"Año del Diálogo y Reconciliación Nacional"

UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SANCHEZ CARRIÓN

Escuela de Biología con mención en Biotecnología
Facultad de Ciencias

Materia:
Genética

Docente:
Blga. Carmen E. Rojas Zenozaín

Nombre del estudiante:

Fiorella Valentina Argüelles Saenz

Tema del trabajo:

Obtención de cariotipo de Capsicum pubescens R & P “rocoto”
 OBTENCION DEL
CARIOTIPO DEL Capsicum
pubescens R & P “rocoto”
 RESUMEN
Caracterización cariotipico de Capsicum pubescens R & P
(Solanacea) “rocoto”. Los cromosomas han sido identificados más no
caracterizados, empleando una metodología modificada.
Palabras clave: cromosomas, Capsicum, cariotipo

ABSTRACT
Karyotypic characterization of Capsicum pubescens R & P
(Solanacea) "rocoto". The chromosomes have been identified more
uncharacterized, using a modified methodology.
Key words: Chromosomes,Capsicum
DEDICATORIA
El presente trabajo va dedicado a mi familia
y a mis abuelitos que están en el cielo, que
aun así siguen siendo los motores para cada
avance y desarrollo académico.
 INDICE
MARCO TEORICO

Antecedes de la investigación……………………..………….………….…………………..1

Bases teóricas…….……………………………………………….………………………….2

OBJETIVOS Y METAS…………………..….…………………………………………………….4

HIPOTESIS…………………………………...……………………………………………………..5

METODOLOGÍA……………………………...……………………………………………………5

RESULTADOS………………………………..…………………………………………………….7

DISCUSIÓN………………………...……………………………………………………………….9

CONCLUSIONES…………………..…………...………………………………………………….9

REFERENCIAS CONSULTADAS……………………….…………………...…………………10

ANEXOS…………………………………………………………………………...……………….11
 1

I.MARCO TEORICO:
1.1. ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN:
(Talledo & Escobar,1993) indicaron que las investigaciones citológicas no sólo dan a conocer
las peculiaridades citogenéticas de los organismos (ciclo celular, número y morfología
cromosómica), sino que gracias a la particular condición de los cromosomas como portadores
de la herencia también permiten: i) utilizar criterios adicionales para la clasificación
taxonómica y filogenética de las especies; ii) aclarar una serie de problemas evolutivos (tanto
generales como referidos al origen de determinados grupos); iii) predecir el comportamiento
de las muestras en los bancos de cultivos in vitro y iv) asimismo constituyen un requisito
indispensable para la caracterización a nivel molecular.
(Heywood, 1968), mencionó que la citología ha influido sobre la taxonomía y los estudios
evolucionarios, ya sea sola o con la genética (citogenética). Los caracteres citológicos son
usados en forma similar a cualquier otra clase de datos comparativos.
(Guevara, Siles & Bracamonte,2000) Demostraron que C. pubescens R & P “rocoto” tiene
un número cromosómico diploide 2n = 24, de los cuales once pares son metacéntricos y un
par submetacéntrico.
 2

1.2. BASES TEÓRICAS:

1.2.1. Capsicum pubescens R & P “rocoto”

1.2.1.1. Clasificación de Capsicum pubescens, según Ruiz & Pav (1799)

Reino: Plantae
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Orden: Solanales
Familia: Solanaceae
Género: Capsicum
Especie: Pubescens

1.2.2. Descripción:
Esta especie de Capsicum tiene características más definidas en pubescencia,
color de la flor y la semilla. Es un arbusto bajo, que crece hasta 1 metro si
están tutoradas. Las ramificaciones son compactas; follaje suave, oscuro y
muy pubescente; flores solitarias, cáliz cupular y pubescente, corola de color
púrpura. El fruto presenta menos diversidad de forma que las otras especies
de Capiscum, es elipsoidal y de longitud variable desde 2.5 cm de longitud.

Imagen 01. Anatomía de Capsicum pubescens R & P, “rocoto”.

Fuente: Cazorla,A.(2016) Partes de un fruto del género Capsicum.[imagen].
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1.2.3. Composición química.

