OBJETIVO GENERAL:

 Utilizar pruebas especificas para la determinación de cuerpos cetónicos en la orina

desde el punto de vista bacteriológico.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

 Determinar la presencia de cuerpos cetonicos en la orina, mediante pruebas

cualitativas para cada uno de ellos.

 Familiarizarse con algunos protocolos empleados en laboratorio clínico para el

reconocimiento de cuerpos cetonicos.
 IDENTIFICACIÓN DE CUERPOS CETONICOS EN ORINA

Los cuerpos cetonicos son los acidos acido acéticos, acetona y el acido hidroxibutirico.
En la cetosis hallamos un aumento de estas sustancias en la sangre y en la orina. Bajo
buenas condiciones de salud, los cuerpos cetonicos se forman en el higado y son
completamente metabolizados de tal manera que solo cantidades insignificantes
aparecen en la orina. Por el contrario, en casos de diabetes, inanición, vómitos con
deshidratación y después de la exposición al frió y/o ejerció vigoroso, los cuerpos
cetonicos pueden encontrarse en cantidades apreciables en la orina, lo cual permite su
determinación cualitativa.

La determinación de acetona (método de imbert) se fundamenta en la formacion de

penta cianuro con el derivado isonitrado de la acetona, la determinación de acido aceto
acético (método de Gerhdt), se basa en la aparición de una coloración roja vinosa con el
cloruro ferrico y en el método de Hart, el acido B- hidroxibutirico es transformado en
acetona, lo cual se identifica mediante el reactivo de Imbert.

MATERIALES Y REACTIVOS

 2 tubos de ensayo
 1 gradilla.
 2 pipetas.
 1 beaker de 250 ml
 1 capsula de porcelana
 1 pinza para crisol
 1 pinza para tubo de ensayo
 Acido sulfúrico H2SO4
 Agua destilada.
 Orina de diabético
 Cloruro ferrico al 10%
 Amoniaco
 Acido acético glacial
 Peroxido de hidrogeno al 10%
 Nitroprusiato de sodio al 5% disuelto en acido acético al 50%
 NORMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LOS REACTIVOS

ACIDO ACÉTICO GLACIAL:

 Sustancia corrosiva.
 Inflamable.
 Provoca quemaduras.
 Evitar respirar gases humo y vapores.
 En caso de contacto con los ojos, lavar con agua y acudir inmediatamente al medico.

AMONIACO:

 La exposición a niveles altos puede producir irritación y quemaduras en la piel,

boca, garganta, pulmones y ojos.
 A niveles muy altos provoca la muerte
 Corrosivo

PEROXIDO DE HIDROGENO:

 Corrosivo
 Produce quemaduras
 Destrucción de tejido cutáneo

CLORURO FERRICO:

 Corrosivo
 Inflamable
 Irrita ojos y piel
 Al respirarlo puede causar tos y respiración con silbido
 Contacto prolongado puede causar decoloración de los ojos
ACIDO SULFURICO:
 Produce graves quemaduras
 En contacto con los ojos lavar inmediatamente
 Nunca verter el agua con este producto
 Corrosivo

NITROPRUSIATO DE SODIO:

 Toxico por ingestión.

 Tras inhalación se debe tomar aire fresco
 En contacto con los ojos se debe lavar, con abundante agua manteniendo los
parpados abiertos
 En contacto con la piel lavar con abundante agua y eliminar la ropa contaminada y
por ingestión provoca vómitos.

PROCEDIMIENTO

DETERMINACIÓN DE ACETONA

TOMAR 1ml de orina

AGREGAR 0.5 ml de nitroprusiato de

sodio

ADICIONAR 0.5 ml de amoniaco

OBSERVAR Anillo rojo violáceo

 DETERMINACIÓN DEL ACIDO ACETOACETICO

TOMAR 5ml de orina

AGREGAR 5 gotas de cloruro ferrico en

presencia de acido aceto acético

OBSERVAR Coloración rojo vinosa

DETERMINACIÓN DEL ACIDO B-HIDROXIBUTIRICO

TOMAR 10ml de orina y 10 de agua

MEZCLAR Capsula de porcelana

ACIDIFICAR 5 gotas de acido acético

CALENTAR Hasta reducir volumen a la mitad

AGREGAR 10 ml de agua a la capsula

TRANSFERIR Partes iguales a dos tubos de

ensayo

Control

AGREGAR 1 ml de peroxido al 10 % aun

tubo

CALENTAR Baño Maria por 5 mn

REALIZAR Prueba de imbert a ambos tubos

 RESULTADOS

1. DETERMINACION DE ACETONA

2. DETERMINACIÓN DEL ACIDO ACETOACETICO

3. DETERMINACIÓN DEL ACIDO B-HIDROXIBUTIRICO

CONTROL

CONTROL
 TABLA DE RESULTADOS

DETERMINACION DE ACETONA

TUBO SUSTANCIA REACTIVOS COLORACION RESULTADO

Se formaron
0.5 ml de dos capas la
nitroprusiato superior de un
de sodio color rojo
1 5 ml de orina + Anillo rojo formando un
de diabético 0.5 ml de anillo y la
amoniaco inferior de un
color amarillo

