Vous êtes sur la page 1sur 13

MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO

Microscopio basado en lentes ópticas. También se le conoce como


microscopio de luz, (que utiliza luz o fotones) o microscopio de campo claro.

Se utiliza en el laboratorio de histología y anatomía patológica, donde la microscopía permite


determinadas aplicaciones como el diagnóstico del cáncer, numerosas estructuras
cristalinas, pigmentos, lípidos, proteínas, depósitos óseos, etc.
Se utiliza también en el área de la biología, química, física y geología.

ESTÉREO MICROSCOPIO O MICROSCOPIO DE DISECCIÓN

Se utiliza para ofrecer una imagen estereoscópica (3D) de la muestra.

Suelen estar dotados de un sistema zoom o un sistema de


cambiador de aumentos que permite observar la muestra en un
rango de aumentos variable, siempre menor que el de un microscopio compuesto.
Es apropiado para observar objetos de tamaños relativamente grandes,

Este tipo de microscopios permite unas distancias que van desde un par de
centímetros a las decenas de ellos desde la muestra al objetivo, lo que lo
hace muy útil en botánica, mineralogía, industria, como en medicina
(microscopios quirúrgicos)

Fuente de luz. Ilumina la muestra; puede ser externa al microscopio o estar incluida en su base.

Lente condensadora. Reúne los rayos difusos de la fuente de luz e ilumina el espécimen
con un pequeño cono de luz brillante que permite ver las partes muy pequeñas de éste después de la
magnificación. Incrementa la resolución, aumenta el contraste de la muestra.
Lente del objetivo (objetivos). Tubo de metal pequeño, atornillados dentro del
revólver. Enfoca los rayos de luz provenientes del condensador para formar una imagen real y magnificada del
objeto dentro de la columna del microscopio.

Se consideran dos conjuntos de rayos lumínicos que entran a la lente del objetivo:

Los rayos que alteró el espécimen surgen de las múltiples partes del espécimen y forma la imagen del mismo.

Los rayos no modificados se refiere a la luz proveniente del condensador que pasa en forma directa a la lente
del objetivo y constituye la luz de fondo del campo visual.

Lentes oculares. Emplea la imagen formada por la lente del objetivo como objeto para formar
una imagen virtual y aumentada. Un tercer sistema de lentes localizado en la parte frontal del ojo utiliza la
imagen virtual producida por la lente ocular como objetivo para producir una imagen real en la retina.

Las lentes generalmente tienen 10X – 15X de aumento.

Cuando el tornillo de enfoque del microscopio de luz se gira, la distancia relativa entre la muestra y la lente del
objetivo cambia, lo que permite que la imagen final se enfoque con exactitud en el plano de la retina.

La magnificación total obtenida por el microscopio es el producto de las magnificaciones logradas por la lente
del objetivo y la lente del ocular. Si existen lentes auxiliares debe considerarse también este aumento.

Lentes auxiliares. Conocidos también como lentes suplementarios, se pueden encontrar en


microscopios de disección en la base de la cubierta de los objetivos o cabezal.

Ajuste de dioptría. Ajuste usado para compensar la diferencia de observación de los ojos.

Espejo. Usado para reflejar la luz a través de la muestra.

Eje giratorio del espejo. Usado para ajustar el espejo para que refleje la luz a través de
la muestra.

SISTEMA MECÁNICO

Base. Parte de metal o plástico sobre la cual descansa el resto de las partes del microscopio.
Brazo. Columna en forma de “C” que se proyecta de la base y que sostiene a la platina y a los
componentes ópticos.

Platina. Plataforma plana unida a la parte inferior del brazo sobre la cual se colocan los portaobjetos con
las muestras a observar.

Cierre del diafragma o condensador. Manija ubicada debajo de la abertura de


la platina que consiste de un grupo de piezas de metal a manera de obturador que regula la cantidad de luz que
atraviesa al portaobjetos colocado en la platina.

Botón de ajuste del condensador knob. Sube y baja el condensador.

Cabezal. Parte cilíndrica/vertical unida en la parte superior del brazo que sostiene el sistema óptico.
SISTEMA MECÁNICO

Revólver. Plato giratorio que sostiene los objetivos (lentes), unido a la parte inferior del cabezal. Puede girar
para cambiar los lentes objetivos.

Ajuste del macrométrico. Botón grande que mueve el cabezal hacia arriba y abajo para observar la muestra
en el enfoque macrométrico.

