UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA

PRACTICA 7: CINÉTICA DE CULTIVOS POR LOTES

PROFESORA : Dra. Susana Gutiérrez Moreno

ALUMNO : Herrera Vivas, Adriana

CÓDIGO : 15100050

CORREO : adriana.herrera@unmsm.edu.pe
INTRODUCCIÓN
RESULTADOS
MESA 1
Tiempos DO Factor Dil DO real Biomasa(mg/mL) Ln(Biomasa)
0 0.109 2 0.218 0.618 -0.48126682
2 0.116 2 0.232 0.632 -0.45886588
4 0.24 4 0.96 1.36 0.3074847
6 0.26 14 3.64 4.04 1.39624469
8 0.11 20 2.2 2.6 0.95551145
10 0.14 20 2.8 3.2 1.16315081
12 0.135 20 2.7 3.1 1.13140211
14 0.109 30 3.27 3.67 1.30019166
Tabla 1: Medio completo (TSB) con agitación (150 RPM) a 37°c por 12 horas

Curva de crecimiento de P.aeruginosa en

TSB con agitación
4.5
4 4.04
3.5
Biomaasa (mg/mL)

3
2.5
2
1.5
1
0.5 0.632

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (Horas)

 Velocidad de Crecimiento Microbiano (µ):

𝐿𝑛𝑋 − 𝐿𝑛𝑋𝑜 𝐿𝑛(4.04) − 𝐿𝑛(0.632)

µ= = = 0.464
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 6−2

 Número de generaciones (Ng)

µ 0.464
= = 0.116
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 6 − 2

 Tiempo de duplicación (Td)

𝑙𝑛2 𝑙𝑛2
= = 1.494
µ 0.464
MESA 2
Tiempos DO Factor Dil DO real Biomasa(mg/mL) Ln(Biomasa)
0 0.068 2 0.136 0.536 -0.62362112
2 0.069 2 0.138 0.538 -0.61989672
4 0.15 4 0.6 1 0
6 0.069 30 2.07 2.47 0.90421815
8 0.103 20 2.06 2.46 0.90016135
10 0.053 20 1.06 1.46 0.37843644
12 0.084 20 1.68 2.08 0.73236789
14 0.06 30 1.8 2.2 0.78845736

Tabla 2: Medio completo (TSB) sin agitación a 37°c por 12 horas

Curva de crecimiento de P.aeruginosa en TSB

sin agitación
3

2.5 2.47
Biomasa (mg/ml)

1.5

0.5 0.538

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo ( horas)

 Velocidad de Crecimiento Microbiano (µ):

𝐿𝑛𝑋 − 𝐿𝑛𝑋𝑜 𝐿𝑛(2.47) − 𝐿𝑛(0.538)

µ= = = 0.381
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 6−2

 Número de generaciones (Ng)

µ 0.381
= = 0.096
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 6 − 2

 Tiempo de duplicación (Td)

𝑙𝑛2 𝑙𝑛2
= = 1.82
µ 0.381
MESA 3
Tiempos DO Factor Dil DO real Biomasa(mg/mL) Ln(Biomasa)
0 0.112 2 0.224 0.624 -0.47160491
2 0.115 2 0.23 0.63 -0.46203546
4 0.128 2 0.256 0.656 -0.42159449
6 0.195 2 0.39 0.79 -0.23572233
8 0.182 3 0.546 0.946 -0.05551271
10 0.219 3 0.657 1.057 0.05543471
12 0.235 3 0.705 1.105 0.09984533
14 0.243 3 0.729 1.129 0.12133229
Tabla 3: Medio mínimo (MMD) con agitación (150 RPM) a 37°c por 12 horas

Curva de crecimiento de P.aeruginosa en MMD

con agitación
1.2
1.105
1
Biomasa (mg/mL)

0.8
0.656
0.6

0.4

0.2

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (horas)

 Velocidad de Crecimiento Microbiano (µ):

𝐿𝑛𝑋 − 𝐿𝑛𝑋𝑜 𝐿𝑛(1.105) − 𝐿𝑛(0.656)

µ= = = 0.065
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 12 − 4

 Número de generaciones (Ng)

µ 0.065
= = 0.00813
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 12 − 4

 Tiempo de duplicación (Td)

𝑙𝑛2 𝑙𝑛2
= = 10.67
µ 0.065
MESA 4:
Tiempos DO Factor Dil DO real Biomasa(mg/mL) Ln(Biomasa)
0 0.109 2 0.218 0.618 -0.48126682
2 0.091 2 0.182 0.582 -0.54128483
4 0.115 2 0.23 0.63 -0.46203546
6 0.184 2 0.368 0.768 -0.26396555
8 0.169 3 0.507 0.907 -0.09761283
10 0.175 3 0.525 0.925 -0.07796154
12 0.154 3 0.462 0.862 -0.14850001
14 0.165 3 0.495 0.895 -0.11093156

