Integrantes

 Jessica Sánchez
 Daniel Vaca

TITULO DE LA PRÁCTICA

DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN SUERO UTILIZANDO EL MÉTODO GPO-PAP (PRUEBA

ENZIMÁTICA COLORIMÉTRICA PARA TRIGLICERIDOS CON FACTOR ACLARANTE DE LIPIDOS
(LCF)) PARA LA CUANTIFICACIÓN POR ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE

OBJETIVOS

 Determinar la concentración de los niveles de triglicéridos en la sangre.

 Extraer las muestras de sangre de los estudiantes del curso de bioquímica.
 Utilizar el kit apropiado para el análisis de triglicéridos en la sangre.

MARCO TEÓRICO

Son lípidos formados por una molécula de glicerol

esterificado con tres ácidos grasos (pueden ser
distintos), se almacena en forma de una gran gota
ocupando casi todo el citoplasma del adipocito, su
almacenamiento secundario es en el hígado, es la
principal forma de almacenamiento de energía en las
células. Se transportan en la sangre unido a
proteínas.

Los triglicéridos que se encuentran en el torrente sanguíneo son derivados de los alimentos
que consumimos, especialmente de las grasas y los carbohidratos. Los alimentos que no
consumimos en el momento en forma de energía, se convierten en triglicéridos y son
transportados a las células grasas para almacenarse.

La enzima llamada lipasa la que actúa en el enlace éster, lo hidroliza y libera el ácido graso. El
duodeno no puede absorber los triglicéridos, por lo que debe ser convertido en ácidos grasos y
monoglicéridos. Las hormonas son las encargadas de liberar esos triglicéridos para convertirlos
en energía según las necesidades del cuerpo.
Funciones
• Almacén molecular de energía
• Fuente de calor
• Envoltura protectora de los órganos vitales con capacidad de amortiguar golpes
• Aislante térmico

VALORES DE REFERENCIA

Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por el US National

Institutes of Health y también aceptados en otros países para la evaluación del riesgo.

Hasta 150 mg/dL = 1,7 mmol/L Bajo BAJO

150-199 mg/dL = 1,70-2,25 mmol/L Dudoso DUDOSO

200-499 mg/dL = 2,26-5,64 mmol/L Alto ALTO

> 500 mg/dL = > 5,65 mmol/L Muy alto MUY ALTO

La concentración de triglicéridos en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula

general:

C = Absorbancia de la muestra/Absorbancia del estándar

Para calibrar el Patrón de Triglicéridos suministrado se multiplica por 200 para obtener en
mg/dL triglicéridos y por 2.28 para obtener en mmol/L triglicéridos

MATERIALES

 Torundas  Cubetas espectrofotométricas

 Torniquetes  Gradillas
 Jeringas de 5 mL  Micropipetas
 Tubos morados  Guantes
 Tubos de vidrio pequeños
EQUIPOS

 Centrifuga
 Espectrofotómetro o fotocolorímetro
 Baño María

REACTIVOS

 Alcohol
 Kit para análisis de triglicéridos (Reactivo A, B y Estándar)
PROCEDIMIENTO

 Se procedió a sacar la muestra de sangre del compañero de laboratorio, teniendo

cuidado y las debidas precauciones.
 Se colocó la muestra de sangre en un tubo de ensayo para posteriormente
centrifugarlo durante 5 minutos.
 Con la ayuda de la micropipeta se tomo el suero y se colocó en los tubos acorde a al
siguiente esquema.

Pipetear Blanco Estándar Muestra

Muestra - - 10 µL
Estándar - 10 µL -
Reactivo de trabajo 1 mL 1 mL 1mL

 Se agito bien e incubó los tubos durante 20 min a temperatura ambiente (18 a 25) °C
 Se pasó al uso de espectrofotómetro a 505 nm y se anotó cada una de las
absorbancias de las muestras.

