MICROBIOLOGIA CELULAR

MICROBIOLOGIA CELULAR

Master de
Master de Microbiolog
Microbiología Avanzada
ía Avanzada
Departamento
Departamento de
de Microbiologia
Microbiologia

Dra.
Dra. Susana
Susana Merino
Merino Montero
Montero
3.2.1.- Interacción de las estructuras de los patógenos
con los receptores de la célula huésped: células
epiteliales y células del sistema inmune.

Interferencia en la transducción de señal en el funcionamiento de la célula

eucariota
PAPEL DE LA ADHESIÓN EN LA PATOGÉNESIS BACTERIANA

A B C
Phase variation ECM-Binding and
Degradation
Microcolony Biofilm antigenic
Variation

D E F
improved Phage-
Signal transduction iron adsorption Toxin
to Bacteria acquisition production
Signal transduction Fe 3+
to host cell Fe 3+ Fe 3+ ctx
Invasion
MOLÉCULAS DE ADHESIÓN PARA MICROORGANISMOS:

¾ COMPONENTES DE LA MATRIZ EXTRACELULAR

Colágenos

Laminina

Elastina y Fibrilina

Proteoglicano
Hialuronano

Glicoproteinas adhesivas
Fibronectina / Vitronectina
Fibrinogeno / Fibrina
Trompospondina
 Collagen
Microorganims type I Collagen Elastin Fibronectin Vitronectin Fibrinogen Laminin Trombos- Glycosa-
type IV Fibrin pondin minoglicans
and II
Aeromonas hydrophila X
Candida albicans X X X X
Escherichia coli X X X X
E. coli fimbriae X X X
Helicobacter pylori X X
Leishmania spp. X
Mycobacterium tuberculosis X
Neisseria gonorhoeae X
Plasmodium falciparum X X X
Pneumocystis carinii X
Porphyromonas gingivalis X
Staphylococcus aureus X X X X X X X X
Staphylococcus (coagulase -) X X X X
Streptococcal group C and G X X X X
Streptococcus dysgalactiae X
Streptococcus equi X X
Streptococcus sanguis X
Streptococcus pyogenes X X X X X
Streptococcus pneumoniae X
Treponema denticola X
Treponema pallidum X
Trypanosoma cruzi X X
Vibrio choleare X
Yersinia spp. X
 MOLÉCULAS DE ADHESIÓN PARA MICROORGANISMOS:

¾ COMPONENTES DE LA SUPERFICIE CELULAR.

• Lectinas, Proteoglicanos y Mucinas.

• Glicolípidos.
•Receptores de adhesión (CAM):

Neutrophils, monocytes Leucocytes

Ig family Selectins

Cadherins
Cytoskeletal Rho
Homotypic Cytoskeletal
Rac linker
interactions linker
Tyrosine Integrin
kinase signaling clustering

ADHERENS β1-Integrins
JUNCTION Focal complex Focal adhesion assembly
formation

ECM

FOCAL ADHESION
INTEGRINAS
CADERINAS
INTERACCIÓN CON CÉLULAS EPITELIALES:

Mucosa del epitelio intestinal

Matriz extracelular

Célula M Enterocito

Macrófago IL-8
IL-1β
IL-18
CONSECUENCIAS DE LAS INTERACCIÓNES:

DIRECTA INDIRECTA

1.- Adhesión con bajo nivel de internalización.

2.- Invasión.
MECANISMOS DE INVASIÓN :

Se produce mediante mecanismos dependientes de actina que requieren la inducción

intracelular de la polimerización y la reorganización de los filamentos de actina de la
membrana plasmática.

Dos mecanismos de inducción de la entrada:

¾ Zipper-mechanism

Explota vías implicadas

en adhesión celular y
motilidad.

¾ Trigger-mechanism.

Se inicia con la rápida

aparición expansiones
de membrana.
Regulación de la actina del citoequeleto:

PI3-Kinase
CDC42 Rac1 RhoA

WASP WAVE

Arp2/3 Arp2/3
Focal adhesions
Actin pol. Actin pol. + actin binding prot.