Contiene Capsaicina, el alcaloide mayoritario presente en las variedades
picantes del género Capsicum. Son aminas simples con nitrógeno extra
cíclico, de carácter básico y son productos del metabolismo de los
aminoácidos; es un alcaloide oxigenado, en cuyo caso de manera pura, se
encuentra un sólido cristalizable, incoloro y blanco. (Balseca y Rivadeneira,
2013)

Tabla 1.2.3.Composicion química del rocoto (Capsicum pubescens R & P)

en 100 gr. De pulpa
Por 100 gr., de peso neto Mínimo Máximo
Agua 20.7 gr. 93.1 gr.
Hidratos de carbono 5.3 gr. 63.8 gr.
Proteinas 0.8 gr. 6.7 gr.
Extracto etéreo 0.3 gr. 0.8 gr.
Fibra 1.4 gr. 23.2 gr
Cenizas 0.6 gr. 7.1 gr.
Calcio 7.0 mg. 116.0 mg.
Fósforo 31.0 mg. 200.0 mg.
Hierro 1.3 mg. 15.1 mg
Caroteno 0.03 mg. 25.2 mg
Tiamina 0.03 mg. 1.09 mg
Riboflavina 0.07 mg. 1.73 mg
Niacina 0.75 mg. 3.30 mg
Ácido ascórbico 14.4 mg. 157.5 mg
Capscisina 150 mg. 335mg

FUENTE: Reyes et al. (2009)

1.2.4. Hábitat.
Este ají crece en zonas relativamente elevadas, es cultivado y consumido en
las zonas altas y frías del país, en altitudes de 1 700 a 2 400 m. Es una especie
poco explotada. (Pérez y Castro, 1998)

1.2.5. Distribución geográfica.

El Capsicum pubescens R & P, se cultiva desde México hasta el Perú, pero su
lugar de origen es Colombia y Perú. (Pérez y Castro, 2008)
.
 4

1.2.4.7. Criterios de crecimiento.

 Altura: Los cultivos de rocoto se ubican entre los 300 y 1900 m.s.n.m.
en la ceja selva, se siembra preferentemente en la parte media y alta de
los cerros, por tradición y para obtener mejores rendimientos, la altura
óptimas el desarrollo del cultivo está entre los 900 y 1200 msnm.
 Precipitación: El cultivo requiere un precipitación entre 0 y 1200 mm,
para poder desarrollarse con un manejo de cultivo constante para evitar
las enfermedades y plagas. Un veranillo prolongado en determinada
fase de crecimiento puede ser crítica para el cultivo.
 Temperatura: El cultivo requiere de temperaturas mayores de 20°C
para poder desarrollarse en óptimas condiciones, teniendo como límite
máximo los 40°C.A temperaturas menores de 7°C la floración se
retarda.
 Vientos: Los vientos fríos y secos producen una excesiva
evapotranspiración y dan lugar a algunos daños por frio, dependiendo
en la etapa en que se encuentre el cultivo, los vientos cálidos hacen que
el cultivo se desarrolle con normalidad.
 Nubosidad: Los rendimientos del cultivo son mayores cuando hay
mayor cantidad de iluminación solar.
 Fecha de Siembra: La mejor época son los meses de agosto y setiembre
debido a su proximidad al periodo de lluvias. Sin embargo se puede
sembrar en cualquier época del año.

II. OBJETIVOS Y METAS

2.1. OBJETIVO GENERAL:
-Obtener el cariotipo del Capsicum pubescens R & P ”rocoto”.

2.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS:

- Determinar el número de cromosomas presentes en el Capsicum pubescens R & P
”rocoto”.
-Clasificar los cromosomas.
-Medir brazos cromosómicos.
 5

III.HIPOTESIS
Evaluar si la metodología utilizada ayudará a la observación optima de los cromosomas del
Capsicum pubescens R & P”rocoto”.