Ajuste del micrométrico. Botón pequeño que mueve el cabezal a distancias más cortas, de manera más lenta
y es usado para observar a la muestra con un enfoque más nítido.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES


Estos microscopios son más útiles para e xaminar componentes intracelulares
vivas con una resolución hasta cierto punto alta. Por ejemplo, la

movilidad dinámica de las mitocondrias, los


cromosomas mitóticos y las vacuolas puede
seguirse y filmarse con este sistema óptico.
• En estudios de diversas disciplinas : fisiología, parasitología,
farmacología (procesos celulares, identificación y cuantificación de
microorganismos y parásitos en fluidos y tejidos, efecto de
medicamentos y otras sustancias en las células y sus industriales.

• Estudios geológicos (minerales).

procesos de motilidad, mitosis, digestión, entre otros). • Estudio de


alimentos y medicinas.

• Análisis de materiales

MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA
Este microscopio es apto para estudiar células vivas pero también
puede aplicarse para la observación de preparados
inmunohistoquímicos, en los cuales sólo están teñidas células
aisladas y su entorno carece de tinción.

Con este instrumento es posible determinar las diferencias ópticas


de fase para las diversas estructuras celulares y en consecuencia
medir su peso seco. Permite observar especímenes densos.

Permiten observar las células en acción y estudiar los movimientos


implicados en procesos como la mitosis o la migración celular.

MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA


Se utiliza para detectar y analizar estructuras muy bien
ordenadas como las fibrillas de colágeno o fascículos de
filamentos de miosina en la célula muscular esquelética
o cardíaca.

Se usa para poder identificar sustancias cristalinas


(minerales) o fibrosas como el citoesqueleto.

Microscopio de fluorescencia

El microscopio de fluorescencia es una variación del microscopio de luz


ultravioleta en el que los objetos son iluminados por
rayos de una determinada longitud de onda.

Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia


(vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos o
fluoróforos.
Aplicaciones del microscopio de fluorescencia

• Marcaje de moléculas en células y tejidos para su


caracterización e identificación.

• Estudio de células normales y patológicas.

• Estudios inmunológicos.

• Mineralogía.
Microscopio de luz ultravioleta
En este microscopio se utiliza la luz ultravioleta, la cual
permite un mayor poder de resolución que la luz visible.
La luz ultravioleta es invisible para el ojo humano, no puede ser captada por
la retina y además es muy nociva; es por ello que la imagen no se observa
directamente; debe visualizarse mediante fluorescencia, fotografía o un
sensor digital.

Todos los elementos ópticos del microscopio, incluyendo las láminas porta y

cubre-objetos están hechos de cuarzo o fluorita; no


pueden ser de vidrio puesto que este material no transmite la luz ultravioleta.

La estructura del microscopio es básicamente igual a la del microscopio de


fluorescencia, con fuente de luz, filtros, objetivos y espejos especiales; estos
últimos son aluminizados.

Las imágenes obtenidas son semejantes a las del microscopio de


fluorescencia, las estructuras marcadas aparecen brillantes contrastando
con un fondo negro.

Se emplea en ciencia forense para el análisis de ADN, drogas y


estudios de evidencias.

Estudios biológicos.

MIcroscopio electrónico
Microscropio electrónico de transmisión (TEM). Permite resoluciones que
superan mucho la del microscopio óptico. Esto debido a que se utilizan
haces de electrones, cuya longitud de onda es menor que la luz
visible.

Con este microscopio pueden analizarse cortes de tejido pequeños


(13 ortes ultrafinos.

Los microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto


hasta un millón de veces.

Microscopio electrónico de barrido (MEB)

Crea una imagen ampliada de la superficie de un


objeto. Explora la superficie de la imagen punto por
punto.
Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un
haz muy concentrado de electrones. Los MEB pueden ampliar
los objetos 200,000 veces o más.

Con este microscopio es posible observar superficies


naturales o artificiales de diferentes objetos: epitelios,
células, fibras extracelulares, sustancias duras, órganos,
animales enteros, etc.
Este tipo de microscopio es muy útil porque, al contrario que los TEM o los
microscopios ópticos, produce imágenes tridimensionales realistas de la
superficie del objeto

Se denomina TÉCNICA HISTOLOGICA al conjunto de procedimientos ordenados, aplicados a un tejido biológico con la
finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes
morfológicos a través del microscopio correspondiente.

