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Practica 2
Preparación de material para su esterilización y medios de cultivo
MATERIA
Microbiología Ambiental
MAESTRO
Luz Helena Mora Maldonado
MATERIAL (LIMPIO)
Ø Maskin tape y Marcador permanente Sharpe (punto fino)
Ø Cerillos ó encendedor
Ø Papel aluminio
Ø Papel estraza 10 pliegos.
Ø 1 paquete de algodón
Ø 10 gasas
Ø Franela
Ø Cinta testigo (control de esterilización)
Ø 9 Tubos de ensayo de 16 x 150 mm.
Ø 6 Cajas Petri
Ø 2 Vidrios de reloj o charolas para pesar polvos.
Ø 1 Probetas de 100 ml.
Ø 1Probeta de 50 ml
Ø 1 Matraz Erlen-Meyer de 250 ml.
Ø 1 matraz Erlen-Meyer de 100 ml
Ø 1 matraz Erlen-Meyer de 50 ml
Ø 2 Pipetas de vidrio de 1 ml.
Ø 4 Pipeta de vidrio de 10 ml.
Ø 1 Pipeta de 5 ml.
Ø Perilla de succión
Ø 1 Mechero Bunsen.
Ø 1 Tela de asbesto.
Ø 1 Baño María
EQUIPO
Autoclave con agua destilada
INCUBADORA
REACTIVOS
Ø Agar bilis rojo violeta deshidratado (Polvo)
Ø Caldo lactosado deshidratado (Polvo)
Ø Agua destilada
PROCEDIMIENTO
Preparación del material para esterilizar
Tubos de vidrio y matraces:
1. Colocar un tapón de algodón –gasa a los 9 tubos de vidrio de 16 x 150 mm. Envolver dos
paquetes (uno con 5 y otro con 2 tubos) con papel estraza y cubiertos con aluminio. Una vez
envueltos colocar cinta testigo. Etiquetar con nombre, fecha y tipo de material.
2. Preparar un matraz de 250 ml con 75 ml de agua destilada. Colocar un tapón de algodón-
gasa, una capucha de aluminio y cinta testigo. Etiquetar con nombre, fecha y tipo de material.
Pipetas
Colocar en la boca de cada pipeta un filtro de algodón con la ayuda de un clip desdoblado. El
algodón no debe quedar ni muy apretado ni muy flojo, para permitir el paso del aire, pero sin
moverse. Flamear con el mechero el algodón que sobresale de la boquilla de la pipeta. Envolver
cada pipeta con papel envoltura. Colocar cinta testigo. Etiquetar para su identificación.
Esterilización
Colocar el material en los contenedores de la autoclave y esterilizar a 15 libras de Presión (121
°C) por 15 minutos. (Por seguridad supervisar todo el proceso de esterilización hasta su
término).
Preparación de medios de cultivo líquidos.
1. Pesar la cantidad correspondiente para preparar 20 ml de medio Caldo lactosado
deshidratado, de acuerdo las especificaciones del frasco contenedor del medio en polvo.
Cálculos:
2. Colocar el medio en polvo en el matraz de 50 ml y disolverlo con 10 ml de agua, pasar a la
probeta de 50 ml y enjuagar el matraz con los 10 ml restantes y adicionarlos a la probeta para
aforar el medio a 20 ml.
3. Regresar el medio de cultivo al matraz de 50 ml y colocar un tapón algodón- gasa.
4. Esterilizar en autoclave a 15 libras de Presión (121 °C) por 15 minutos. (Por seguridad
supervisar todo el proceso de esterilización hasta su término).
5. Una vez esterilizados los medios, dejar enfriar a temperatura ambiente.
6. En zona estéril (utilizando el mechero o campana de flujo laminar) distribuir el caldo nutritivo
con pipeta de 10 ml estéril (10 ml) en 2 tubos de ensayo estériles y taparlos.
Preparación de medios de cultivo sólidos.
(6 cajas de Petri y 2 tubos con medio sólido)
1. Pesar la cantidad correspondiente para preparar 150 ml de medio sólido Agar de métodos
estándar, de acuerdo a las especificaciones del frasco contenedor del medio en polvo.
Cálculos:
2. Colocar el polvo de Agar de Método estándar en el matraz de 250 ml y agregar 50 ml de
agua destilada. Para disolverlo será necesario calentar a baño María por algún tiempo. El
matraz
RESUMEN
Ya esterilizado el material y la mesa se procedió a pesar 0.026 gramos de Caldo lactosado
deshidratado, se vacío en un matraz Erlenmeyer de 50 mL y se le agrego 10 mL de agua
destilada se mezcló y se colocó un rato en el fuego hasta disolverlo y se aforo con otros 10 ml
de agua destilada para obtener nuestros 20 m, con el Agar bilis rojo violeta deshidratado se
pesó de igual manera 6.225 gramos se colocó de igual manera en un matraz Erlenmeyer pero
de 250 mL se le agrego 50 mL de agua destilada para disolverlo mientras se calentaba un poco
y finalmente se aforo con 100 ml para tener 150 mL, se metió al autoclave para que se terminara
de disolver todo y esterilizar, se sacó se dejó enfriar y se vacío en las cajas Petri y tubos, se
dejaron en la incubadora y se procedió a la siembra de las bacterias, usando la salsa, agua de
riego, agua de beber, agua cruda de la planta de tratamiento para el caldo y para el agar se
usaron las mismas pero añadiendo la saliva de uno de los integrantes del equipo.
RESULTADOS Y ANÁLISIS
Cálculo de Caldo lactosado deshidratado
𝟐. 𝟔 𝒈/𝒍
𝟏𝟑 𝒈 ∗ 𝟎. 𝟐 𝒍 = = 𝟎. 𝟎𝟐𝟔 𝒈 𝒅𝒆 𝑪𝒂𝒍𝒅𝒐 𝒍𝒂𝒄𝒕𝒐𝒔𝒂𝒅𝒐
𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍
Cálculo de Agar bilis rojo violeta
𝒈
𝟔𝟐𝟐𝟓
𝟏𝟑 𝒈 ∗ 𝟏𝟓𝟎 𝒎𝒍 = 𝒎𝒍 = 𝟔. 𝟐𝟐𝟓 𝒈 𝒅𝒆 𝑨𝒈𝒂𝒓 𝒃𝒊𝒍𝒊𝒔 𝒓𝒐𝒋𝒐 𝒗𝒊𝒐𝒍𝒆𝒕𝒂
𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍
Fig. 1.1 Caldo Lactosado calentadose para Fig. 1.2 Caldo Lactosado
disolver grumos.
Fig. 1.3 Agar bilis rojo violeta Fig. 1.4 Material esterilizado
REFERENCIAS
Peña, A. M. (10 de Abril de 2012). Cultivos bacteriologicos. Obtenido de Cultivos bacteriologicos:
http://aline-m-e-p.blogspot.com/2012/04/practica-2-preparacion-y-esterilizacion.html