IV.METODOLOGIA
4.1. Obtención de raíces
La germinación del Capsicum pubescens R & P”rocoto” lo lleve a cabo en placas petri
(Anexo 01), para obtener una germinación mucho más rápida se utilizó papel toalla como un
medio de transporte de humedad (agua potable), donde se logró obtener el desarrollo de la
radícula satisfactoriamente.
4.2. Prefijación y Fijación
A partir de ello las radículas fueron sumergidas en una solución de colchicina; esta se obtuvo
en pastilla al 0,05% que fue triturada y disuelta en 10mL de agua destilada.
(Alcorcés,2001).Al no conseguir los resultados esperados se realizó una modificación con
respecto a su concentración, en este caso se usó la colchicina al 0.10%.
Se cortó con sumo cuidado la parte terminal de la raíz que comprende el meristemo de 1-2
cm de longitud, donde fueron trasladados a un recipiente que contenía el fijador Carnoy (3
partes de etanol absoluto, 1 parte de ácido acético glacial) a 4°C durante 20 minutos.
(Guevara,2000). En esta parte del proceso hubo una modificación en relación al tiempo del
fijador Carnoy, en este caso solo se dejó actuar durante 15 minutos.
4.2. Hidrolisis o maceración y Ablandación
Las muestras fijadas se transfirieron al recipiente con solución Targa (ácido acético, ácido
láctico y agua destilada en proporciones 9:5:6) dejando actuar por un tiempo de una hora.
(Guevara,2000)
4.3.Tinción
La muestra fue trasladada a un recipiente con orceína lacto acética al 2% dejando reaccionar
durante 15 minutos, próximamente se llevó a cabo el método de los tres humos, y luego se
pasó a realizar los cortes muy finos y pequeños del meristemo de la raíz aproximadamente
1mm colocándolos sobre una lámina porta objeto y posteriormente situando el cubre objeto
sobre esta, finalmente se empleó el método Squash o prensado que consiste en golpear
suavemente la muestra con la finalidad de extender el tejido y formar una monocapa. El
exceso de colorante se quitó con papel higiénico. (Guevara,2000)
Por último, fue sellada con esmalte transparente para su conservación.
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4.4. Observación al microscopio.

Las observaciones preliminares de las muestras se realizaran a 100x aumentos con el
propósito de buscar dispersión de las células, separación de los cromosomas y buena tinción.
4.5.Microfotografiado
Una vez ubicadas y observadas las muestras se tomara la fotografía en los aumentos de 100x
y 40x con una abertura de diafragma y velocidad de exposición de 60 segundos.

Materiales
 Mechero
 Luna de reloj (dos unidades)
 Bisturí
 Semillas germinadas de Capsicum pubescens R & P
 Papel toalla
 Cuatro recipientes
 Agua destilada (1L)
 Laminillas y cubre objetos
 Esmalte transparente
Reactivos
 Ácido acético
 Etanol 100°
 Ácido láctico
 Orceína lacto acética 2%
 Colchicina 0.10%

Equipos

 Microscopio optico
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V.RESULTADOS

Imagen 01. Células correspondientes a Capsicum pubesecens R&P “rocoto”. Objetivo

400x.En ella se muestra la medida de la célula en el ciclo celular de la profase, con una
longitud de 52,306 𝜇𝑚

b
c

a b c
Imagen 02. Células metafasicas correspondientes a Capsicum pubesecens R&P “rocoto”.
Objetivo 100x.
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Imagen 03. Cariotipocas correspondiente a Capsicum pubesecens R&P “rocoto”. Objetivo

100xEn ella se muestras (a)

Imagen 04. Cariotipo de Capsicum pubesecens R&P “rocoto” con la placa metafasica.
Objetivo 600x. En ella se muestran (a) constricciones secundarias (b) constricciones
primarias.
Fuente: (Guevara, Siles & Bracamonte, 2000), Obtenido de:
http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/rpb/article/viewFile/6816/6032
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VI.DISCUSION
La fijación se realizó con CARNOY, y la coloración convencional se realizó con orceína
lacto-acética (Chattopadhyay y Sharma, 1988).La modificación de la metodología fue el uso
de un ablandador de las raíces que fue en este caso la solución Targa.
La hidroxiquinoleína como antimitótico,se sabe que esta sustancia inactiva el huso, no
ocasiona ningún obstáculo para la separación cromosómica durante el aplastado, y los brazos
cromosómicos se contraen equitativamente. Las constricciones primarias se vuelven
conspicuas, de modo que los centrómeros pueden analizarse fácilmente. Es ampliamente
utilizada en vegetales y es especialmente adecuada para especies con cromosomas grandes
(Sharma y Sharma, 1972). Debido a que esta prohibida la venta de esta sustancia, fue
sustituida por colchicina, deteniendo la división celular y ayudando a obtener la mayor
cantidad de metafases, la cual evita la polimerización del huso mitótico empleando una
concentración de 0.10%