Tabla 4: Medio mínimo (MMD) sin agitación a 37°c por 12 horas

Curva de crecimiento de P.aeruginosa en

MMD sin agitación
1
0.907
0.8
Biomasa (mg/mL)

0.6 0.63

0.4

0.2

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (horas)

 Velocidad de Crecimiento Microbiano (µ):

𝐿𝑛𝑋 − 𝐿𝑛𝑋𝑜 𝐿𝑛(0.907) − 𝐿𝑛(0.63)

µ= = = 0.091
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 8−4

 Número de generaciones (Ng)

µ 0.091
= = 0.023
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 8 − 4
 Tiempo de duplicación (Td)
𝑙𝑛2 𝑙𝑛2
= = 7.617
µ 0.091
MESA 5
Tiempos DO Factor Dil DO real Biomasa(mg/mL) Ln(Biomasa)
0 0.108 2 0.216 0.616 -0.48450832
2 0.099 2 0.198 0.598 -0.51416453
4 0.241 4 0.964 1.364 0.31042156
6 0.153 30 4.59 4.99 1.60743591
8 0.126 20 2.52 2.92 1.07158362
10 0.163 20 3.26 3.66 1.29746315
12 0.174 20 3.48 3.88 1.35583515
14 0.189 30 5.67 6.07 1.80335861
Tabla 5: Medio completo (TSB) con agitación (150 RPM) a 37°c por 12 horas

Curva de crecimiento de P.aeruginosa en

TSB con agitación
7

6
Biomasa (mg/mL)

5 4.99
4

1
0.598
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (horas)

 Velocidad de Crecimiento Microbiano (µ):

𝐿𝑛𝑋 − 𝐿𝑛𝑋𝑜 𝐿𝑛(4.99) − 𝐿𝑛(0.598)

µ= = = 0.5304
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 6−2

 Número de generaciones (Ng)

µ 0.5304
= = 0.1326
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑜) 6−2

 Tiempo de duplicación (Td)

𝑙𝑛2 𝑙𝑛2
= = 1.307
µ 0.5304
 VELOCIDAD DE NÚMERO DE
TIEMPO DE
MESA CRECIMIENTO GENERACIONES
DUPLICACIÓN (Td)
MICROBIANO ( µ) (Ng)
1 0.464 0.116 1.494
2 0.381 0.096 1.82
3 0.065 0.0081 10.67
4 0.091 0.023 7.617
5 0.5304 0.1326 1.307
Tabla 6: Parámetros cinéticos obtenidos en todas las mesas
DISCUSIONES
Al compararse la cinética de crecimiento entre el MMD y el TSB (Gráfico 6) se observa una
mayor producción de biomasa en el TSB. El medio de cultivo seleccionado es el TSB, el
cual fue reportado por Ramírez (2004) con buenos resultados para el cultivo de la
bacteria P. putida

Como ambos preinóculos fueron desarrollados de la misma manera, la gráfica 6 indica que
el TSB ostentó mejores características para el crecimiento de la bacteria por lo que registró
mayor concentración de biomasa en la muestra tomada en el tiempo dos. El TSB provee un
buen soporte de crecimiento para la P. aeruginosa. En este medio las peptonas proveen la
fuente de nitrógeno, la dextrosa provee la fuente de carbohidratos y energía, el cloruro de
sodio tiene su función en el balance osmótico y el fosfato dipotásico actúa como buffer

4.5

3.5

3
Biomasa (mg/mL)

2.5

1.5

0.5

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (horas)

TSB MMD

Gráfico 6: Cinética crecimiento de la Pseudomonas aeruginosa en el MMD y en el TSB

ambos con agitación

La velocidad de crecimiento es menor en el medio de cultivo TSB (Tabla 6). Es posible que
la menor velocidad máxima de crecimiento en el TSB se deba a que la bacteria se
encuentra ya cercana a la fase de desaceleración, esto es debido a la mayor concentración
de biomasa presente en el preinóculo del TSB con respecto al del MMD, por lo que su
velocidad de crecimiento máxima disminuye
En el medio MMD y TSB son similares las cantidades de glucosa en la composición del
medio, sin embargo, se aprecia, que en TSB, comparado con el MMD, es necesario menor
tiempo para alcanzar la fase estacionaria y se produce una mayor biomasa bacteriana,
esto podría deberse a la dificultad que tienen los microorganismos en MMD para adquirir
los nutrientes necesarios para su crecimiento ya que este medio contiene los nutrientes
mínimos indispensables para el crecimiento de una colonia, mientras que con TSB deben
activarse menos vías metabólicas para la utilización de los nutrientes, este medio
contiene lo necesario para un buen crecimiento.

