilis primaria se
caracteriza por la formación de una o más lesiones cutáneas (chancros) en el lugar de
entrada de las espiroquetas, este aparece generalmente a los 21 días del contacto
infeccioso. Aunque las bacterias se diseminan a través del torrente circulatorio poco
después de la infección, el chancro representa el sitio principal de replicación inicial. El
examen histológico de la lesión revela la presencia de endarteritis y periarteritis.
(Características de las lesiones sifilíticas en todas las fases) e infiltración de la ulcera
por leucocitos polimorfo nucleares y macrófagos. Las espiroquetas son ingeridas por las
células fagocíticas, pero suelen sobrevivir. En la sífilis secundaria aparecen los signos
clínicos de enfermedad diseminada con importantes lesiones cutáneas distribuidas por
toda la superficie corporal, estas manifestaciones clínicas aparecen generalmente 6 a
12 semanas después del periodo infectivo. Pueden ocurrir remisiones espontaneas
después de las fases primaria y secundaria o bien la enfermedad puede progresar a la
última fase, la sífilis tardía en la que se pueden afectar prácticamente todos los tejidos.
El enfermo queda asintomático y la enfermedad pasa a su estado latente, sífilis latente
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es la fase asintomática de la sífilis, cuando se resuelven las manifestaciones de la sífilis

primaria y secundaria, aunque no implica ausencia de progresión de la enfermedad.

La sífilis latente precoz se extiende hasta 1 o 2 años después del contacto infectante,
puede ser asintomática durante todo su curso o este verse interrumpido por los
síntomas de recurrencia de la sífilis secundaria.
Después de 1 o 2 años se habla de sífilis latente tardía, la que es asintomática, todos
los pacientes con sífilis latente tardía deben ser evaluados clínicamente buscando
aortitis, neurosífilis, gomas e iritis. Después de un tiempo variable que se mide en anos,
33% de los no tratados pueden desarrollar manifestaciones clínicas de sífilis terciaria,
ella comprende: sífilis terciaria benigna (gomas), sífilis cardiovascular y neurosífilis. De
los no tratados se estima que entre 8 y 40% tendrán neurosífilis asintomática,
desconociéndose cuáles de ellos progresarían a formas sintomáticas.

La sífilis meningovascular generalmente ocurre entre 5 y 10 años después de la

infección primaria, mientras que la neurosífilis parenquimatosa (tabes y parálisis
general) es más tardía, haciéndose manifiesta décadas después de la lesión primaria
(10-20 o más años) (1) .Cada fase representa una multiplicación localizada de
espiroquetas y la destrucción tisular, aunque la replicación es lenta, en el chancro inicial
existe un elevado número de microorganismos al igual que en las lesiones de la sífilis
secundaria, lo que hace que el paciente sea muy infeccioso en estos estadios.
T.pallidum (trepo: giro; nema, hebra ;hebra que gira) es una espiroqueta delgada
enroscada que mide 6 a 12 μm de longitud y 0,25 μm de diámetro, posee de 6 a 14
espirales regulares, es móvil, se reproduce por fisión binaria. No se colorea (de allí su
nombre pallidum: pálido; en referencia a la ausencia de tinción de estos
microorganismos con los colorantes convencionales) y solo puede observarse en el
microscopio de campo oscuro o mediante la tinción con anticuerpos específicos anti
treponema marcados con colorantes fluorescentes (2,3, 4).

T. pallidum es muy lábil al calor, cambios de pH, humedad, desecación, detergentes y

desinfectantes. Estas espiroquetas son incapaces de desarrollarse en los cultivos
acelulares. Las espiroquetas se consideraron inicialmente bacterias anaerobias
estrictas; sin embargo, actualmente se sabe que pueden usar la glucosa de manera
oxidativa.