VII.CONCLUSIONES
 La concentración de la colchicina en pastilla (0.05%) al inicio no fue la apropiada
en el proceso, puesto que no se llegó a lograr lo esperado, posteriormente decidí
aumentar su concentración a 0.10%, obteniendo mejores resultados, esto permitió
que las células permanecieran por un corto periodo. en el ciclo celular metafase.
 El microfotografiado se debe realizar al instante de haber localizado los
cromosomas dispersos para realizar el cariotipo , de manera que el fijador solo
perdura un día más después de haber llevado a cabo la metodología es decir su
ciclo celular continua.
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XI.REFERENCIAS CONSULTADAS:
Alcorcés,N.(2001).Revista UDO Agrícola. Estudios cromosómicos de cuatro selecciones
de Capsicum chinese,1(1),34-41.
Balseca, D. y Rivadeneira, L. (2013). Extracción y cuantificación de capsaicina a partir
de cinco especies nativas del género Capsicum existentes en el ecuador mediante
cromatografía líquida de alta definición (Tesis de Pregrado). Universidad Nacional Del
Centro Del Perú.
Chattopadhyay & Sharma.(1988).Tratamiento acido para bandeo con orceina.EE.UU:
Stain Technology
Cuenca,J.,Mota,M. & Sipan,C.(2016). Biología molecular y citogenética. Madrid:
Ediciones Paraninfo.
Guevara,M.,Siles,M. & Bracamonte,O.(2000).Revista peruana de biología. Análisis
cariotípico de Capsicum pubescens R&P (Solanaceae) “rocoto”, 7(2), 134-141
Pérez, G. & Castro, B. 2008. El chile manzano. Universidad Autónoma Chapingo
(UACH). La Reimpresión.
Pérez, M. y Castro, R. 1998. Guía para la producción intensiva de chile manzano. Boletín
de divulgación. vol (1). Programa Nacional de investigación en Olericultura.
Departamento de Fitotecnia. Universidad Autónoma Chapingo (UACH).
Pizarro, R.(2014).Cariotipo y determinación del numero de cromosomas en chirimoya
(annona cherlmo/a mili).(Tesis de Pregrado).Universidad Nacional Del Centro Del Perú.
Sharma, A. & Sharma,K. (1972). Chromosome Techniques.EE.UU: Stain Technology
Smith,V.(1991).Manual de embriología y anatomía general. Madrid: Universitat de
Valéncia
Talledo, D., Escobar,C. & Alleman,V. (1993). Introducción al análisis cromosómico en
vegetales. Lima: Universidad Ricardo Palma.
Thompson & Thompson (2008). Genética en medicina.Madrid :Editorial Sauders.
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ANEXOS
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Anexo 1. Semillas de Capsicum pubescens R & P “rocoto”hidratadas con agua potable

durante 8 horas.
Fuente: La autora.

Anexo 2.Siembra de las semillas de Capsicum pubescens R & P “rocoto”en placas Petri.
Fuente: La autora.
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Anexo 3. (A)Semillas germinadas de Capsicum pubescens R & P “rocoto”.(B) raíces

sumergidas en agua para helada.(C)Reactivos para la preparación de soluciones.
Fuente: La autora.

Anexo 4. (A)Raíces del Capsicum pubescens R & P “rocoto”sumergidas en en fijador

Carnoy y Targa.(B) Tinción con orceína.(C)Raíces ya coloreadas con orceína acido láctico.
Fuente: La autora.