Prueba (+)

DETERMINACION DEL ACIDO ACETOACETICO

TUBO SUSTANCIA REACTIVOS COLORACION RESULTADO

Se formaron
dos fases el
5 ml de orina Cloruro ferrico color cambia
1 de diabético en presencia de Rojo vinoso dando un color
acido acético rojo vinoso con
precipitado

Prueba (+)

DETERMINACION DEL ACIDO B- HIDROXIBUTIRICO

TIEMPO
TUBO MEZCLA REACTIVOS EMPLEADO ENFRIAR Y
PREPARADA EN BAÑO OBSERVAR
MARIA
Se forma doble
fase en la
superior es
10 ml de agua 1 ml de amarillo y en el
10 ml de orina peróxido de 5 mn inferior naranja
con 5 gotas de hidrogeno al pálido lo que
1 acido acético + 10% indica presencia
10 ml de agua de acido B-
hidroxibutirico

TUBO DE CONTROL (SIN PEROXIDO DE HIDROGENO)

Presento una coloración mas pálida o tenue lo que indica que el peroxido de hidrogeno
acelera la formacion del anillo con la fase superior
 ANÁLISIS DE RESULTADO

DETERMINACION DE ACETONA:
Todos los cuerpos cetonicos son formados por la unión de dos acetil coenzima A así:

Como era de esperarse el resultado dio positivo ya que se experimento con orina de
diabético y en esto se acumula los acetil coenzima A saturándose en el ciclo de krebs y
estos la vía para producir cuerpos cetonicos.
Podemos decir que fue positivo para la presencia de cetonas ya que se formaron dos
capas la superior de color rojo (anillo rojo) de espesor considerable debido a la
concentración de reactivo y la inferior de color amarillo, aquí se dio la formacion de un
ferropentacianuro con el derivado isonitrado de la acetona

DETERMINACION DEL ACIDO ACETOACETICO:

Para la determinación del acido acetoacetico, utilizamos el método de Gerhdt, que

consiste en la aparición de una coloración roja vinosa.
El resultado para esta fue positivo ya que se produjo la coloración roja vinosa con el
cloruro ferrico presentando un pequeño precipitado

DETERMINACION DEL ACIDO B- HIDROXIBUTIRICO

No existe una prueba que pueda demostrar al inastante la presencia de acido

B- HIDROXIBUTIRICO, siempre se hace la prueba de Hart para que el acido sea
transformado en acetona lo cual es identificado con el reactivo de imbert.
Esta prueba dio positiva para acido B- HIDROXIBUTIRICO en ella se presento una
doble fase en la superficie presento color amarillo y en la inferior naranja pálido
El tubo control presento una coloración pálida o tenue, esto indica que el peroxido de
hidrogeno acelera la formacion del anillo en la fase superior.

CUESTIONARIO

1. Que otro tipo de sustancias pueden determinarse en la orina por un metabolismo

anormal de lípidos

2. que es cetosis y cetonuria:

Cetosis:
Estado en el que hay una acumulación de cuerpos cetonicos en los tejidos y líquidos
corporales. Los signos son nauseas, vómitos y dolor gástrico, esto puede conducir al a
cetoacidosis es decir hay un aumento en un organismo de acetona y de sus compuestos
derivados, con su significación patológica muy diversa pero que suele observarse en la
descompocision de una diabetes

Cetonuria:
Aumento de cuerpos cetonicos en la orina.

RECOMENDACIONES:
Ya todas las recomendaciones que debimos hacer las hicimos, por eso hasta el momento
no tenemos mas sugerencias.

CONCLUSIONES:
Para concluir es importante la determinación de cuerpos cetonicos tanto en la sangre
como en la orina ya que una alta concentración de estos en una persona puede acarrear
ciertas patologías en su cuerpo tales como acidosis y cetonuria que van a llevar a otras
enfermedades mas graves.
 LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA Nº7 CUERPOS CETONICOS

JONATAN ENRIQUE GRACIA MATURANA

ELÍAS JOSÉ SUÁREZ RESTREPO
CARLOS MANUEL PAYARES
DARIO JOSE PACHECO
LEA MARGARITA OVIEDO

YURI PARDO P.

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRÍCOLAS
PROGRAMA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA
MONTERÍA 2009