6. DESARROLLO

Las muestras recibidas sean para apoyo diagnóstico o Evaluación Externa del
desempeño Indirecta (EEDI) se registraran en el formato F-SA-87 Recepción de
muestras y entrega de resultados atención a las personas.
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6.1 MÉTODO CUALITATIVA VDRL EN SUERO:

6.1.1 Fundamento
La prueba de VDRL-USR es una prueba microscópica que utiliza un antígeno no
treponémico, el cual al unirse a los anticuerpos en el suero o líquido cefalorraquídeo de
pacientes con sífilis y ocasionalmente en pacientes que cursan con ciertos procesos
agudos o crónicos, produce el fenómeno de floculación. La prueba USR es una
modificación del VDRL que contiene cloruro de colina fortalece la reactividad en sueros
no inactivados además en la prueba USR no se necesita preparar ni descartar el
antígeno diariamente.

Las pruebas de floculación en lámina para sífilis son afectadas por la temperatura
ambiente. Para obtener resultados confiables y reproducibles, la prueba debe realizarse
en un ambiente con temperatura entre los 23 y 29 °C; a temperaturas más bajas la
reactividad de la prueba disminuye y a temperaturas más altas la reactividad de la
prueba aumenta.

6.1.2 Materiales y equipos

 Termo higrómetro
 Gotero
 Agitador rotativo ajustable a 180 rpm
 Placa de vidrio transparente con sectores de 14 mm de diámetro cada uno
 Micropipeta para medir volumen indicado (50 Ul)
 Microscopio
 centrifuga

6.1.3 Reactivos
VDRL
 Reactivo A, suspensión acuosa de antígeno de cardiolipina y lecitina
purificados, en buffer fosfatos con cloruro de colina y EDTA de acuerdo
a las indicaciones de la O.M.S.
 Los controles está listos para su uso (control positivo y control
negativo)
 Solución salina.

6.1.4 Otros
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 Palillos
 Recipiente plástico con hipoclorito 0,5% para descartar material contaminado.
 Toallas de papel.
 Puntas desechables para las pipetas automáticas.
 Gradillas.
 Guantes.
 Marcador de tinta indeleble.
 Papel kraft

6.1.5 Procedimiento
 Cada vez que realice la prueba se debe utilizar los sueros control de
reactividad conocida (reactivo y no reactivo) para determinar la calidad del
antígeno con la cual se va a realizar la prueba. Las reacciones con los sueros
control deben reproducir exactamente el patrón de reactividad establecidos
para tales sueros.

 La muestra de suero debe ser limpia y obtenida por centrifugación de sangre

recolectada sin anticoagulante.

 En el momento de realizar la prueba, los sueros deben estar a temperatura

ambiente (23 a 29º C).

 Con una micropipeta, coloque 50 μl de suero dentro de un círculo de la

lámina de vidrio.

 Con un palillo plástico o de madera o con la misma punta de la pipeta

extienda el suero en la superficie de la placa de vidrio demarcada por el
anillo.

 Mezcle muy bien el antígeno que va a utilizar para la prueba y adicione una
gota de este sobre cada uno de los sueros con el gotero dispensador que
cada kit trae para este fin.

 Rote las láminas durante 4 minutos en un agitador mecánico a 180 •+/- 2

rpm. (registrar mantenimiento en el formato FS-A-34)

 Leer las pruebas inmediatamente después de la rotación, con el microscopio

y objetivo 10x. (registrar mantenimiento en el formato FS-A-34)
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6.2 PRUEBA CUALITATIVA RPR EN SUERO

6.2.1 Fundamento

El antígeno usado en este análisis es una modificación del antígeno VDRL el cual
contiene cloruro de colina para eliminar la necesidad de inactivar el suero y
micropartículas de carbón para aumentar la diferencia visual entre un resultado
Reactivo y No Reactivo. Si una muestra contiene anticuerpos anti reagínicos, se
observa una aglutinación de las partículas antígeno-carbón.

6.2.1.1Materiales
6.2.1.1.1 Equipos

 Gotero
 Tarjeta visualizadora con círculos separados
 Agitador rotativo ajustable a 100 rpm
 Micropipeta para medir volumen indicado (50 Ul)

6.2.1.1.2 Reactivos
 Agitar suavemente el vial hasta obtener una suspensión homogênea.
Acoplar La aguja al dispensador de plástico y aspirar por succión la
cantidad de RPR-Carbón que se considere necesaria.
 Los controles está listos para su uso (control positivo y control
negativo)
 Solución salina.