RESULTADOS PRIMAROS:

 Reacciones positivas o Reacciones negativas

GPO (GLICEROL 3 FOSFATO OXIDASA)

POD (PEROXIDASA)

RESULTADOS Y CÁLCULOS

Valores de absorbancia y concentración

Concentración
Estudiante ABC estándar ABS muestra
(mg/dl)
David Salgado 0.234 0.564 482.05
Cristina Aguilera 0.234 0.187 159.82
Dennisse Del Castillo 0.271 0.242 223.04
Ariana Drouet 0.217 0.107 98.62
Jessica Sánchez 0.213 0.036 33.803
Daniel Vaca 0.213 0.123 115.49
Alejandro Estrella 0.136 0.029 42.65
CONCLUSIONES Y DISCUSION

 Haciendo una comparación general de los resultados se puede observar que los
primeros tres análisis difieren en gran medida con respecto al resto, esto sucedió ya
que la el reactivo de trabajo podría haber estado contaminados con sangre de algún
estudiante de la anterior práctica, lo cual lo cual provoco una gran variación en los
datos obtenidos.
 Gracias a bibliografía, se ha determinado que la concentración de triglicéridos en la
sangre de los alumnos del curso está dentro de los rangos normales, a excepción de las
tres primeras muestras del análisis que ya se explicó anteriormente. Sin embargo estos
datos no pueden ser tomados con demasiada seriedad, ya que como es una práctica
hecha por alumnos, siempre hay una gran tendencia a cometer errores, por ello lo
recomendable es acercarse a un centro de salud para un correcto análisis de sangre
donde ya suele estar automatizado el proceso para una mayor exactitud.
 Las pruebas para determinar la concentración de triglicéridos en la sangre no
cuantifican al colesterol pues los triglicéridos son grasas, el colesterol no lo es. El
colesterol es una sustancia cerosa y sin olor.

CUESTIONARIO:

Qué clase de lípidos son los triglicéridos?

Son los constituyentes principales de los aceites vegetales y las grasas animales. Los
triglicéridos tienen densidades más bajas que el agua (flotan sobre el agua), y pueden ser
sólidos o líquidos a la temperatura normal del ambiente. Es un compuesto químico que
consiste de una molécula de glicerol y tres ácidos grasos (saturados o insaturados).

Cómo se transportan los triglicéridos en la sangre?

Son transportados del intestino al hígado por los quilomicrones formados por trigicéridos,
colesterol y apolipoproteínas los cuales dejan su contenido en el hígado para sintetizar
nuevamente Los cuales serán transportados hacia los tejidos extrahepaticos por lipoproteínas
de tipo VLDL (precursoras de las IDL y LDL).

Aplicaciones que tienen los triglicéridos en el organismo

 Los triglicéridos son una forma de almacenamiento de energía que se deposita en el

músculo y en el tejido adiposo y son gradualmente liberados y metabolizados entre las
comidas, de acuerdo con las necesidades de energía del organismo.
 Son buenos aislantes térmicos al almacenarse en el tejido adiposo.
 Es una de las principales fuentes de energía durante la degradación de las mismas.
 Brinda protección mecánica a los tejidos cubiertos por tejido adiposo.

Describa la ruta metabólica de la degradación de triglicéridos

 La β-oxidación es la eliminación secuencial de fragmentos bicarbonatados (dos

carbonos), desde el extremo carboxilo (entre Cα y Cβ) del ácido graso. Mediante una
 serie de pasos que por deshidrogenación, hidratación y oxidación darían lugar las
correspondientes moléculas de β-cetoácido, que finalmente se escindirían por tiolisis.
La idea fundamental es que al final de cada ciclo de β-oxidación, el Cβ del ácido graso
de partida se convertiría en el "Carboxilo" del siguiente ciclo (excepto por supuesto en
el último ácido graso de la ruta el Acetato).
 Las α-Oxidaciones supondrían es la eliminación secuencial del carbono carboxílico en
forma de CO2 (el enlace Cα-COOH), el Cα del ácido graso de partida se convertiría en el
"Carboxilo" del siguiente ciclo (se dan en ácidos grasos ramificados con grupos
metilos).
 Las ω-oxidaciones son muy minoritarias. Se dan en los peroxisomas. Suponen la
hidroxilación del extremo opuesto al carboxilo de un ácido graso, cuya oxidación
posterior generaría un nuevo extremo carboxílico.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

Disponible en línea

http://medmol.es/glosario/51/

http://www.clevelandclinic.org/health/sHIC/doc/S11117.pdf

http://trigliceridos.com.es/

http://www.ojocientifico.com/4607/que-son-los-trigliceridos

http://www.medicinapreventiva.com.ve/laboratorio/trigliceridos.htm