1. Toma de la muestra

2. Fijación

3. Inclusión

4. Microtomía

5. Coloración o tinción

6. Montaje

Toma de muestra

LA BIOPSIA: (del griego bios = vida y opsis = visión), consiste en la toma de un fragmento

de tejido u órgano de un ser vivo. Se realiza a través de una operación quirúrgica hecha

exprofesamente o durante la intervención quirúrgica efectuada en pacientes y corroborar

así un diagnóstico de una determinada lesión.

Biopsia excisional o incisional. Se usa frecuentemente cuando se necesita una porción

más amplia o profunda de la piel. Usando un bisturí (cuchillo quirúrgico, escalpelo), se

extirpa una parte de la piel en su totalidad para un examen detallado, y la herida se cose

(con suturas quirúrgicas). Cuando se extirpa todo el tumor, la técnica se llama biopsia

excisional. Si se extirpa sólo una parte del tumor, se le llama técnica de biopsia incisional.

La biopsia excisional es el método preferido cuando se sospecha la presencia de


melanoma.

Punción y aspiración con aguja fina (PAAF). Tejidos líquidos como la sangre se obtienen

por este método.

Punción y aspiración con aguja gruesa (PAAG). La médula ósea roja, al ser un tejido

más viscoso que la sangre, se obtiene con una aguja de mayor calibre.

Citología exfoliativa. Las células que pueden desprenderse de las superficies epiteliales

de renovación constante (mucosas bucal, gástrica, vaginal, uretral o alguna lesión) se

obtienen a partir de un raspado o cepillado.

Raspado Este tipo de biopsia se realiza removiendo las capas más superficiales de la piel

raspándolas con un instrumento afilado. Las biopsias de raspado también se realizan con

anestesia local.

Legrado o curetaje consiste en extraer la capa más interna del útero, llamada endometrio,

mediante un instrumento denominado legra el uso de una legra o cureta para eliminar tejido

del útero mediante raspado o cucharillado. Puede utilizarse para obtener una biopsia de

una masa para determinar si es un granuloma, neoplasia, u otra clase de tumor.

Biopsia endoscópica. Se realiza por medio de un endoscopio de fibra óptica (un tubo

delgado y largo que tiene un telescopio de enfoque cercano en su punta para poder

observar) insertado a través de un orificio natural (como por ejemplo el recto) o una incisión

pequeña (por ejemplo, la artroscopia). El endoscopio se usa para observar el órgano en cuestión para buscar
áreas anormales o sospechosas, para poder obtener una pequeña

cantidad de tejido para estudiarlo. Los procedimientos endoscópicos reciben el nombre del
órgano o parte del cuerpo que se va a visualizar, recibir tratamiento o ambos.

Biopsia por corte o biopsia quirúrgica. Este procedimiento toma un pedazo de una lesión

grande. Un pedazo del crecimiento se corta y se envía al laboratorio para examinarla. Puede

necesitar suturas.

Sacabocado: Se realiza utilizando un bisturí de forma circular unido a un mango plástico.

El instrumento se rota sobre la piel, penetrando todas las capas (epidermis, dermis y parte

de la hipodermis), y se obtiene una muestra tisular cilíndrica.

Biopsia por congelación. Se realiza cuando el patólogo requiere evaluar de inmediato el

tejido obtenido durante el acto quirúrgico, en especial cuando el diagnóstico

anatomopatológico instantáneo puede determinar el paso siguiente en la cirugía. Es muy

frecuente que un cirujano solicite una biopsia por congelación en el quirófano cuando no

cuenta con un diagnóstico preoperatorio o debe identificar hallazgos intraoperatorios

inesperados. Además es posible que el cirujano quiera saber si se ha extirpado toda la

masa patológica dentro del límite del tejido sano y si el borde de la resección quirúrgica está

libre de tejido enfermo.

NECROPSIA/AUTOPSIA. Las muestras se obtienen de seres muertos: En este caso es

recomendable que los tejidos y órganos se obtengan inmediatamente después de

producida la muerte.

FIJACIÓN

Es el primer paso en la preparación de una muestra de tejido u órgano. En general se

obtiene mediante el empleo de fijadores (sustancias químicas individuales o mezclas de

éstas), conserva la estructura del tejido en forma permanente para permitir el tratamiento
ulterior. Las muestras tienen que sumergirse en el fijador inmediatamente después de

extraerse del organismo.