6.2.1.1.1.3 Otros
 Palillos
 Recipiente plástico con hipoclorito 0,5% para descartar material
contaminado.
 Toallas de papel.
 Puntas desechables para las pipetas automáticas.
 Gradillas.
 Guantes.
 Marcador de tinta indeleble.
 Papel kraft
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6.2.2 Procedimiento

 Cada vez que realice la prueba se debe utilizar los sueros control de
reactividad conocida (reactivo y no reactivo) para determinar la calidad
del antígeno con la cual se va a realizar la prueba. Las reacciones con
los sueros control deben reproducir exactamente el patrón de
reactividad establecidos para tales sueros.
 La muestra de suero debe ser limpia y obtenida por centrifugación de
sangre recolectada sin anticoagulante.
 Se debe examinar cuidadosamente los sueros y centrifugar
nuevamente los sueros que presenten partículas, hematíes o turbidez.
 En el momento de realizar la prueba, los sueros y reactivos deben
estar a temperatura ambiente entre 23 a 29 °C.
 Con una micropipeta, coloque 50 μl de suero dentro de un círculo de la
lámina de cartón.
 Con un palillo plástico o de madera o con la misma punta de la pipeta
extienda el suero en la superficie de la placa de carton demarcada por
el anillo.
 Mezcle muy bien el antígeno que va a utilizar para la prueba
sacándolo por succión directamente con la aguja conectada en el
frasco dispensador, adicione una gota de este sobre cada uno de los
sueros. Nunca agitar el antígeno.
 Rote las láminas durante 8 minutos en un agitador mecánico a 100
•+/- 2 rpm.
 Leer las pruebas inmediatamente después de la rotación
microscópicamente a luz directa.
6.3 Controles y/o curvas de calibración
Un control positivo (reactivo)
Un control negativo (no reactivo)

6.4 Acondicionamiento y manejo de equipos

El acondicionamiento y manejo de equipos se realiza según Formato Hoja de
vida de equipos (F-SA-18) de los mismos.

6.4.1 Condiciones ambientales

El análisis de puede efectuar dentro de las siguientes condiciones ambientales:
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Condición Ambiental Rango

Temperatura Ambiente 23 y 29 °C

Las condiciones de temperatura del área son registradas en el F-SA-44 Formato Control
de temperatura y humedad relativa ambiental.

6.4.2 Descripción del método

6.4.2.1 Preparación de la muestra.
 La muestra de suero debe ser limpia y obtenida por centrifugación de sangre
recolectada sin anticoagulante.
 Se debe examinar cuidadosamente los sueros y centrifugar nuevamente los
sueros que presenten partículas, hematíes o turbidez.
 En el momento de realizar la prueba, los sueros deben estar a temperatura
ambiente (23 a 29º C).

6.4.3 Cálculos y/o valores de referencia

Método VDRL
Una vez se ha realizado la lectura en el microscopio objetivo de 10X, se informa los
resultados de la siguiente manera:

NOTA: ocasionalmente puede presentarse el fenómeno de prozona. Este fenómeno se

observa cuando hay exceso de anticuerpos y se presenta una completa o parcial
inhibición de la reactividad en un suero no diluido. En ocasiones dicho fenómeno es
muy grande, dando reacciones débilmente reactivas o ligeramente grumosas en sueros
no diluidos. Por lo anterior se recomienda que a todo suero que presente reacción débil
reactiva o ligeramente grumosa en la prueba cualitativa, se le haga la prueba
cuantitativa antes de dar el resultado de la prueba VDRL.
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Método RPR

LECTURA INTERPRETACION
Aglutinación gruesa en Reactivo (R)
el centro y la periferia
Presencia de pequeñas
aglutinaciones al borde
del círculo
Suspensión homogénea No reactivo

REPORTE CUANTITATIVO

Toda prueba con resultado Reactivo en la fase cualitativa debe titularse para informarse
cuantitativamente (RPR y VDRL)

6.5 Reporte de resultados

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Los datos obtenidos posteriores a las lecturas provenientes de muestras para

apoyo diagnóstico o para evaluación externa del desempeño indirecta son
registrados en el Formato F-SA-188 Formato de Evaluación externa del
desempeño indirecta (EEDI) Serología para sífilis y se ingresan en el sistema
interno de información del Laboratorio de Salud Pública para luego ser enviados
a los laboratorios solicitantes o participantes.