Filopodia Lamellipodia Stress-Fibers

ZIPPER-MECHANISM: Invasina de Yersinia

Invasin Fibronectin

Invasin αβ
actin
Integrin receptors

Y e r si n i
a αβ αβ αβ αβ αβ αβ

αβ αβ
αβ αβ
αβ

αβ αβ
αβ
Yersinia αβ
actin αβ
αβ

αβ
αβ αβ αβ αβ

αβ αβ αβ αβ αβ αβ αβ αβ αβ
extracellular matrix αβ
αβ
extracellular matrix
ZIPPER-MECHANISM: Internalina de Listeria
INTERACCIÓN CON EL SISTEMA INMUNE INNATO
 MOLÉCULAS MICROBIANAS RECONOCIDAS :

1. Conservadas entre los microorganismos.

2. Poco variables entre los microorganismos de un tipo.

3. Esenciales en la supervivencia microbiana.

4. Ausentes en el huésped.

PATRONES MOLECULARES ASOCIADOS A PATÓGENOS (PAMPs)

CARACTERÍSTICAS DE LOS RECEPTORES DEL SISTEMA INMUNE INNATO:

1. Reconocen PAMPs.

2. Proporcionan un respuesta rápida a un amplio rango de microorganismos.

3. Extremadamente específicos y capaces de diferenciar entre propio y extraño.

4. Pueden hallarse en suspensión, localizados sobre las células o a nivel

intracelular.

5. Sus funciones son:

- Opsonización.
- Activación del complemento.
- Fagocitosis.
- Activación de señales pro-inflamatorias.
- Apoptosis.

RECEPTORES DE PATRONES DE RECONOCIMIENTO (PRRs)

RECEPTORES TOLL-LIKE (TLRs):

1. Se identificaron por primera vez en Drosophila por conferir resistencia a

infecciones fúngicas.

2. Los análisis en bases de datos revelaron un número elevado de proteínas

similares en el genoma de vertebrados.

3. Reconocen diversos grupos de PAMPs.

4. Presentan estructura y mecanismos de señalización conservados entre la

mosca y los humanos.
ESTRUCTURA DE LOS RECEPTORES TOLL-LIKE (TLRs):

• Glicoproteínas integrales de membrana de tipo I .

TIPOS DE TLRs EN HUMANOS Y LIGANDOS:

Receptor Ligand (PAMPs) Origin of Ligand

Glicopeptidos
Peptidoglicano TLR1 Triacyl lipopetides Bacteria and Mycobacteria
Zymosan
ssRNA Soluble factors Neisseria meningitidis
Glicosilfosfoinositol
CpG
TLR2 Heat Shock protein 70 Host
dsRNA Flagelina
Peptidoglycan Gram-positive bacteria
Lipoprotein/lipopeptides Various pathogens
LPS
HCV core and nonstructural 3 protein Hepatitis C Virus

TLR3 Double-stranded RNA Viruses

TLR4 Lipopolysaccharides Gram-negative bacteria

Envelope protein Mouse mammary-tumor virus
Taxol Plants

TLR5 Flagellin Bacteria

TLR6 Zymosan Fungi

Lipoteichoic acid Gram-positive bacteria
Diacyl lipopetides Mycoplasma

TLR7 Single-stranded RNA (ssRNA) Viruses

Imidazoquinoline Synthetic compounds

TLR8 Single-stranded RNA (ssRNA) Viruses

Imidazoquinoline Synthetic compounds

TLR9 CpG-containing DNA Bacteria, Malaria and Viruses

TLR10 Not determined Not Determined

TLR11 Profilin-like molecule Toxoplasma gondii

TIPOS CELULARES QUE EXPRESAN TLRs:

Receptor Cell Type

TLR1 Ubiquitous

TLR2 DCs, PMLs, and monocytes

TLR3 DC and NK cells, upregulated on epithelial and endothelial
cells
TLR4 Macrophages, PMLs, DCs, ECs, but not on lymphocytes

TLR5 Monocytes, immature DCs, epithelial, NK, and T cells

TLR6 High expression in B cells, lower on monocytes and NK cells

TLR7 B cells, plasmacytoid percursor DCs

TLR8 Monocytes, low in NK cells and T cells

TLR9 Plasmacytoid percursor DCs, B cells, macrophages, PMLs,

NK cells, and microglial cells
TLR10 B cells, plasmacytoid precursor DCs

TLR11 Not Determined

LOCALIZACIÓN SUBCELULAR DE LOS TLRs:

Superficie celular:

TLR1
TLR2
TLR4
TLR5
TLR6

Compartimentos celulares:

TLR3
TLR7
TLR8
TLR9

Scientific American, Jan (2005), 38-45.