La fijación se utiliza para lo siguiente:

Abolir el metabolismo celular.

Impedir la degradación enzimática de las células y los tejidos por autolisis

(autodigestión).

Destruir lo microorganismos patógenos como las bacterias, los hongos o los virus.

Endurecer el tejido.

Esto se consigue inmovilizando (por coagulación o precipitación) las moléculas proteínicas

e inhibiendo principalmente las enzimáticas haciéndolas insolubles. Esta acción garantiza

la integridad de las células y tejidos.

El Formol o formalina está considerado como la sustancia fijadora de mayor uso en los

laboratorios que realizan técnica histológica. El formol comercial consiste en una solución

acuosa del gas formaldehido al 39 - 40%. Su acción fijadora se ejerce coagulando las

proteínas. Es un fijador que posee un buen poder de penetración y difusión. Preserva la

estructura general de la célula y de los componentes extracelulares; además facilita la

coloración posterior de los componentes celulares y tisulares. Endurece bien las muestras

y conserva bastante bien a las grasas.

Se le emplea en una solución al 10% (10 del formol comercial y 90 partes de agua). El

tiempo de fijación de las muestras, dependiendo del tamaño de ellas, debe ser de 24 a 48

horas como mínimo y si es posible, en refrigeración.

INCLUSIÓN y MICROTOMÍA

Para poder examinar la muestra hay que infiltrarla con un medio de inclusión que permita

realizar cortes muy delgados, típicamente de 5 a 15 µm. Luego de la fijación la muestra se

lava y se deshidrata en una serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente

hasta alcanzar alcohol al 100%. En el paso siguiente, el aclarado, se utilizan solventes


orgánicos como xileno o tolueno, que son miscibles tanto en alcohol como en parafina,

para extraer el alcohol al 100% antes de la infiltración de la muestra con parafina fundida.

Cuando la parafina fundida se ha enfriado y endurecido se empareja para formar un bloque

de tamaño adecuado. Este bloque llamado taco, se coloca entonces en una máquina

cortadora especial, el micrótomo, que lo corta en rebanadas finas con una cuchilla de

acero. Luego los cortes obtenidos se montan sobre portaobjetos de vidrio a los que antes

se les habrá añadido una pequeña cantidad de albúmina para que sirva de adhesivo.

TINCIÓN

Dado que los cortes en parafina son incoloros, la muestra no está lista para su examen bajo

el microscopio óptico.

El procedimiento de coloración o tinción consiste en que una estructura celular o tisular

adquiere específicamente un color bajo la acción de una sustancia colorante. Se considera

que una estructura se ha coloreado o teñido cuando al ser lavada con el líquido que disuelve

al colorante, no se decolora.

El proporcionar color a las estructuras que constituyen un tejido o un órgano se hace con la

finalidad de distinguirlas entre sí y facilitar su observación. Si se examina al microscopio

una sección de tejido sin colorear, ya adherida al portaobjetos, se podrá constatar que no

es fácil discernir sus componentes.

La coloración proporciona diferencias evidentes entre las estructuras y al observar los

cortes será fácil reconocerlas.

La coloración de hematoxilina - eosina (H-E) se considera como la técnica de tinción de

uso más frecuente en el estudio de células y tejidos. Consiste en la tinción de:

a) Los núcleos mediante una hematoxilina. Los núcleos se colorean de azul, azul morado,

violeta, pardo oscuro o negro, dependiendo de los agentes oxidantes y mordientes que se

utilizaron.

b) El citoplasma y material extracelular utilizando la eosina que les confiere diversos grados
de color rosado.

Otras tinciones

La hematoxilina y la eosina se utilizan en la histología principalmente para poner en

evidencia las características estructurales; sin embargo, este procedimiento no permite ver

en forma adecuada ciertos componentes estructurales de los cortes histológicos, a saber,

elastina, fibras reticulares, membranas basales y lípidos. Cuando se desea estudiar estos

componentes pueden utilizarse otros métodos de tinción, en su mayoría selectivos, que

incluyen la coloración con orceína y fucsina-resorcina para el material elástico y la

impregnación argéntica para las fibras reticulares y las membranas basales. En la siguiente

sección se presentan las tinciones utilizadas más frecuentemente y sus características.