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19. Análisis citogenética humana

Biologia Humana (Universitat Autònoma de Barcelona)

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19. ANÁLISIS CITOGENÉTICA HUMANA

- Anatomía de los cromosomas mitóticos de eucariotas superiores: Clasificación de
los cromosomas según la estructura.

- En la mitosis, los cromosomas de los eucariotas superiores constan de cromátides

hermanas unidas en la región centromérica.

- Los cromosomas se clasifican en función de la posición del centrómero.

- CARIOTIPO HUMANO:

- 1956: se establece que la especie humana tiene 46 cromosomas.

- La dotación cromosómica normal de la especie humana es de 46, XX para las mujeres

y de 46, XY para los varones.

- En el cariotipo humano los cromosomas se ordenan de mayor a menor.

- Hay cromosomas grandes, medianos y pequeños.

- Al ordenar los cromosomas se constituyen 7 grupos atendiendo no sólo al tamaño

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- Dentro de cada grupo se ordenan y reconocen los cromosomas con la ayuda de

un ideograma: representación esquemática del tamaño, forma y patrón de
bandas; los cromosomas se sitúan alineados por el centrómero, y con el brazo
largo siempre hacia abajo.
- Numeración de bandas: se compara la realidad con ideogramas útiles para
organizar los cromosomas.

- PREPARACIÓN DE CARIOTIPOS:

- Cultivo celular. Se recoge material biológico. Se puede coger de cualquier tejido

en división.

- Poner células en medio rico y estimular la división con fitohemaglutinina.

- Hacer un cultivo durante 3 días.

- Parar la división con colchicina para parar la formación del huso mitótico.

- Lavar con solución salina si es sangre.

- Pasar a soporte con un portaobjetos.

- Aplicar la técnica de tinción de los cromosomas. Dependiendo de la técnica

tendrá una apariencia u otra. La tinción más habitual es con giemsa.

- Los cromosomas sólo se visualizan en profase o metafase. A medida que se

condensa el cromosoma desaparecen las bandas. En profase es dónde se
observan más bandas.

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- Los cromosomas se analizan en metafase (400 bandas) o prometafase (~2000

bandas):

- Los cromosomas son visibles al microscopio en extensiones cromosómicas;

- Cada cromosoma consiste de las cromátidas hermanas, sin embargo, las dos
están tan juntas que raramente se pueden apreciar como entidades separadas.

- TÉCNICAS DE BANDEADO: Bandas de todo el cromosoma.

- Alrededor de las 5 Mb de resolución. Consiguen detectar cambios de 5Mb.

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- TÉCNICAS DE BANDEADO: Bandas que tiñen determinados puntos del

cromosoma.

- Citogenética Molecular: Fluorescent In-Situ Hybridization – FISH

Combina la citogenética convencional con la genética molecular

- Está basada en la capacidad de que una porción de DNA de cadena sencilla

(sonda) pueda hibridar con una secuencia complementaria de un cromosoma
en metafase o en un núcleo en interfase.

- Las sondas de DNA están marcadas con flurocromos que permiten que después
de la hibridación se pueda observar la región marcada con un microscopio de
fluorescencia.

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Citogenética Molecular: Tipos de sondas FISH

- Sondas Centroméricas:

- Usadas para el diagnostico rápido (en células en interfase) de trisomias 13, 18 y

21.

- No se hace cultivo celular, las sondas hibridan en núcleos de interfase.

Actualmente es posible hacer técnicas de FISH para detectar las trisomias a la vez.

- Sondas específicas para un único locus:

- 2 sondas, una para marcar el cromosoma deseado y otra para la zona donde se
ve si está el gen o no en el individuo.

- Particularmente útiles para identificar deleciones y duplicaciones

submicroscópicas.

- Whole chromosome paint probes: céctel de sondas obtenido de diferentes

partes de un determinado cromosoma

- Útiles para la caracterización de complejos, reordenamientos como

translocaciones, y para la identificación de los orígenes del cromosoma
adicional, materiales, como pequeños marcadores supernumerarios o anillos.

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- Hibridación Genómica Comparada:

- Permite detectar zonas de pérdida o ganancia de material genético. En

muestras de cáncer.

- Se pinta el genoma problema con un color. Pintar DNA control con otro.
Desnaturalizar y juntar las cadenas de muestras de control y de tumor que
pueden hibridar. Resolución más alta que FISH (1,5 Mb).

- REORGANIZACIONES CROMOSÓMICAS EN PRIMATES:

- Se mantienen el número de cromosomas en chimpancés, gorilas y orangutanes.

- Las primeras técnicas de citogenética están bandas en citogenética clásica.

- Translocación robertsoniana: fusión del cromosoma 2 de los humanos. El par

de menos de cromosomas de los humanos respecto los grandes simios es el
resultado de la fusión del cromosoma 2. Se perdieron zonas teloméricas en los
ancestros.

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- CAMBIOS EN PRIMATES:

- Inversiones pericéntricas y paracéntricas.

- Translocación entre cromosoma 5 y 17.

- Aumentos de zonas teloméricas.

- Pocos cambios.

- CROMOSOMAS SEXUALES:

- X muy conservado.

- Y muy variable, incluso en humanos porque corresponde en zonas

heterocromáticas, que no son codificantes.

- Se ha podido determinar el cariotipo ancestral de todos los primates. Algunos

cromosomas estarían combinados en los humanos.

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- A partir del cariotipo ancestral se pueden construir las filogenias de los

primates actuales.

- A nivel de humanos, el cambio más destacable es la fusión del cromosoma 2.

- El ancestro de los humanoides tendría que tener 48 cromosomas. En el hombre

se produce la reducción a 46 cromosomas por la fusión del cromosoma 2.

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