Las cepas del género Pseudomonas pueden crecer en un medio mínimo, químicamente
definido con iones de amonio o nitrato como fuente de nitrógeno y un solo compuesto
como única fuente de carbono y energía. Los medios de cultivo usados para el
crecimiento de Pseudomonas requieren una única fuente de carbono y energía
combinada con minerales. En general, los compuestos esenciales encontrados para el
cultivo de las Pseudomonas son el cobre, el magnesio y una fuente de amonio (Mateles y
Battat, 1974).

En el caso de la cinética de crecimiento de la P.aeruginosa con agitación y sin agitación

(Gráfico 7) podemos observar que agitación se obtuvo una mayor cantidad de biomasa en
el tubo con agitación.

4.5
4
3.5
Biomasa (mg/mL)

3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (horas)

TSB sin agitación TSB con agitación

Gráfico 7: Cinética crecimiento de la Pseudomonas aeruginosa en TSB con agitación y TSB

sin agitación

La agitación es un factor importante ya que se trata de una bacteria aerobia, una

aireación adecuada debe proporcionar el oxígeno y dióxido de carbono requerido por la
población microbiana
Se observó que la agitación es un factor que incide en forma positiva sobre el crecimiento
de Pseudomonas aeruginosa, al permitir el paso de la luz al fondo del recipiente, actuar
como aislante térmico y formar una estratificación en la temperatura del medio de cultivo
(Eliach, 2004)

En la superficie del tubo de la P.aeruginosa en el medio TSB sin agitación se formó una
capa compacta y densa, esto debido al crecimiento competitivo de las mismas, es por
esto que la bacteria necesita de la agitación para que las células en movimiento no se
agrupen y tengan mayor contacto con el oxígeno, lo que beneficia el crecimiento y la
productividad del cultivo (Richmond et al.1990)

Podemos ver que la fase exponencial para los dos ensayos, inicia en el tiempo 2. (Gráfico
7) Esta etapa se caracteriza porque los nutrientes se hallan en exceso y la velocidad de
crecimiento está limitada solo por las propiedades intrínsecas del organismo. Durante
esta fase los parámetros cinéticos (tabla 6) del medio TSB con agitación y sin agitación
presentan diferencias como es la cantidad máxima de biomasa alcanzada en el medio con
agitación con respecto al que no tuvo agitación. Igualmente se determinó un tiempo de
duplicación menor y una µ mayor (tabla 6), esto podría deberse a que una agitación de
150 rpm permite que un mayor número de células puedan exponerse a la luz
favoreciendo un mejor proceso fotosintético, adicionalmente se da un intercambio
gaseoso entre el medio ambiente y el medio de cultivo, induciendo la liberación del
oxígeno generado por la respiración (Richmond et al, 1990) lo que disminuye la pérdida
de biomasa por esta causa

En el caso de usar una velocidad más alta, no hubiera favorecido el crecimiento debido
posiblemente a que las altas velocidades indujeron un fenómeno conocido como vórtex
que genera un efecto de cizalla (Doran, 1988) el cual hace que se rompan las células
contra las paredes del recipiente que las contiene
CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es la utilidad de los parámetros cinéticos?

Los parámetros cinéticos de crecimiento microbiano son las herramientas básicas

para escalar los procesos biotecnológicos evaluados en de laboratorio, puesto que
permiten predecir el desarrollo de la fermentación y evaluar los rendimientos y las
productividades en los procesos.
Los más importantes son:
 La velocidad específica máxima de crecimiento (μmax)
 La constante de afinidad por el sustrato (Ks)
 Los coeficientes de rendimiento (Yxs, Yxp, etc.)
Un efecto positivo sobre los parámetros cinéticos de crecimiento, permitiría
disminuir los tiempos y aumentar los rendimientos y las productividades de
procesos industriales como, la producción de cerveza, vino, lácteos fermentados y
un sin número de procesos biotecnológicos tanto de la industria alimentaría como
farmacéutica

2. Resuelva los siguientes ejercicios

a. Escherichia coli se desarrolla en un medio de cultivo a 37°C. Se determinó el
peso seco (g/L) a diferentes tiempos

PESO SECO
TIEMPO (min.) (g/L)
30 0.01
60 0.03
90 0.09
120 0.12
150 0.25
180 0.35
210 0.45
240 0.5
300 0.55
330 0.56
 Calcule la tasa específica de crecimiento y el tiempo de duplicación

 Para hallar µ:
𝐿𝑛(0.55) − 𝐿𝑛(0.03)
µ= = 0.016𝑔/𝑚𝑖𝑛
240 − 60

 Para hallar tiempo de duplicación:

𝐿𝑛(2)
𝑇𝑑 = = 43.32𝑚𝑖𝑛
0.016

b. Calcule la tase específica de crecimiento, número de generaciones y el tiempo

medio de generación del siguiente cultivo bacteriano:
Tiempo Número de 2n Población Log10Nt
divisiones (No2 )n

0 0 20=1 1 0.000
20 1 21=2 2 0.301
40 2 22=4 4 0.602
60 3 23=8 8 0.903
80 4 24=16 16 1.204
100 5 25=32 32 1.505
120 6 26=64 64 1.806

Tasa específica de crecimiento

1.806 − 0.301
𝑢= = 0.015𝑚𝑔/𝑚𝑖𝑛
120 − 20

Número de generaciones
𝑛 = 3.3 (log 64 − log 1) = 5.96
 Tiempo medio de generación

𝐿𝑛(2)
𝑇𝑑 = = 46.21𝑚𝑖𝑛
0.015

c. Una bacteria creciendo en condiciones óptimas duplica su biomasa cada 45

minutos. Si un medio de cultivo con 0.5% de glucosa se inocula con 10mg/L de
biomasa.
1. Calcule la cantidad de biomasa que se producirá en mg/L a las 4 horas, a las
8 horas y a las 12 horas de incubación

 Hallar la tasa específica de crecimiento

𝐿𝑛(2)
𝑇𝑑 = = 45𝑚𝑖𝑛
µ
µ = 0.015 mg/min

 Cantidad de biomasa en 4horas = 240 minutos

10𝑚𝑔 𝑚𝑔
+ (0.015 𝑥240min) = 13.6𝑚𝑔/𝐿
𝐿 𝑚𝑖𝑛

 Cantidad de biomasa en 8 horas =480 minutos

10𝑚𝑔 𝑚𝑔
+ (0.015 𝑥480min) = 17.2𝑚𝑔/𝐿
𝐿 𝑚𝑖𝑛

 Cantidad de biomasa en 12 horas =720 minutos

10𝑚𝑔 𝑚𝑔
+ (0.015 𝑥720min) = 20.8𝑚𝑔/𝐿
𝐿 𝑚𝑖𝑛
2. Si la concentración final de azúcares en el medio de cultivo es de 100mg/L;
calcule cuál es su rendimiento de biomasa
Solución de glucosa= 0.5% = 0. 5g/100ml = 5000mg/L
Biomasa = 100mg/L

𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑎
𝑌=
𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑎
100𝑚𝑔/𝐿
𝑌= = 0.02𝑚𝑔𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠/𝑚𝑔𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎
5000𝑚𝑔/𝐿
 d. Si la concentración celular al inicio de un cultivo es 104 cel/mL

BIBLIOGRAFÍA
 9.1. Parámetros Cinéticos - Enzimática UPIIG. Retrieved from
https://sites.google.com/site/enzineticupiig/parametros-cineticos

 Bedoya Pérez, J., & Hoyos Sánchez, R. (2010). EFECTO DE LA RELACIÓN AGITACIÓN-
AIREACIÓN SOBRE EL CRECIMIENTO CELULAR Y LA PRODUCCIÓN DE AZADIRACTINA
EN CULTIVOS CELULARES DE AZADIRACHTA INDICA A. JUSS, 63(0304-2847).
 Díaz Cortes, V., & Ordoñez Ovalle, C. (2006). Evaluación del pH y la agitación del
medio más adecuada para el crecimiento de Dunadiella salina en condiciones de
laboratorio.

 Eliach, J. Bourges, G. Duré, L. Medina, M. Lara, M. 2004. Incidencia de la agitación

en el crecimiento microalgal en birreactores. Facultad de Ciencias Exactas,
Ingeniería y Agrimensura. Universidad Nacional de Rosario. Buenos aires. Argentina

 EZAPATA M, J., & HOYOS R, M. (2005). KINETIC PARAMETERS OF GROWTH OF

Saccharomyces cerevisiae AFFECTED BY A VARYING MAGNETIC FIELD OF LOW
INTENSITY AND HIGH FREQUENCY. VITAE, REVISTA DE LA FACULTAD DE QUÍMICA
FARMACÉUTICA, 39-41.

 Mateles, R.I. y Battat, E. 1974. Continuous Culture Used for Media Optimization.
Applied and Environmental Microbiology. 28: 901-905.

 Richmong A, Lichtengberg E, Sthal B, Vonshak A. 1990. Quantitative assessment of

the major limitation on productivity of Spirulina Platensis in open raceways. J.Appl.
Phycol, 2, 195

 Tripathi, V.N. y Srivastava, S. 2006. Ni2+-uptake in Pseudomonas putida strain S4: a

possible role of Mg2+-uptake pump. J. Biosci. 31: 61-67