RESPUESTA A LA ACTIVACIÓN DE LOS TLRs:
TLR5 TLR11
TLR4
TLR2 TLR6
TLR1 TLR2

TLR7
TLR3 TLR9
TLR8

Transcripción
de genes

- Citoquinas inflamatorias
- MHC
- Quemoquinas
- Moléculas coestimuladoras
- Compuestos antimicrobianos

RESPUESTA INMUNE INANTA RESPUESTA INMUNE ADAPTATIVA

ADAPTADORES DE LOS TLRs:

TLR4 TLR2 TLR6 TLR1 TLR2 TLR5 TLR11

TRAM MAL MyD88

TLR7
TLR3 TLR9
TLR8

TRAM

TRIF
VÍAS DE ACTIVACIÓN DE LOS TLRs:
TLR4 TLR2 TLR6 TLR1 TLR2 TLR5 TLR11

TLR3

TRAM MAL MyD88

IRAK1
TLR7
TLR9
TLR8
TRIF
TRAF6

IKK-ε IKKγ
TBK1
IKKα IKKβ

IRF3 IRF3 lκB lκB

IRF7 IRF7 NF-κB
p50 p65 p50 p65

INF-β INF-α/β Citoquinas

IRF3 p50 p65 IRF7 p50 p65 inflamatorias

Motivo de unión NF-κB

 LPS LPS
Señal TLR4 MyD88-Dependiente
LBP

MD-2
MD-2
TLR4

sCD14 Cell membrane

MyD88
MAL

MEKK3 MKK3

MKK7
IRAK4 IRAK1 UBC13

TRAF6 TAB2 TAK1

p38
TAB1 IKK-γ
UBV1A
IRAK2

IKK-α

IKK-β
Proteasome JNK

Caspase-8 IκB

IκB
p50 p65

TNF
COX2
NF-κB IL-18

Paz S., Nakhaei P,( 2005)

 LPS ST2 SIGIRR REGULACIÓN NEGATIVA DE LOS TLRs

MD-2
MD-2
TLR4

(-)
Cell membrane
MyD88
MAL

MOLECULAS CITOPLAMÁTICAS:
IP

(-)

(-)
TOLL

IRAK-M
IRAK4
– TOLLIP
(-)

SOCS1 IRAK1 – IRAK-M (restricted to monocytes and

UBC13 macrophages)
– SOCS1 (Supressor of cytokine signaling 1)
TRAF6 A20
(-)

– A20 (TNFAIP3)
UBV1A
MOLECULAS UNIDAS A MEMBRANA:
IKK-γ Proteasome
– SIGIRR (single immunoglobulin IL-1R-
IKK-α

IKK-β

IκB
related molecule)
– ST2
IκB
p50 p65

TNF
COX2
NF-κB IL-18
 LPS LPS
LBP TLR4

MD-2
MD-2
Señal TLR4 MyD88-Independiente sCD14 Cell membrane

TRAM
TRIF
TRAF6
IKK-γ
Proteasome

IKK-α

IKK-β
TBK1 IKKε
IκB

IκB P
p50 p65 IRF-3 P P
P IRF-7

P P P
P

P P P
P

Late induction
NF-κB

IFN-β IFN-α
Paz S., Nakhaei P,( 2005)
 LPS
dsRNA

MD-2
MD-2
CpG DNA TLR4
ssRNA
Cell membrane

Tyk2 Jak1

TRAM
TRIF
Endosome
STAT2
STAT1

ssRNA CpG DNA

TBK1
TLR7/8 TLR9
STAT2
IRF-9 STAT1
P
IKK-γ MyD88 IRF-3 P
IKK-α

IKK-β

IRAK4
IRAK1
Proteasome TRAF6
IRF-7
IκB
IκB
IFN-α
p50 p65 IFN-β
NF-κB
Inflammatory Cytokines IFN Regulation
Paz S., Nakhaei P,( 2005)
¿ COMO EVADIR LOS TLRs?

a.- Manipulando la estructura y/o expresión de los ligandos.

- Lipido A de Porphyromonas gingivalis, Helicobacter pylori,

Chlamydia trachomatis, Francisella tularemia, Yersinia
pestis y Pseudomonas aeruginosa.

- Flagelo de Helicobacter pylori

b.- Interfiriendo con componentes de la via de señalización

- YopJ de Yersina enterocolitica

- YopP de Yersinia pestis

c.- Manipulando la señal através de receptores de superficie

que modulan la señal intracelular de los TLRs

Receptores de manosa y lipoarabinomananos de Mycobacterium

tuberculosis.

LcrV de Y. pestis.