6.6 Aseguramiento de Calidad de los resultados

6.6.1 Control de Calidad Interno
Para controlar la calidad analítica del sistema procesar los controles
provistos o un control positivo (suero seguramente reactivo) y un control
negativo (suero seguramente no reactivo) utilizándolos de la misma forma
que las muestras el resultado obtenido de estos controles debe ser
registrado en el formato F-SA-169 Control de Calidad Pruebas cualitativas,
se debe correr el control cada vez que se realice montaje de muestras.
6.6.1.1 Control de Calidad Externo
Se realiza prueba de Idoneidad de Virología con el INS (PISS) y en el MLE,
el análisis de los resultados se registra en el F-SA-109 Análisis de
resultados de control de calidad externo.

7 REGISTROS
Como Tiempo de
Registro Responsable Donde conservarlo Disposición final
conservarlo conservación

Auxiliar de Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado
F-SA-34 Laboratorio, Maestro de documentos, Maestro de documentos, Maestro de documentos,
Control Interno Profesional Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado
de Equipos. Universitario o maestro de registros y/o maestro de registros y/o maestro de registros y/o
Profesional del Físico tabla de retención tabla de retención tabla de retención
Laboratorio documental documental documental

Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado

Profesional
Maestro de documentos, Maestro de documentos, Maestro de documentos,
F-SA-18 Hoja Universitario o
Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado
de vida de Profesional del Físico
maestro de registros y/o maestro de registros y/o maestro de registros y/o
Equipos. Laboratorio
tabla de retención tabla de retención tabla de retención
documental documental documental

Auxiliar de
Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado
F-SA-44 Laboratorio,
Maestro de documentos, Maestro de documentos, Maestro de documentos,
Control de Profesional
Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado
temperatura y Universitario o
maestro de registros y/o maestro de registros y/o maestro de registros y/o
humedad Profesional del Físico
tabla de retención tabla de retención tabla de retención
relativa Laboratorio
documental documental documental
ambiental
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Como Tiempo de
Registro Responsable Donde conservarlo Disposición final
conservarlo conservación

F-SA-87 Auxiliar de Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado
Recepción de Laboratorio Maestro de documentos, Maestro de documentos, Maestro de documentos,
muestras y Profesional Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado
entrega de Universitario o Físico maestro de registros y/o maestro de registros y/o maestro de registros y/o
resultados Profesional del tabla de retención tabla de retención tabla de retención
atención a las Laboratorio documental documental documental
personas
F-SA-188
Formato Profesional
Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado
Evaluación Universitario o
Maestro de documentos, Maestro de documentos, Maestro de documentos,
Externa del Profesional del
Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado
Desempeño Laboratorio
Físico maestro de registros y/o maestro de registros y/o maestro de registros y/o
Indirecta
tabla de retención tabla de retención tabla de retención
(EEDI)
documental documental documental
Serología para
sífilis
F-SA-169 Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado
Control de Profesional Maestro de documentos, Maestro de documentos, Maestro de documentos,
calidad Universitario o Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado
pruebas Profesional del Físico maestro de registros y/o maestro de registros y/o maestro de registros y/o
cualitativas Laboratorio tabla de retención tabla de retención tabla de retención
documental documental documental
F-SA-109 Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado Según F-MC-04 Listado
Análisis de Maestro de documentos, Maestro de documentos, Maestro de documentos,
resultados de Profesional Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado Según F-MC-03 -Listado
control de Universitario o Físico maestro de registros y/o maestro de registros y/o maestro de registros y/o
calidad Profesional del tabla de retención tabla de retención tabla de retención
externo Laboratorio documental documental documental

8 ANEXOS
Inserto VDRL test (Referencia), inserto RPR-carbón.
9 HISTORIAL

VERSIÓN VIGENCIA IDENTIFICACIÓN DE LOS

CAMBIOS
1 21/11/2016 Versión inicial